Флуоресцентная микроскопия, методы

Применение. В флуоресцентной микроскопии в качестве красителя, В гистохимии для выявления магния [1]. Метод обладает высокой специфичностью и применим как для исследования растений, так и животных тканей однако возникаюпдая яркая огненно-красная окраска солей магния, образующихся при взаимодействии с титановым желтым, не стойка и исчезает в течение 24 ч [Пирс, 620]. [c.390]

Этот метод используется обычно при наблюдении клеток, обработанных флуоресцирующими антителами (разд. 14.3.2), или при изучении окрашенных акрихином хромосом (разд. 8.4.3). С помощью флуоресцентной микроскопии можно наблюдать нуклеиновые кислоты и другие клеточные компоненты при возбуждении их флуоресценции светом с длиной волны около 260 нм. Важно использовать достаточно мощный источник света с достаточно короткой длиной волны. Обычно для этой цели применяется ртутная лампа, но некоторые работы могут проводиться с более дешевой кварцевой иодидной лампой. [c.108]

В последние годы в микроскопических исследованиях начали широко применять метод флуоресцентной микроскопии, основанный на свойстве некоторых веществ при поглощении падающего на них света превращать часть поглощенной энергии в видимый свет. Испускание такого излучения называется флуоресценцией. Основное достоинство метода флуоресцентной микроскопии — его боль- [c.56]

Определение общего количества бактерий в почве с использованием метода флуоресцентной микроскопии (в модификации Звягинцева). Метод основан на контрастной окраске почвенных частиц и клеток микроорганизмов в флуоресцентном микроскопе. [c.162]

Наиболее полно отражает численность клеток в почве метод прямого подсчета под микроскопом, требующий высокой квалификации исследователя. Для подсчета зародышей методом Виноградского в модификации Шульгиной на предметное стекло наносят определенный объем суспензии, готовят из него мазок на определенной площади, затем мазок фиксируют, красят и подсчитывают под микроскопом количество клеток микроорганизмов. Фиксация препарата не дает возможности выявить- количество жизнеспособных клеток. В какой-то мере этот недостаток можно устранить при использовании метода флуоресцентной микроскопии. [c.141]

Основное достоинство метода флуоресцентной микроскопии — его большая чувствительность наряду с высокой контрастностью. Он позволяет увеличить получаемый эффект в 100 раз и тем самым обнаружить вещества, присутствующие в минимальных количествах. Так как для возбуждения флуоресценции требуются очень малые количества флуоресцирующих веществ, то это дает возможность применять их при исследованиях живой клетки в Концентрациях, не вызывающих токсического воздействия. Методом флуоресцентной микроскопии пользуются для изучения пер- [c.47]

Красильников Н. А., Бехтерева М. Н. Применение метода флуоресцентной микроскопии для распознавания живых и мертвых клеток актиномицетов,— Микробиология , 1956, К 3, с, 279—285, Кузнецов С. И., Романенко В. И. Микробиологическое изучение внутренних водоемов. Лабораторное руководство, М,—Л,, Изд-во АН СССР, 1963, [c.257]

При окрашивании почвы раствором акридина оранжевого почвенные частицы в флуоресцентном микроскопе выглядят красными, а клетки микроорганизмов — зелеными. Метод дает возможность подсчитывать не только свободные клетки, но н клетки в микроколонии, адсорбированные на поверхности почвенных частиц и микроагрегатов, а также рассматривать вегетативные клетки, клетки в состоянии спор и частично дифференцировать живые и мертвые клетки. Водоросли и содержащие хлорофилл микроорганизмы рассматривают в флуоресцентном микроскопе без окрашивания почвенной суспензии, так как пигмент сам обладает интенсивной красной флуоресценцией. [c.162]

Конформации, показанные на рис. 103, можно наблюдать методом лазерной флуоресцентной микроскопии. [c.105]

Применяя различные сочетания увеличений микроскопа с площадью квадратов окулярной сетки и ходом тубуса, можно осуществлять счет бактерий в довольно широком диапазоне их концентрации в суспензии (от 5-10 до 5-10 клеток/мл) без предварительного разведения. Сочетание этого метода с флуоресцентной микроскопией позволяет одновременно учитывать живые и мертвые бактериальные клетки. При проверке метода па суспензии В. зиЬ Из ошибка счета составила 0,59. [c.88]

Метод спектральной флуоресцентной микроскопии дает возможность выявлять эффект деблокирования фосфатных групп НК. Влияние обработки уксусным ангидридом на спектр флуоресценции клеточных ядер проростков гороха показано на рис. 23. [c.187]

В микроскопических исследованиях широко пользуются методом флуоресцентной микроскопии, основанным на свойстве некоторых веществ, поглощая падающий на них свет, превращать часть поглощенной энергии в видимый свет. Испускание такого излучения называется флуоресценцией. [c.47]

Флуоресцентная микроскопия лабораторно-клинического материала при новых методах его окраски [c.44]

Флуоресцентная микроскопия как вспо.могательный метод при анализе пищевых продуктов и лекарственных веществ [c.49]

Далее мы переходим к обсуждению новых важных методов, которые позволяют использовать флуоресцентную микроскопию для анализа изменений концентрации и расположения специфических макромолекул в живых клетках (разд. 4.1.9). [c.178]

Эндомитозом, или внутренним делением, называется особый тип репликации хромосом внутри ядра без развития митотического аппарата. В таких случаях в клетке происходит внутриядерное кратное увеличение числа хромосом (количества ДНК) без типичного, отчетливо выраженного деления ядерного вещества, которое сопровождается укрупнением ядра и повышением содержания в нем хроматина, что может быть установлено путем ультрафиолетового метода исследования и с помощью флуоресцентной микроскопии. [c.113]

Применение. В обычной и флуоресцентной микроскопии для выявления нуклеиновых кислот и кислых мукополисахаридов в клеточных и тканевых структурах. В гистохимии в качестве флуорохрома для выявления муцина [2] и нуклеиновых кислот. При исследовании нефиксированных тканей с помощью флуоресцентного микроскопа в сиЕзем свете ядра (ДНК) окрашиваются в зеленый цвет, нуклеиновые кислоты (РНК) ядрышек и цитоплазмы — в красный, волокнистая соединительная ткань окрашивается в зеленый цвет [3, 4]. В бактериологии в качестве флуорохрома для диагностики туберкулеза [5]. В гельминтологии для выявления трихомонад методом люминесцентной микроскопии [OJ. Для прижизненной окраски ядра живая клетка во флуоресцентном микроскопе дает зеленое свечение, мертвая — медно-красное [7, 8]. [c.17]

Применение. В микробиологии и вирусология для быстрого выявления кислотоустойчивых бактерий (в мазках на туберкулез, проказу и др.), а также для (Обнаружения риккетсий и некоторых вирусов. В бактериологии для обна--ружения туберкулезных бактерий методом флуоресцентной микроскопии, по Ха-геманну [1] или Дегомье [2]. [c.46]

Применение. В флуоресцентной микроскопии в качестве красителя при определении жировых включений в гистологических препаратах. Метод выявления липидов основан на появлении вторичной флуоресценции 1]г срезы, окрашенные 0,1%-ным раствором фосфяна, дают в УФ-свете серебристо-белую [c.422]

Для осаждения аэрозолей с целью определения их весовой концентрации можно просасывать их через фильтр, термопреципита-тор, электропреципитатор или механический осадитель. Разработаны как макро- так и микроаналитические методы взвешивания и определения химического состава осадков. Помимо известных методов микрохимического анализа имеются и более современные физические методы — интерференционная микроскопия, рентгеновская флуоресцентная микроскопия и электронографический метод анализа, с помощью которых можно определить химическую природу отдельных частиц. [c.221]

Эта картина хлоропластов, светящихся малиновым светом на слабомолочном фоне, так поразила впервые наблюдавших ее исследователей [11, 13, 14, 15], что они дали восторженные описания этого явления. Позднее зеленые листья, а также зеленые и цветные водоросли и диатомовые водоросли изучались при помощи флуоресцентной микроскопии [18, 19, 23, 24, 49]. Одновременно были усовершенствованы также методы макроскопического наблюдения флуоресценции растений, и первоначальные результаты Стокса были подтверждены и дополнены. Особо следует отметить работы Дере и его сотрудников [48, 55], которые выполнили многочисленные спектрофотографические исследования флуоресценции растений бурых, зеленых и синих водорослей [26, 32, 37], диатомовых водорослей [28] и зеленых листьев. Целый ряд работ других исследователей [29—31, 35, 36, [c.217]

Биофизические методы позволяют изучать динамическую организацию биомембран, получить представления об упаковке и движении липидных молекул в природных и модельных мембранах, их взаимодействии друг с другом и молекулами белков, исследовать фазовые переходы и другие процессы. К ним относятся дифракционные методы (рентгеновская дифракция, дифракция нейтронов), резонансные методы, метод электронной микроскопии, оптические методы (круговой дихроизм, дисперсил оптического вращения, абсорбционная спектроскопия, люминесценция, метод флуоресцентных зондов), метод дифференциальной сканирующей микрокалориметрии, метод моделирования и получения искусственных мембран и др. [c.203]

Предложен колориметрический метод, который можно использовать для анализа крови и плазмы [9]. Метод основан на образовании комплекса поливинилпирролидона с красителем брил лиантовый красный. Разработан также колориметрический метод, основанный на определении йодного комплекса, который пригоден для исследования всех биологических сред [10, 11]. Для обнаружения поливинилпирролидона в тканях рекомендуют экстракцию метанолом или хлороформом с последующим определением азота [8, 12]. Для этой же цели используется метод флуоресцентной микроскопии [13]. В качестве индикаторов для поливинилпирролидона в организме применяли соединения железа [14]. [c.90]

Локализация ферментов гистохимически устанавливается либо с иомои(Ью цветных реакций на продукты ферментативных реакций, либо путем 11сиользования т. н. хромогенных субстратов — веществ, в результате ферментативного превращения к-рых образуются окрашенные плохо растворимые соединения. Наряду с применением обычной микроскопии в Г. широко используются электронная, ультрафиолетовая и флуоресцентная микроскопия, радиоавтография (при использовании радиоактивных изотопов для изучения обмена веществ) и др. методы исследования. [c.475]

Согласно другой точке зрения, карбоксиметилцеллюлоза одинаково хорошо адсорбируется как волокном, так и частицами загрязнений, и образующиеся при этом одноименно заряженные частицы взаимно отталкиваются 74]. В обоснование обоих предположений можно привести много данных. Однако совсем недавно Штюпель и Рорер, используя метод флуоресцентной микроскопии, показали, что карбоксиметилцеллюлоза в условиях практического применения, по-видимому, не адсорбируется хлопком в сколько-нибудь заметных количествах, но сильно адсорбируется всеми исследованными видами загрязнений [75]. В качестве веществ, предотвращающих обратное осаждение загрязнений, испытывались многие гидрофильные полимеры, причем было установлено, что лишь немногие из них равноценны или превосходят по своим свойствам карбоксиметилцеллюлозу. Фонг и Ландгрен [76] показали, что некоторые белки, винилпирролидоновые полимеры и производные поливинилового спирта определенных молекулярных весов приближаются по своим свойствам к карбоксиметилцеллюлозе. Достаточно эффективными могут быть также некоторые производные крахмала. Однако, насколько известно авторам, карбоксиметилцеллюлоза в настоящее время является единственным веществом типа гидрофильных коллоидов, успешно используемым для предотвращения обратного осаждения загрязнений в продажных моющих составах. [c.367]

В первоначальном методе Касперсона для окраски использовался раствор акрихин-иприта (5 мг% в 0,09 М ЫагНРО и 8,7 мМ лимонной кислоты, pH 7,0). После 20 мин окрашивания клетки трижды промывали в том же буфере или дистиллированной воде, pH 7,0, и заключали под покровное стекло для исследования в флуоресцентном микроскопе. [c.105]

Метод счета на чашках потомства жизнеспособных микроорганизмов в осадках полосы прилива и отлива дает, по-видимому, значительно заниженные величины истинной численности бактерий. Количество бактерий, определенное методом прямого счета в осадках полосы прилива с помощью окраски акридиновым оранжевым и флуоресцентной микроскопии, колеблется от 1,17-10 до 9,97-10 бактерий в 1 г сухого осадка (Dale, 1974). Эти цифры соответствуют выходу биомассы в 30 г бактерий (сухой все) па 1 м , что равно постоянному урожаю бентоса. Кроме того, поскольку у бактерий скорости обмена веществ и размножения значительно выше по сравнению с популяцией беспозвоночных в бентосе, действительная бактериальная биомасса должна быть существенно больше. По-видимому, бактерии играют роль источника питания для бентоса. [c.65]

Одна из наиболее трудных проблем при цитометрии связана с неспецифическим окрашиванием. Клеточный сортер с чрезвычайно высокой чувствительностью детектирует флуоресцирующие молекулы — обычно с большей, чем глаз. Поэтому реагенты, используемые при работе с сортером, должны быть более высокой степени очистки, чем для других методов анализа. Как правило, гетерологичные сыворотки должны подвергаться очистке на аффинных сорбентах даже в тех случаях, когда они достаточно специфичны для непосредственного использования при флуоресцентной микроскопии. Моноклональные антитела не всегда требуют очистки. Мы с успехом использовали супернатанты многих продуцирующих моноклональные антитела гибридом, которые культивировали в средах с добавлением и без добавления сыворотки, а также асцитные жидкости (конечно, в соответствующем разведении). В случае непрямых методов флуоресцентного окрашивания влияние контаминирую-щих молекул в культуральных жидкостях сводится к минимуму. Если конъюгированные с флуорохромом антитела строго специфичны по отношению к иммуноглобулинам, то даже при связывании клетками молекул, не относящихся к иммуноглобулинам, эти молекулы не будут детектироваться (по флуоресценции). В случае применения асцитных жидкостей активность моноклональных антител обычно настолько высока, что эффекты контаминирующих иммуноглобулинов и других компонентов чаще всего не выявляются. Однако при прямом конъ-югировании препаратов антител с флуорохромом наличие в них белковых примесей неиммуноглобулиновой природы может стать причиной высокого уровня неспецифического окрашивания. Следовательно, любой конъюгат используемый при сортинге клеток, должен быть тщательно очищен. [c.332]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология