Трипсин влияние DgO

Таблица 2 Влияние температуры на константу диссоциации ионогенной группы трипсина, участвующей в реакции гидролиза п-нитроанилида N-бeнзoил-DL-apгининa. Условия опыта ионная сила 0,1 М (0,033М СаСЬ)

Рис. 77. Влияние дополнительного нуклеофильного агента, метанола, на кинетику гидролиза метилового эфира М-ацетил-Ь-фенилаланина, катализируемого трипсином. Концентрации метанола а —0 б —

Дальнейшее превращение белков пищи осуществляется в тонкой кишке, где на белки действуют ферменты панкреатического и кишечного соков. Трипсин и химотрипсин действуют на белки аналогично пепсину, разрывают другие внутренние пептидные связи оба фермента наиболее активны в слабощелочной среде (pH 7,2—7,8). Благодаря гидролитическому действию на белки всех трех эндопептидаз (пепсин, трипсин, химотрипсин) образуются различной длины пептиды и некоторое количество свободных аминокислот. Дальнейший гидролиз пептидов до свободных аминокислот осуществляется под влиянием группы ферментов—пептидаз. Помимо панкреатической карбоксипептидазы, на пептиды действуют кишечная аминопептидаза и разнообразные дипептидазы. Эта группа ферментов относится к экзопептидазам и катализирует гидролиз пептидной связи по схеме [c.425]

В работе [163] исследовалась тепловая инактивация трипсина при разных температурах (37—50° С). Для изучения влияния углеводородов на тепловую инактивацию трипсина растворы фермента предварительно насыщались углеводородами при 4° С. Чтобы обеспечить максимальную концентрацию углеводорода в водном растворе трипсина при каждой температуре растворы выдерживались под слоем углеводорода. [c.32]

Рога и копыта состоят не из одного кератина, помимо него в них имеется жир (в количестве до 4%) и некоторые белковые вещества иного состава, чем кератин, обладающие иными свойствами, чем последний. Жир не оказывает вредного влияния на технические свойства рогов и копыт. При переработке их в изделия бывает выгодно пропитывать их жиром дополнительно—это улучшает их пластичность. Совсем по-иному действуют белковые примеси, сопутствующие кератинам. Кератины сами по себе весьма ограниченно гидрофильны, набухаемость их в воде очень слабая и ферменты на них не действуют. Сопутствующие же им протеины и гидрофильны и перевариваются ферментами — пепсином и трипсином. При переработке рогов стремятся удалить эти вредные примеси путем длительного вымачивания в теплой воде в противном случае они вызывают образования трещин в роговой пластине вдоль ее слоев. Сам кератин рога является не абсолютно стойким веществом. Помимо легкого распада цистина с выделением сероводорода долгое кипячение в воде, длительное пребывание во влажном состоянии на воздухе ведет к изменению кератина. В первом случае он в некоторой степени гидролизуется, во втором— кислород воздуха, изменяя кератин, делает его доступным действию ферментов. В производстве это нужно учитывать и охранять влажный рог от окисления. [c.37]

Влияние концентрации метилового эфира п-тозил-Ь-аргинина на скорость гидролиза, катализируемого трипсином. Условия опыта pH 8,5 25 С [Е)о = 210- М [c.122]

Влияние температуры на кинетику гидролиза этилового эфира Г4-бензоил-Ь-аргиннна, катализируемого трипсином. Условия опыта 2%-ный гель агар-агара pH 5,4 ионная сила [c.256]

Другие белки. При изучении последовательности располо жения аминокислот в других белках с помощью гидролиза трипсином получены результаты, которые согласуются с имеющимися данными о специфичности действия трипсина. Однако в тех случаях, когда точное расположение аминокислот в исследуемом веществе неизвестно, влияние последовательности аминокислот на гидролиз данного белкового соединения трипсином оценить не удается. [c.197]

Влияние метанола на кинетику гидролиза метилового эфира N-aцeтил-L-фeнилaлaнинa, катализируемого трипсином. Условия опыта pH 7,8 25° С ионная сила 0,1М (КС1) [c.150]

Объясняют характер влияния pH на активность трипсина. Отмечают оптимальное значение pH для этого фермента. [c.63]

Работа 36. Влияние концентрации трипсина [c.67]

Работа 38. Влияние концентрации субстрата на скорость реакции, катализируемой трипсином [c.71]

Под влиянием кислот инсулин претерпевает денатурацию, но основания регенерируют исходную физиологически активную форму. Агенты, разрывающие связи 8—8 необратимо денатурируют инсулин. Инсулин образует соединения с двухвалентными металлами из поджелудочной железы выделяют, как правило, хорошо кристаллизующееся соединение с цинком. Инсулин переваривается пепсином и химотрипсином и незначительно атакуется трипсином. Инсулин не проявляет антигенных свойств при впрыскивании животным, относящимся к другим родам, чем тот, из которого он был выделен. Как уже отмечалось инсулин быка, овцы и лошади различаются между собой последовательностью трех аминокислот определенного участка молекулы. Однако эти аминокислоты не имеют значения для физиологической активности гормона поэтому инсулин, выделенный из животных, может служить лекарственным препаратом для человека. [c.447]

С середины XVIII в. начинается период открытия и вьщеления большого числа новых органических веществ растительного и животного происхождения. Крупным событием второй половины XVIII в. стали исследования Л. Спалланцани по физиологии пищеварения, которые положили начало изучению ферментов пищеварительных соков. Русский химик К.С. Кирхгоф в 1814 г. описал ферментативный процесс осахаривания крахмала под влиянием вытяжки из проросших семян ячменя. К середине XIX в. были найдены и другие ферменты амилаза слюны, пепсин желудочного сока, трипсин сока поджелудочной железы. Й. Берцелиус ввел в химию понятие о катализе и катализаторах, к числу последних были отнесены все известные в то время ферменты. В 1839 г. Ю. Либих выяснил, что в состав пищи входят белки, жиры и углеводы, являющиеся главными составными частями животных и растительных организмов. [c.16]

Когда сорбированное вещество освобождается от специфического сорбента, следует помнить о влиянии гетерогенности иммобилизованного аффинного лиганда [1]. На рис. 10.10 приведены результаты выделения химотрипсина и трипсина из гомогенатов поджелудочной железы мыши на различных препаратах сефарозы с присоединенным соевым ингибитором трипсина. Если допустить, что различия в условиях элюирования отражают различия в биологической активности, картина элюирования может использоваться для характеристики молекулы. Применимость сорбента, таким образом, зависит от функциональной гомогенности иммобилизованного аффинного лиганда. [c.272]

Эффективная активность лиганда под влиянием иммобилизации может меняться самым различным образом. На взаимодействие иммобилизованного лиганда с выделяемыми молекулами может оказывать значительное очень разнообразное влияние микроокружение, образуемое матрицей (плотность заряда, стерические препятствия и т. д.) оно же может также влиять и на структуру аффинного лиганда. Иммобилизация приводит также к изменениям в химической структуре, которые различным образом изменяют его молекулярные свойства. Так, например, существенную роль играет число связей между аффинным лигандом и нерастворимым носителем. Из сопоставления результатов, представленных на рис. 10,10,6 и в, следует, что неблагоприятное влияние возрастающего числа связей между молекулами соевого ингибитора трипсина и сефарозой 4В вызвано увеличением pH с 7,2 до 8,5 во время связывания белка после активации бромцианом. [c.274]

Депротеинизация достигается также добавлением сульфата аммония и некоторых органических растворителей [23]. Основная опасность здесь заключается в возможности адсорбции или окклюзии следовых компонентов осадком. Эффективность операции нужно конфолировать в отношении биоматериала и определяемых веществ. Обычно влияние окклюзии сводят к минимуму не добавлением осаждающих агентов к пробе, а наоборот [24]. В последнее время для осаждения белков все чаще применяют ацетонитрил, особенно удобный в тех случаях, когда раствор далее анализируют методом ВЭЖХ Для предотвращения разложения белков следует избегать нафевания, либо использовать мягкие условия их разрушения с помощью ферментов [25]. С этой целью используют трипсин, папаини другие протеиназы. Ткани печени гидролизуют алкалазой, а [c.204]

Таблица 9 Влияние концентрации субстрата на скорость гидролиза п-нитроанилида Ы-бензоил-Ь-аргииина, катализируемого трипсином. Условия опыта pH 8,2 25° С 0,05М трис-НС1-буфер 0,02М СаС12 1% диметилформамида

На электросорбцию трипсина, кроме влияния кислотности среды, влияет взаимодействие заряженных форм белка с поляризованной поверхностью. Уменьшение адсорбционной емкости отрицательно заряженного сорбента определяется отталкиванием анионов белковой молекулы от одноименно заряженной поверхности. Возрастание адсорбции при увеличении положительного потенциала связано с процессом изменения структуры этого белка с основным. [c.6]

Заключение. В заключение следует отметить, что для проявления специфичности трипсина необходимо, чтобы гидролизуемая молекула содержала положительно заряженную боковую цепь соответствующих размеров, которая способствует сближению карбоксильной группы с чувствительной к гидролизу связью. Однако при наличии положительно заряженной группы соседняя связь не всегда становится чувствительной к гидролизу. Действительно, как указывалось выше, остатки прелина, благодаря которым иминогруппа сближается с соседней связью, обусловливают устойчивость к гидролизу. Несколько расположенных ряДом остатков основного характера изменяют чувствительность связи. Соседние свободные а-аминогруппы или комбинированное влияние а- и -у-карбоксиль-ных групп также могут предотвратить гидролитический разрыв связи. [c.197]

Проферменты. Протеолитические ферменты пищеварительного тракта, а также поджелудочной железы синтезируются в неактивной форме—в виде проферментов (зимогенов). Регуляция в этих случаях сводится к превращению проферментов в активные ферменты под влиянием специфических агентов или других ферментов—протеиназ. Так, трипсин в поджелудочной железе синтезируется в форме неактивного трипсиногена. Поступив в кишечник, он превращается в активный трипсин в результате аутокатализа или под действием других протеиназ (механизм активации подробно рассматривается в главе 12). Превращение неактивного пепсиногена в активный пепсин происходит аутокаталитически в результате специфического ограниченного протеолиза в присутствии соляной кислоты и также связано с отщеплением от профермента специфического ингибитора пептидной природы. Эти превращения зимогенов в активные ферменты связаны с конформационными изменениями молекулы фермента и формированием активного центра или его раскрытием (демаскирование). Синтез протеиназ в неактивной форме и ряда других неактивных белков-пред-шественников имеет, очевидно, определенный биологический смысл, предотвращая разрушение клеток органов, в которых образуются проферменты. Примерами подобного активирования белков является активиро- [c.153]

Таким образом, в тонком кишечнике завершается предпо-ледняя стадия гидролиза белков — образование небольших ептидов. Еще раз напомним, что первая стадия — гидролиз елков под влиянием пепсина — происходит в желудке, вторая тадия — гидролиз полипептидов под влиянием трипсина, химо-Рипсина, эластазы и карбоксипептидаз с образованием более елких пептидов — происходит в полости тонкого кишечника. [c.193]

Процесс превращения трипсиногена в трипсин происходит под действием фермента, вырабатываемого в киетках слизистой оболочки кишечника — энтеропептидазы, а затем аутокаталитически под влиянием трипсина и сводится к отщеплению с Л/ -конца полипептида шести аминокислотньгх остатков (рис. 24.3). [c.363]

Сравнение данных по измерению удельного оптического вращения и дисперсии оптического вращения глобулярных белков в водных растворах и растворах, насыщенных углеводородом, позволило сделать вывод, что солюбилизированный углеводород практически не изменяет содержания спиральных структур в глобулах белков. Влияние солюбилизации углеводорода на устойчивость глобулярных белков к тепловой денатурации изучалось на примере яичного альбумина при pH 7,2, химотрипсина при pH 4,25 и 7-глобулина при pH 9,2 — по изменению удельного оптического вращения. Тепловая денатурация у-глобулина при pH 9,2 оценивалась также спектрофотометрически, а тепловая денатурация трипсина при pH 3,75 — по снижению ферментативной активности. [c.30]

Вывод, сделанный на основании рассмотренных результатов физико-химических исследований, характеризующих воздействие углеводородов на структуру белков, подтвердился и при изучении влияния углеводородов на биологическую активность ферментов (на примере некоторых протеаз). Углеводороды, солюбилизированные ферментами, тормозят протеолитические реакции пепсина, химотрипсина и трипсина. Однако углеводороды не влияют на лгаксимальную скорость гидролиза, а лишь увеличивают константу Михаэлиса. Эти результаты, а также литературные данные позволяют сделать вывод о том, что углеводороды, являясь конкурентными ингибиторами протеолитических ферментов, существенно не изменяют их структуры [163, 164]. [c.32]

Далее было выяснено влияние гидрофобного связывания углеводородов ферментами (пепсин и химо-трипсин) на биологическую (протеологическую) активность. Показано, что солюбилизация бензола приводит к значительному снижению протеолитической активности пепсина. После солюбилизации активность его падает со 100 до 40—70% (метод определения активности по Метту). Предполагаемый механизм торможения протеолитической активности пепсина заключается в том, что бензол, взаимодействуя с неполярными группами пепсина, экранируют его активный центр. [c.396]

Пепсин, папайи и субтилизип обладают низкой специфичностью. Поэтому, за исключением пепсина, в этих ферментах, трудно обнаружить примеси других ферментов. В случае пепсина это не имеет большого значения, так как оптимум его активности наблюдается при pH 1,8—2,2, в то время как возможные примеси других ферментов проявляют свое действие в среде, близкой к нейтральной. Влияние примесей может быть ослаблено уменьшением времени переваривания исследуемого белка ферментом. Пепсин разрывает пептидные связи, соседние как с глутаминовой кислотой или глутамином, так и с фенилаланином или тирозином. Иногда отсутствие специфичности проявляется в том, что он гидролизует связи аланин — аланин и аланин — серии. Папаин обладает аналогичной низкой специфичностью с еще более широким спектром активности. Субтилизин также имеет широкий спектр активности, гидролизуя связи, которые расщепляют трипсин, химотрипсин и пепсин. Однако его особым преимуществом является способность гидролизовать нативные белки. Следовательно, с его помощью могут быть обнаружены дисульфидные моспжи, например в инсулине и рибонуклеазе. [c.395]

Другим примером существенного влияния пористости геля на емкость аффинного сорбента является зависимость количества сорбированного трипсина на 6 и 4%-ной агарозе, модифицированной ж-аминобепзамидином, от концентрации трипсина [24]. Пред- [c.66]

Берлинер и др. [8] изучили конформационные изменения трипсина, спин-меченного 1-оксил-2,2,6,6-тетраметил-4-пиперидинилме-тилфторфосфатом, при помощи ЭПР-спектроскопии. Бенко и др. [6] исследовали влияние связывания метгемоиротеииов на частичках латекса на конформационные изменения связанных белков с использованием скоростей продольной магнитной релаксации протонов растворителя. [c.254]