Селективная среда

Бактериологическое исследование. Выделение чистой культуры и ее идентификация необходимы для подтверждения диагноза листериоза. Листерии растут на простых питательных средах, но более интенсивный рост отмечается на кровяном агаре или средах, обогащенных глюкозой, глицерином, дрожжевым экстрактом, сывороткой, печеночной тканью. Материал засевают на плотные среды. Для подавления роста сопутствующих микроорганизмов используют специально разработанные селективные среды с антибиотиками и/или красителями, хлоридом лития, фенилэтано-лом (агары Оксфордский, PAL САМ яла др.). Те же добавки используют в составе бульонных сред для обогащения исследуемого материала (накопление листерий ведут при 30 °С в течение 24 — 48 ч). Иногда используется также метод холодового обогащения (материал выдерживают при 4 °С в течение 10 — 50 сут). Посевы на плотных средах инкубируют при 37 С до 7 сут. [c.179]

Бактериологическое исследование. Гной, отделяемое слизистой оболочки, мочу, мокроту, спинномозговую жидкость сеют в чашку Петри с 5%-м кровяным агаром (лучше использовать дефибрини-рованную баранью кровь) и в пробирку с сахарным бульоном. Для выделения стрептококков из контаминированного материала используют селективные среды (в кровяной агар и среду накопления вводят антибиотики — колистин, налидиксовую кислоту, которые подавляют рост сопутствующих микроорганизмов). Хотя стрептококки дают рост на воздухе, посевы лучше инкубировать в анаэробной атмосфере при 37 °С. Инкубация в атмосфере СО2 стимулирует рост бета-гемолитических стрептококков, не относящихся к группе А. С этими целями применяют анаэростат или эксикатор с горящей свечой. [c.110]

В уравнении(188) величину —усредненную степень черноты пламени — можно применять с известными оговорками, так как, вообще говоря, для селективной среды [c.299]

Приготовление селективных сред. Предварительно готовят растворы А и ГТ. [c.311]

Селективную среду ГАТ (гипоксантин, аминоптерин, тимидин) готовят на основе ГС с добавлением 5 мл растворов А и ГТ к 500 мл исходной среды. Селективную среду ГТ (гипоксантин, тимидин) готовят на основе ГС с добавлением 5 мл раствора ГТ к 500 мл исходной среды. [c.311]

В связи с этим для успеха дальнейших поисков продуцентов новых антибиотиков, в том числе, возможно, и полиеновых, большое значение имеют работы по созданию селективных сред (Лаврова, 1971 Преображенская, 1972 Свешникова и др., 1976 и др.), повышающих частоту выделения редких форм актиномицетов, плохо растущих на питательных средах обычно применяемых для выделения актиномицетов из природных субстратов. [c.104]

Из трансформированных клеток, выросших в жидкой селективной среде (т. е. из клеток, содержащих плазмиду), вьщеляют плазмидную ДНК. [c.248]

Пересев на селективную среду [c.258]

Посев на селективную среду (например, с КМЦ), отбор по специфическому признаку (целлюлазной активности, взаимодействию со специфическими антителами, гибридизации с меченым фрагментом целлюлазного гена) [c.103]

Используют мутанты микроорганизмов, которые утратили некоторые ферменты синтеза одних аминокислот, но приобрели способность интенсивно синтезировать другие. Ауксотрофные мутанты отбирают на селективных средах после воздействия на бактериальные клетки ультрафиолетовым или рентгеновским излучением или же за счет химического мутагенеза. [c.23]

Молоко животных (коз, овец, коров) центрифугируют и 0,1 — 0,2 мл сливок засевают в чашки с печеночным агаром, содержащим генциановый фиолетовый или другую селективную среду. [c.129]

Бактериологическое исследование. Материал засевают на специальные плотные среды непосредственно или из транспортной, накопительной среды. Для выделения чистых культур используют анаэробный кровяной агар, обогащенные среды с настоем мозга и факторами роста и/или селективные среды (анаэробный кровяной агар с желчью и канамицином). Посевы инкубируют при 37 °С [c.183]

Хром-кальций-никельфосфатный катализатор дегидрирования олефинов ИМ-2204, обладающий наивысшей активностью и селективностью среди известных аналогов, выпускается в виде цилиндров диаметром 5 мм и длиной 8 мм. Для увеличения механической прочности порошок катализатора перед формованием смешивают с графитом, который до начала работы выжигают кислородом воздуха с постепенным подъемом температуры водяным паром до 600 °С, а поверхность катализатора несколькими циклами обрабатывают паровоздушной смесью при 650—680 °С для формирования оптимальной пористой структуры. [c.143]

Слияние клеток. Смешивают суспензии клеток миеломы и селезенки в соотношении 1 10 и центрифугируют в течение 8 мин при 800 об/мин. Супернатант полностью сливают. Осадок встряхивают и по каплям добавляют 1 мл 50%-ного раствора ПЭГ с ДМСО в течение 1 мин при постоянном встряхивании пробирки. Клетки центрифугируют в следующем режиме разгоняют центрифугу до 1000 об/мин и тут же выключают. После остановки центрифуги вынимают пробирку с осевшими клетками и суспендируют клетки встряхиванием в том же растворе ПЭГ. К суспензии клеток добавляют по каплям 1 мл бессывороточной среды в течение 1 мин, затем каждую последующую минуту удваивают объем, добавляя 2, 4, 8 и 16 мл соответственно при постоянном встряхивании пробирки до конечного объема 32 мл. Клетки центрифугируют в обычном режиме в течение 8 мин при 800 об/мин. Супернатант отбрасывают, клетки суспендируют в селективной среде ГАТ в концентрации 10 —5-10 клеток в 1 мл. Полученную суспензию клеток распределяют в 96-луночные микропланшеты по 200 мкл в лунку (5—10 микропланшетов). Микропланшеты помещают во влажный СОг-инкубатор с 5% СО2. [c.312]

Для отбора объектов продуценты выращивают на селективной среде, содержащей подходящий аналог или антиметаболит, которые не включаются в обмен веществ (в частности, аналоги аминокислот не включаются в состав белков), что ведет к подавлению роста организма. Выжившие мутанты обладают дефектами в механизме регуляции актргености фермента по принципу обратной связи и поэтому служат важными объектами в обеспечении сверхсинтеза целевого продукта. [c.35]

Предварительно клонированные гены вводят в клетку животных различными путями. Суть одного из них состоит в трансформации клеток требуемым геном, соедршенным с одним из генов, для которых осуществляется селекция. Для идентификации и последующего размножения клеток, содержащих интегрированную ДНК, был разработан метод, получивший название метода маркера. Примером может служить метод получения клеток, дефектных по синтезу фермента тимидинкиназы (ТК -клетки). Такие клетки трансформировались фрагментами ДНК вируса герпеса (HSV), содержащего ген фермента ТК, и после трансформации они приобретали способность к синтезу фермента на селективной среде, т.е. становились ТК -клетками. Клетки ТК легко отличаются от клеток TK , поскольку способны расти на средах с ами-ноптерином (ингибитор, блокирующий определенные стадии биосинтеза нуклеотидов), гипоксантином и тимидином. Следовательно, в данном случае для трансформации клеток животных бьши использовапы гибриды бактериальных плазмвд с геном ТК из вируса герпеса. Для этого предварительно проводили клонирование и идентификацию генов в клетках Е. соИ и затем полученная рекомбинантная плазмида вводилась в ТК -клетки. Анализ мето- [c.125]

Лаврова Н. В. Использование селективных сред со стрентомицниом для выделения продуцентов новых антибиотиков.— Антибиотики, 1971 т. 16, № 9, с. 781. [c.210]

Позитивный отбор (Positive sele tion) Отбор клеток по наличию в них маркерного гена, благоприятствующего росту на селективной среде (например, среде с антибиотиком). [c.556]

Сорбенты с привитыми фазами характеризуются параметрами, определяющими удерживание и селективность. Среди таких параметров наиболее важными яв,г1яются тип и концентрация привитого органического модификатора и концентрация оставшихся на поверхности силикагеля силанольных групп. Для приготовления привитой фазы поверхность исходного силикагеля химически обрабатывают так, чтобы обеспечить максимальную концентрацию силанольных групп. Типичное значение достигает 7—9 мкмoль/м , что соответствует яг 4—5 силанольным группам на 1 нм поверхности силикагеля. В случае монофункциональных реагентов степень конверсии поверхностных силанольных групп А он, определяемая соотношением Л он=С он= = С/Сон, колеблется от 10 до 60%. Верхний предел определяется размером молекул органического модификатора и их способностью прививаться к силанольным группам. Наличие остаточных [c.234]

Проблема была решена, когда удалось найти промотор гена нопалин-син-тазы и ввести его в Т.-плазмиду. Регуляторные системы гена — нопалин синтазы — способствовали экспрессии генов устойчивости к антибиотикам, и отбор трансформированных клеток оказался возможным на селективных средах, содержащих антибиотики. [c.505]

Бактериологическое исследование. Для выделения энтерококков применяют посевы на 5%-й кровяной агар, а для материалов, контаминированных сопутствующей микрофлорой, — на селективные среды, содержащие азид натрия или антибиотики (колистин, налидиксовую кислоту, цефалексин, азтреонам). Для обогащения материала применяют посев на сахарный бульон (МПБ + + 0,2 % глюкозы). Посевы инкубируют на воздухе при 37 °С 24 — 48 ч. На кровяных средах энтерококки образуют мелкие или средних размеров округлые колонии серо-белого цвета с ровным краем, иногда с зоной р-гемолиза Е. fae alis) или а-гемолиза. На жидкой среде дают диффузное помутнение. [c.115]

Бактериологическое исследование. Менингококк растет на специальных питательных средах с нативным белком (бульон или агар с сывороткой, асцитической жидкостью или кровью). Для исследования материала, обильно контаминированного нормофлорой (мазки из носоглотки), применяют посев на плотные селективные среды с антибиотиками (ристомицином, ванкомицином, ко-листином и нистатином). Спинномозговую жидкость лучше сеять после центрифугирования (3000 об/мин в течение 5 мин). Засевают 2— 3 капли полученного осадка на поверхность подогретой пи- [c.117]

Мочу для выделения уринокультуры асептически берут в конце лихорадочного периода катетером и центрифугируют. Из осадка делают посевы в чашки с печеночным агаром, содержащим генциановый фиолетовый в разведении 1 200 ООО для подавления роста грамположительной микрофлоры. Уринокультуры удается выделить в 9 — 14 % случаев. Применяют и другие селективные среды. [c.129]

Бактериологическое исследование. Взятый материал засевают на МПА, кровяной агар, МПБ с 3 — 5 % глицерина. Для подавления роста сопутствующей микрофлоры используют селективные среды, содержащие красители — кристаллический фиолетовый (1 200 000), бриллиантовый зеленый (1 1 000 000) и др., а также антибиотики (гентамицин, колистин и др.). Для выделения возбудителя мелиоидоза можно использовать среду МакКонки с добавлением колистина или без него. [c.132]

Бактериологическое исследование. При бактериологической диагностике коклюша и паракоклюша производят посев мокроты методом кашлевых пластинок . Для этого в момент приступа кашля перед ртом больного на расстоянии 8—12 см помещают открытую чашку Петри с питательной средой (картофельно-глицериновый агар по Борде, молочно-кровяной или казеиновоугольный агар) и выдерживают в течение 6 — 8 кашлевых толчков. Чашку закрывают и помещают в термостат при 37 °С. Если кашель отсутствует, отделяемое слизистой оболочки с задней стенки глотки собирают клювовидным тампоном через рот или тампоном через нижние носовые ходы и сеют на чашки с указанными выше питательными средами. При взятии материала следует избегать попадания на тампон материала (микрофлоры) со слизистой оболочки щек, языка, миндалин (для этого используют шпатель). Следует учитывать также, что на сухом ватном тампоне бордетеллы быстро отмирают в результате высушивания и действия токсичных для них компонентов ваты. Если нет возможности немедленно посеять материал, его берут тампоном, смоченным в ИХН. Материал доставляют в лабораторию как можно быстрее и засевают на селективные среды в течение 2 ч после взятия. При посеве взятый тампоном материал тщательно растирают по поверхности агара (от периферии к центру чашки) для получения хорошо изолированных колоний. Такое исследование проводят дваж- [c.134]

Бактериологическое исследование. Биопсийный и другой материал засевают на специальные среды (например, угольно-дрожжевой агар с -цистеином и пирофосфатом железа, селективные среды с антибиотиками, шоколадный агар и др.). Питательной основой этих сред, как правило, является дрожжевой экстракт и а-кетоглютарат. Активированный уголь необходим для связывания токсических продуктов, образующихся в процессе роста культур, и оптимизации показателя поверхностного натяжения. Для придания селективных свойств в состав сред для легионелл обычно вводят 3 антибиотика (полимиксин В, анизомицин и ванко-мицин или цефомандол), которые задерживают рост грамположительных бактерий, грибов и грамотрицательных бактерий соответственно. Посев желательно делать одновременно на селективную и неселективную среду, так как встречаются чувствительные к антибиотикам штаммы возбудителя. [c.137]

Исследованию на микробоносительства подвергаются переболевшие брюшным тифом и паратифом, а также работники детских учреждений, системы питания и водоснабжения. Перед взятием испражнений им дают выпить натощак 100 мл 30%-го раствора магния или натрия сульфата (слабительные и желчегонные средства). Испражнения для исследования собирают не ранее чем через 2 — 4 ч после приема слабительного, засевают на селективную среду (например, агар Плоскирева) и одновременно в среду накопления, из которой после 6-часовой инкубации при 37 °С материал пересевают на среду Плоскирева (как фекалии от больных). Дальнейшее исследование проводится так же, как указано выше. [c.148]

Бактериологический и биологический методы исследования. Для окончательного подтверждения диагноза производят посев на питательные среды и заражение животных. Материал сеют в чашки с МПА, в пробирки с МПБ (pH 7,2 —7,6), кровяной агар и помещают в термостат при 37 °С. Контаминированные образцы (материал из внешней среды, от животных, из старых трупов) подвергают обработке для уничтожения вегетативных форм микроорганизмов одним из способов а) прогревают при 63 °С в течение 15 мин б) заливают 95%-м этанолом 1 1 и обрабатывают при комнатной температуре 30 — 60 мин (плотные материалы предварительно эмульгируют в деионизированной воде 1 2). В качестве селективной среды для исследования контаминированных проб можно использовать питательный агар с полимиксином В, лизо-цимом, ЭДТА и ацетатом таллия РЬЕТ-атар). Одновременно с посевами материалом заражают путем подкожного введения двух белых мышей. [c.187]

Бактериологическое и биологическое исследование. После микроскопии материал засевают на специальные жидкие и плотные среды (анаэробный кровяной агар, среда Вильсона —Блера, среда Китта—Тароцци, желточная среда). Для приготовления неселективной среды для клостридий используют в качестве основы агар для бруцелл с 5 % бараньей крови, колумбийский или сердечно-мозговой агары, в которые добавляют дрожжевой экстракт, витамин К и гемин. В качестве селективных сред (для контаминированных образцов) можно использовать анаэробный кровяной агар с добавлением неомицина или фенилэтилового спирта. Перед посевом плотные материал гомогенизируют (растирают в стерильной ступке со средой накопления) и делят на две части, одну из которых прогревают в водяной бане при 80 °С в течение 10 мин (для уничтожения вегетативных клеток сопутствующих микроорганизмов). Обе части материала исследуют одновременно. В качестве альтернативного метода (особенно при подозрении на присутствие термочувствительных штаммов С. perfringens) используют обработку материала этиловым спиртом, к 1,0 мл исследуемого гомогената или экссудата добавляют такое же количество 95%-го этанола и перемешивают их при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего этим материалом засевают указанные выше питательные среды. [c.191]

Метод фильтрации основан на способности подвижных кампилобактеров активно проходить через мембраные фильтры с порами диаметром 0,45 — 0,65 мкм. Преимуществом метода является возможность использования неселективных сред (например, применяют кровяной агар). Фильтр укладывают на поверхность плотной среды в чашке, наносят на него 10— 15 капель суспензии фекалий и инкубируют чашку при 37 °С в течение 1 ч, после чего фильтр осторожно снимают, а чашку продолжают инкубировать в микроаэрофильных условиях. Проникшие через фильтр клетки кампилобактеров образуют на поверхности среды колонии. Чувствительность метода невысока (около 10 КОЕ/мл), поэтому его рекомендуют сочетать с посевом на селективные среды или другими методами исследования. [c.220]

Важным отличительным признаком С. jejuni является гидролиз гиппурата натрия. Для проведения теста в 0,4 мл 1% ГО водного раствора гиппурата суспензируют полную петлю испытуемой культуры и инкубируют взвесь в течение 2 ч при 37 °С, затем к ней добавляют 0,2 мл 3,5%-го раствора нингидрина в ацетон-бутано-ловой смеси. При положительном результате через 10 мин инкубирования в тех же условиях появляется пурпурное окрашивание взвеси. В обычных исследованиях, если культура, выросшая при 42 °С на селективной среде, имеет типичную морфологию, окси- [c.220]

На селективной среде погибают партнеры первой системы четвертая пара клеток не растет в культуре, поскольку оба партнера не пролиферирующие. Гибридные клетки третьей пары немногочисленны и слабо растут, они вскоре погибают (к тому же они отличаются по морфологии вырастающих колоний от второй пары клеток). Гибридные клетки второй системы быстро растут при потере хромосом у непролиферирующего партнера (В-лимфоциты). Поэтому формируются две группы гибридом — секретирующие и несекретирующие 1д. Первые медленно растут и поэтому возникает проблема — не потерять их в последующих операциях. [c.575]

Таким образом, особенности гибридизации заключаются в том, что неслившиеся клетки селезенки лишены способности к длительному культивированию (они исчезают), тогда как миеломные клетки, напротив, за счет своих потенций к росту могут вытеснить гибридные клетки. Чтобы этого не произошло, используют селективные среды. Так, отбирают миеломного родителя с генетическим дефектом по ГГФРТ, не использующего экзогенный гипоксантин [c.575]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология