Трипсин кинетика

При изучении кинетики гидролиза п-нитроанилида Ы-бен-зоил-Ь-аргинина, катализируемого трипсином, было обнаружено, что при высоких концентрациях субстрат является также и активатором ферментативной реакции [12]. На основании данных табл. 9 определить кинетические и равновесные параметры реакции, если при изучении кинетики ферментативного гидролиза в области низких концентраций субстрата были найдены значения А ат = 1,2 сек- Кт(кят) = 3 -10- М. [c.121]

Рис. 77. Влияние дополнительного нуклеофильного агента, метанола, на кинетику гидролиза метилового эфира М-ацетил-Ь-фенилаланина, катализируемого трипсином. Концентрации метанола а —0 б —

При изучении кинетики гидролиза /г-нитроанилида К-бен-зоил-ОЬ-аргинина, катализируемого трипсином, была определена температурная зависимость константы диссоциации ионогенной группы фермента, контролирующей реакцию (табл. 2). Вычислить теплоту ионизации этой группы. [c.252]

Данные об избирательности превращения в сочетании с зависимостями концентрации от времени позволяют провести углубленное исследование кинетики превращения и определить ее реакционную схему. Эта возможность иллюстрируется ниже двумя примерами, которые относятся к превращению трипсиногена в трипсин. [c.227]

ИЗУЧЕНИЕ КИНЕТИКИ РЕАКЦИИ ГИДРОЛИЗА БЕЛКА В ПРИСУТСТВИИ ТРИПСИНА [c.82]

Изучена также кинетика гидролитического расщепления этого полипептида под влиянием трипсина, и полученные резуль- [c.217]

В заключение необходимо обратить внимание на те трудности, которые возникают при изучении термодинамики и кинетики реакции денатурации из-за необратимости этого процесса для большинства белков. Известны лишь немногие случаи обратимой денатурации — например, для трипсина, химотрипсина, рибонуклеазы и ингибитора трипсина. Не следует думать, что немногочисленность известных случаев обратимой денатурации—это лишь следствие недостаточности наших знаний об условиях обращения процесса для большинства белков. Напротив, необратимость денатурации белков, построенных относительно более сложно и менее жестко , чем перечисленные выше, является закономерным следствием ничтожной вероятности полного восстановления чрезвычайно сложной системы связей, стабилизирующих конформацию полипептидных цепочек в нативной молекуле. Однако при рассмотрении обратимых реакций термодинамические и кинетические характеристики наиболее доступны и полнее выявляются. Возможно поэтому, что особый интерес представит в будущем выявление и исследование промежуточных состояний денатурируемого белка, сколь бы кратковременно ни было их существование. [c.193]

Американский биохимик, почетный чл. Национальной АН США (с 1934). Р. в Йонкерсе (штат Нью-Йорк). Окончил Колумбийский ун-т (1912). В 1912—1915 работал там же. С 1915 в Рокфеллеровском ин-те мед. исследований в Нью-Йорке (с 1962 почетный проф.), одновременно в 1949—1959 проф. Калифорнийского ун-та в Беркли. Работы посвящены изучению кинетики и механизма ферментативных р-ций и св-в ферментов. Впервые выделил в чистом кристаллическом виде энзимы пепсин (1930), трипсин (1932) и др., а также один из вирусов и дифтерийный антитоксин (1941). Наряду с Дж. Б. Самнером доказал (1937) белковую природу ферментов, [c.324]

Кинетику гидролиза и-нитрофенилацетата химо-трипсином можно изучать с помощью так называемого метода остановленной струи. Метод состоит в смешивании примерно эквимолярных количеств фермента и субстрата и немедленном (в течение несколько миллисекунд) измерении. Растворы реагентов заливают в два шприца и с помощью механического устройства одновременно и практически мгновенно выталкивают их в очень узкую трубку, проходящую через спектрофотометр. На экран осциллографа выводятся данные об оптической плотности как функции времени, прошедшего с момента смешивания. [c.91]

При изучении кинетики гидролиза га-нитроанилида Ь-лизи-на, катализируемого трипсином, было обнаружено, что субстрат является также активатором ферментативной реакции [15]. При низких концентрациях субстрата были найдены значения Кт(кят и ккат, равные 5,1 10- М и 2,95-10- сек соответственно. Исходя из данных табл. 12, определить значения равновесных и кинетических параметров промотирования ферментативного гидролиза. [c.122]

Влияние метанола на кинетику гидролиза метилового эфира N-aцeтил-L-фeнилaлaнинa, катализируемого трипсином. Условия опыта pH 7,8 25° С ионная сила 0,1М (КС1) [c.150]

Кинетика расходования субстрата в реакции гидролиза метилового эфира N-aцeтил-L-фeиилaлaнил-L-лизинa, катализируемого трипсином, в присутствии 1-метил-2-аминоиндола. Концентрация субстрата выражена в см диаграммного листа самописца, так что перемещение пера самописца на 1 см соответствует изменению концентрации субстрата на 3,74-10- М. [c.172]

Влияние температуры на кинетику гидролиза этилового эфира Г4-бензоил-Ь-аргиннна, катализируемого трипсином. Условия опыта 2%-ный гель агар-агара pH 5,4 ионная сила [c.256]

Попытка обобщить данный материал сделана в настоящей книге, которая представляет собой логическое продолжение первой части, опубликованной ранее отдельным томом и посвященной анализу специфичности и кинетических аспектов действия ферментов на относительно простые субстраты, такие как алифатические и ароматические спирты и альдегиды, производные карбоновых кислот, замещенные аминокислоты и их производные (не выше ди- или три-пептидов). Главное внимание в первой части книги уделялось характеру фермент-субстрат ных взаимодействий на достаточно ограниченных участках активного центра и кинетическим проявлениям этих взаимодействий. В основе первой части книги лежит экспериментальный материал, полученный при изучении специфичности, кинетики и механизмов действия цинк- и кобальткарбоксипеп-тидазы, химотрипсина и трипсина из поджелудочной железы быка, алкогольде-гидрогепаз нз печени человека и лошади и пенициллинамидазы бактериального происхождения. Итогом первой части книги явились обобщение и формулировка кинетико-термодинамических принципов субстратной специфичности ферментативного катализа. [c.4]

Другой пример сильного взаимодействия белка с ДНК—регуляция оперона белком-репрессором. Наиболее изученным примером является 1ас-оперон Е. соИ [25]. Ген-регулятор кодирует синтез белка 1ас-репрессора, который затем связывается с соседним оператором. Связывание с белком-репрессором малой молекулы— индуктора, например изопропилтио-р- )-галактопиранозида, вызывает диссоциацию репрессора с операторного участка. Последующая транскрипция трех соседних генов оперона приводит к биосинтезу трех ферментов — Р-галактозидазы, галактозопермеазы и тиогалактозидтрансацетилазы. 1ас-Репрессор представляет собой тетрамерный белок, состоящий из идентичных субъединиц по 347 аминокислот каждая. Сродство репрессора к последовательности ДНК оператора зависит от ионной силы константа диссоциации в клетке, вероятно, менее 10 " моль/л . Структура участка связывания ДНК в 1ас-репрессоре до сих пор не выяснена, однако удаление трипсином 59 остатков с Л -конца и 20 остатков с С-конца предотвращает связывание. Несколько больше известно об участке связывания индуктора. Измерения флуоресценции показывают, что находящийся в участке связывания индуктора остаток триптофана при связывании перемещается в менее полярное окружение. Изучение изменения флуоресценции методом остановленного потока показывает, что процесс связывания проходит в две стадии. Быстрая начальная стадия подчиняется, как и ожидалось, кинетике второго порядка. Более медленная стадия мономолекулярна и, по- [c.569]

Данные ряда опытов по гидролизу бензоил-1-ар гининамида трипсином [12] свидетельствуют, что формально — эт( реакция первого порядка как по субстрату, так и по ферменту Такое определение порядка по субстрату основано на расчета к константы по кинетическим кривым, снятым в опытах, которьк проводили с одной и той же начальной концентрацией субстрата По этим соображениям априори никак нельзя считать, что первый порядок вытекает из более сложной кинетики, внешне упрощающейся благодаря компенсирующему действию различных факто ров. Прежде чем сделать окончательное заключение о порядке, необходимо провести проверку по начальной скорости реакции. [c.92]

Кинетика, соответствующая нулевому порядку, еще более четко наблюдается при действии трипсина на гидролиз метилового эфира бензоиларгинина, данные исследования которого приведены на рис. П-3. [c.93]

Научные работы посвящены изучению кинетики и механизма ферментативных реакций и свойств ферментов. Впервые выделил в чистом кристаллическом виде про-теолитические ферменты, или энзимы пепсин (1930), трипсин [c.368]

Как видим, в случае химотрипсина различие между Кт и Кз-действительно несущественно (-— 10%), однако для фицина оно уже достигает — 20% и для трипсина — 40%. Возможно, что данные скоростной кинетики, положенные в основу расчета Кз не вполне точны и на самом деле величины К должны быть ближе к Кт Однако это требует дальнейших доказательств. [c.47]

МЗЗ. M Donald М. R., J. Gen. Physiol., 38, 93—103 (1954), Инактивация разбавленного раствора кристаллического трипсина рентгеновскими лучами. I. Кинетика и характерные особенности. [c.374]

Тщательное исследование рН-функций оказалось весьма ценным при изучении механизма действия гидролаз. Возможность изолировать индивидуальные кинетические стадии с помощью методов остановленного потока, стационарной кинетики и релаксационной техники позволила получить вполне четкие результаты. Наиболее определенные данные при использовании некоторых субстратов были получены для трипсина и химотрипсина [2,3]. Именно с помощью такого подхода впервые было уста-йовлено участие остатков гистидина в механизме действия химотрипсина на стадиях ацилирования и деацилирования. Некоторые данные стационарной кинетики привели к полезным выводам о механизме действия негидролитических ферментов. Можно думать, что этот метод анализа механизмов ферментативных реакций будет быстро развиваться. Группа Альберти [4] провела очень тщательное измерение величин р/С и энтальпии ионизации связывающих группировок фумаразы. Данные о [c.217]

В 1962 г. появилась работа [409], являющаяся продолжением исследований Коэна, Эрленджера и сотрудников [410] по реактивации фосфорилированных эстераз. В работе исследовалась кинетика реактиваций диэтилфосфорилированного трипсина различными гидроксамовыми кислотами и оксимами. Была установлена выраженная зависимость между скоростью дефосфорилирования активного центра трипсина и основностью нуклеофильных реагенто [c.585]

Высокомолекулярные соединения в поверхностных слоях ведут себя по-разному в зависимости от ряда факторов и, в частности, от числа полярных групп в молекуле. Молекулы белка, содержащие большое число полярных групп могут развертываться на поверхности воды, образуя слой в одну пептидную цепочку если слой белка сжат, то обнаруживаются признаки ориентации — боковые цепи белка направлены при этом почти вертикально (Е. Мишук и Ф. Эйрих). Ферментный белок—трипсин, растекаясь по поверхности раствора сульфата аммония, образует димерные молекулы. Изучение поведения монослоев позволило вычислить площади, занимаемые в слое молекулами белков и молекулярные веса белков. Значительное влияние поверхностный слой оказывает и на -кинетику реакций. Если реакция катализируется ионами водорода или гидроксила и активный комплекс содержи г ионы Н+ или ОН-, то изменение pH отражается на скорости. Было показано, что pH поверхностного слоя может заметно отличаться от pH внутри раствора и поэтому вещества в поверхностном слое вступают в каталитический процесс быстрее. Другим важным фактором, изменяющим скорость реакции в поверхностных слоях, является определенная геометрическая [c.209]

Рис. 7.3. Кинетика лизнса стабилизированного фибрина полимерами, содержащими 2,95 мг/г гепарина (/), 0,46 мг/г трипсина (2), 0,29 мг/г трипсина и 1,43 мг/г гепарина (5), 0,46 мг/г трипсина и 3,15 мг/г гепарина (4), 1,29 мг/г Трипсина (5) и 1,29 мг/г и трипсина и 1,5 мг/г гепарина (6)

Филипс и др. [247, 254] показали, что существуют два типа сборки самосборка и сборка, стимулируемая экстрактом. Они имеют сходные кинетики, оптимумы pH, концентрации солей, температуры (37 °С). Для самосборки необходима высокая концентрация 14 8-частиц, а образующиеся частицы обладают Н-антигенностью. Сборка, стимулируемая экстрактом, протекает при значительно более низкой концентрации 14 S-частиц, и образующиеся частицы N-антигенны. Активность, катализирующая сборку, которая чувствительна к трипсину, но не к рибо--нуклеазе, локализована в мембранах ШЭР, несущих 14 8-части-ды, ППК и неидентифицированную ПО S-структуру, которая высвобождается при растворении мембран дезоксихолатом J242]. Экстракты из клеток, зараженных дефектными интерферирующими (ДИ) частицами (формой полиовируса, единственным известным дефектом которого является делеция генов бел- [c.237]

Для дальнейшего развития энзимологии необходимо было получить очищенные ферменты в количествах, сравнимых с количеством субстратов, и непосредственно исследовать их. Первые шаги в этом направлении сделал в 1926 г. Самнер, которому удалось получить кристаллы уреазы, выделенной из экстрактов канавалии мечевидной. Вскоре (1930—1936 гг.) Нортроп и Ку-нитц закристаллизовали пепсин, трипсин и химотрипсин. Полученные факты позволили, наконец, доказать, что ферменты являются белками, и дали возможность разработать методы современной химии белка, определить аминокислотную последовательность (Сэнджер), установить трехмерную структуру молекул белков в растворе (Перутц и Кендрью), применить методы исследования кинетики быстрых реакций (работы, начатые Роу-тоном в 1923 г.). [c.11]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология