Культура клеток суспензионная

Первый этап исключают в случае использования клеток крови, лимфы, опухолей и некоторых других трансформированных клеток, поскольку они растут в виде суспензионных культур Все другие животные клетки прикрепляются к какой-то поверхности Поэтому ткани, из которых получают такие клетки, дезинтегрируют в тканевых гомогенизаторах и обрабатывают протеазой, центрифугируют при небольших скоростях ротора во избежание травмирования клеток [c.344]

В каллусных и суспензионных культурах встречаются клетки, имеющие диплоидный набор хромосом, свойственный исходному растению, полиплоидные клетки, содержащие 3,4,5 и более хромосомных наборов. Наряду с полиплоидией в культуре каллусных тканей можно нередко наблюдать анеуплоидию (возрастание или уменьшение хромосомного набора на несколько хромосом). Чем длительнее культивировать каллусные клетки, тем больше они различаются по плоидности. В каллусных клетках табака через четыре года культивирования совсем не остается диплоидных клеток все клетки становятся полиплоидными или анеуплоидны-ми. Этот факт указывает на то, что изменение плоидности происходит под влиянием условий культивирования и прежде всего входящих в со- [c.88]

Помимо стационарного способа культивирования с регулярными пассажами, описанного выше для первичных культур, для большинства перевиваемых клеточных культур возможно применение метода суспензионных культур, при котором клетки находятся в жидкой среде во взвешенном состоянии. Модификацией данного метода является проточное культивирование, при котором в специальный аппарат (ферментер или роллерный культиватор) непрерывно добавляют свежую питательную среду и удаляют отработанную. Подобный метод позволяет в любой момент получить значительные количества клеточной массы для культивирования вирусов он применяется, как правило, в крупных лабораториях или при промышленном производстве вакцин. [c.261]

Метод кормящего слоя — кондиционирующий фактор выделяют активно делящиеся клетки суспензионной культуры того же вида растений, что и одиночная клетка (рис. 6.2). [c.168]

Каллус можно механически разделить на одиночные клетки и небольшие комочки клеток и выращивать их затем в суспензионной культуре. В такой культуре клетки очень похожи друг на друга все они имеют тонкую первичную клеточную стенку и крупные вакуоли, пересеченные тонкими цитоплазматическими нитями (рис. 19-66). В ряде случаев из одиночных клеток, выделенных из суспензии, удавалось вырастить целое взрослое растение. Эта [c.205]

Рис. 5. Клетки суспензионной культуры женьшеня в экспоненциальной фазе цикла выращивания (световая микроскопия) увелич. (40 X 10)

Кроме выращивания каллусов удается культивировать клетки некоторых растений в суспензионных культурах [c.38]

В условиях, ограничивающих рост нормальных клеток, трансформированные клетки как менее требовательные к факторам роста, пролиферируют до более высокой плотности и они становятся способными культивироваться в глубинных условиях (суспензионные культуры) при изменении своей формы до сферической Следовательно, и у грибных, и у животных, а также у ряда растительных клеток их морфологическое сходство (сферичность, округлость) в глубинных условиях выращивания находится под контролем генотипа и сопровождается изменением преимущественно клеточной мембраны [c.154]

Культура клеток млекопитающих. Для исследования были взяты культуры животных клеток линии ВНК-21 (клетки почки новорожденного хомячка) и линии L (клетки подкожной жировой клетчатки мыши). Клетки этих линий обладают способностью к самостоятельному росту в условиях пристеночного и суспензионного способа культивирования. [c.144]

Культуры клеток животных и человека, не имеющие клеточных стенок, являются более ранимыми и требовательными к условиям своего существования, чем клетки других эукариот и прокариот Поэтому оборудование для них можно отнести к разряду "тихоходного", обеспечивающего нежное обращение с биообъектами Несомненно, в отдельных случаях допустимы исключения, например, когда возможно культивирование в глубинных условиях некоторых растительных клеток (суспензионная культура женьшеня), используя ферментационное оборудование, рассчитанное на выращивание, например, бактерий или грибов [c.296]

Рис. 143. Использование тка-ни-"няньки" (суспензионная культура) при выращивании колоний из одиночных клеток кукурузы или протопластов (схема) 1 — качалоч-ная колба, 2 — колония, возникшая из отдельной клетки, 3 — фильтровальная бумага, 4 —металлическая сетка, 5 — суспензия клеток "кормящего слоя", 6 — подложка (пенополиуретан), 7 — питательная среда.

Суспензию клеток можно получить из каллуса, поместив его в жидкую питательную среду с автоматическим перемешиванием. Используя фермент, например пектиназу, получаем суспензионную культуру непосредственно из ткани экспланта (лист, стебель, корень и т. д.). Вначале на поверхности экспланта образуется каллусная ткань, а затем уже от нее отделяются клетки и клеточные агрегаты, в результате чего получается клеточная суспензия. [c.93]

Суспензионная культура — тип культуры, в которой клетки или их агрегаты размножаются, будучи суспендированными в жидкой питательной среде. [c.499]

Глубинное выращивание клеток в суспензионных культурах. Площадь выращиваемых клеток можно существенно увеличить при использовании микроносителей, суспендируемых в питательной среде и на поверхности которых клетки закрепляются, а затем разрастаются в виде монослоя. Такие суспендированные микроносители с клетками моделируют глубинные культуры, например, микроорганизмов. Следовательно, в таких системах совмещаются монослойные и суспензионные культуры животных клеток. [c.540]

Деление суспензионных клеток поддерживается при наличии ауксинов и цитокининов, т. е. т ех гормонов, которые необходимы для индукции и роста каллусных клеток. Таким образом, суспензионные культуры представлены типичными каллусными клетками, обладающими всеми свойствами, характерными для клеток такого рода. [c.93]

В зависимости от способа, условий культивирования и происхождения можно выделить несколько типов культур клеток и тканей. Если культивирование происходит поверхностно на агаризо-ванной питательной среде, то образуется каллусная ткань. Она не имеет четко выраженной структуры, но может различаться по плотности. Происхождение и условия выращивания определят, будет ли каллусная ткань рыхлой, средней плотности или плотной. Рыхлая каллусная ткань имеет сильно оводненные клетки, легко распадается на небольшие группы клеток и кластеры и поэтому может быть использобана для получения суспензионной культуры. Ткань средней плотности характеризуется хорошо выраженными меристематическрши очагами. В ней легко инициируются процессы органогенеза. Наконец, у плотных каллусных тканей различают зоны редуцированного камбия и трахеидоподобных элементов [c.166]

При использовании суспензионных культур в качестве продуцентов вторичных веществ применяют закрытые или открытые системы ферментов в периодическом или проточном режимах выращивания клеток. В закрытой системе клеточная суспензия лишена притока свежей питательной среды до конца выращивания, а в случае непрерывного режима выращивания в открытой системе питательная среда меняется на свежую. Как при периодическом, так и при проточном режимах выращивания в открытой системе клетки остаются в питательной среде и не удаляются даже при ее замене. Однако в открытых системах культивирования при [c.93]

Отдельные клетки, небольшие группы или достаточно крупные агрегаты >50 клеток) выращивают во взвешенном состоянии в жидкой среде. Применяют разные аппараты и способы поддержания их в таком состоянии. Начальный момент получения суспензионной, клеточной культуры является событием рандоми-ческим. Зто означает, что только клетки, которые подряду причин способны к перестройке метаболизма и размножению с высоким коэффициентом в данных конкретных условиях суспензионного культивирования, образуют хорошие линии. Важными характеристиками таких линий является высокая степень дезагрегации (5—10 клеток в группе), морфологическая выравненность клеток (небольшие размеры, сферическая или слегка овальная форма, плотная цитоплазма), отсутствие трахеидоподобных элементов. На рис. 5 представлены клетки суспензионной культуры [c.21]

В последние годы достигнуты большие успехи, связанные с генетической трансформацией клеток, в том числе и растительного происхождения. Схема трансформации включает в себя получение протопласта, введение в него необходимой генетической информации, формирование полноценной растительной клетки, клонирование и регенерацию. (Подробно техника генно-и1гженерных экспериментов будет описана в следующем разделе.) В данной схеме трансформированный протопласт — суспензионная культура — каллусная культура — целое растение (рис. 31.4) — наиболее тех- [c.498]

В процессе образования корончатого галла агробактерии способны трансформировать клетки, прилежащие к поврежденной ткани, которые претерпевают клеточные деления в ответ на поранение. Клетки интактного растения, как правило, проявляют максимальный онкогенный ответ на инфекцию А. tumefa iens между 1,5 и 3 днями после поранения. У различных видов эта компетентная фаза совпадает с первыми клеточными делениями в ответ на поранение. Как было показано [50], раневой ответ можно имитировать в культуре тканей, если превратить покоящиеся мезофильные клетки листа или активно делящиеся клетки суспензионной культуры в протопласты и индуцировать регенерацию клеточной стенки и клеточное деление в соответствующей среде. В определенной фазе становления культуры протопластов клетки компетентны для трансформации Л. tumefa iens. Технология совместного культивирования предусматривает инкубацию протопластов в присутствии агробактерий в соответствующей жидкой питательной среде и позволяет получать большое число трансформантов в контролируемых условиях, Варьируя условия культивирования, плотность высева и изменяя процедуру селекции, можно получить трансформированные колонии клонального происхождения. Важно иметь в виду, что корончатые галлы — это смесь нетрансформированных и различных типов независимо трансформированных клеток и, следовательно, фенотип галла представляет собой сумму фенотипов всех клеток, обнаруживаемых в опухоли. Однако клеточная популяция трансформантов, полученных с помощью сов- [c.151]

Перед выделением хлоропластов целесообразно выдерживать растения (1—4 дня) в темноте для снижения содержания крахмала. Хэнсон с сотрудниками [5] в качестве удобного источника для выделения митохондрий рекомендует использовать клетки суспензионной культуры. [c.261]

Методы тканевых культур, применяемые в вирусологии, обеспечивают интенсивную пролиферацию клеток, получение больших клеточных масс in vitro. Однако, как правило, в условиях массовых (монослойных и суспензионных) культур клетки утрачивают тканевую диффереицировку. [c.11]

Реовирусы эффективно размножаются в большинстве клеточных линий млекопитающих. Принимая во внимание столь широкий круг хозяев, а также высокую стабильность вирусов, при работе с реовирусами следует соблюдать особую осторожность, чтобы не допустить случайной контаминации культур. Чаще всего для размножения реовирусов используют Ь-клетки мыши достоинство этих клеток состоит в том, что при правильном культивировании их можно легко переводить из монослойной культуры в суспензионную и обратно. Для размножения вирусов удобнее всего поддерживать суспензионную культуру Ь-клеток в стерильных плоскодонных колбах при 37°С. Для культивирования клеток используют модифицированную йокликом основную минимальную среду, содержащую 5% ЭТС высокое содержание фосфатов в этой среде обеспечивает поддержание нужного значения pH без пропускания СОг. Плотность суспензии должна составлять 5-10 —ЫО кл/мл, что достигается при пересеве клеток из каждой колбы в две новые один раз в сутки. Если Ь-клетки поддерживаются в суспензионной культуре в течение длительного времени (более 4— [c.202]

Клетки суспензионных культур после окончания действия цитостатика вместе с питательной средой сразу переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют в течение 6 мин при 1000 об/мин. По окончании центрифугирования надосадочную жидкость удаляют, оставляя 0.5 мл для ресуспензирования осадка с помощью механического потряхивания. [c.80]

Клетки суспензионных культур предпочитают приводить в контакт, осаждая их центрифугированием. Хорошо прикрепляющиеся к твердому субстрату клетки достаточно легко сливать в монослое. Существуют два способа. В первом случае силовые линии электрического поля направлены параллельно поверхности пластиковой или стеклянной подложки с клетками, во втором случае силовые линии проходят через специальную электропроводящую подложку, на которой растут клетки. Жизнеспособность клеток, слитых методом электрошока, повышается, если их затем в течение 30—60 мин инкубировать в бескальциевой среде. Само слияние (пробой) также должно проводиться в среде, не содержащей ионов кальция. Показано, что кратковременный гипотонический шок после электропробоя заметно ускоряет слияние клеток. [c.178]

Ткань каллюса, выращиваемую на плотной среде, можпо инфицировать путем механической инокуляции [951]. Довольно легко выращивать в большом количестве в суспензионной культуре клетки листовой паренхимы табака (время удвоения составляет при этом около 36 ч). Такие культуры содержат клетки различного размера и формы — от неболыпих сфериче- [c.136]

После получения различных сомаклональных вариаций от исходного растения наступает следующий этап — отбор необходимых сочетаний признаков. Данный вопрос решается с помощью клеточной селекции, которую проводят практически на любом объекте, введенном в культуру in vitro. Однако удобнее использовать суспензионную культуру или изолированные протопласты. Преимущество этих объектов состоит в быстром росте культуры и равномерном действии селективного фактора на все клетки. Для отбора сомаклональных вариаций соответствующие селективные факторы (соли в высоких концентрациях, гербициды и др.) добавляют в питательную среду для выращивания культуры клеток либо растущие культуры помещают в селективные условия (низкая или высокая температура, освещенность и т.д.). Существует несколько методов клеточной селекции [c.187]

Важно также сохранить присущие клеткам метаболические пути при их выращивании в суспензионных культурах. Более того, регулируя обмен, можно добиваться заметного повышения выхода целевых продуктов. При этом всегда необходимо учитывать тип дифференцировки, или состояния специализации исходных клеток, так как от него зависит видоспецифичность первичного и вторичного метаболизма. [c.509]

Все способы выращивания клеток животных могут быть соотнесены либо к интактным (нетрансформированным с помощью вирусов), либо к вирусотрансформированным клеткам. Успех культивирования первых во многом обусловлен наличием и плотностью адгезинов, благодаря которым они проявляют эффект "заякорива-ния" на подлежащей поверхности стекла, металла или пластика. Однако такие клетки не растут в суспензионных культурах. [c.535]

Вирусотрансформированные клетки животных, напротив, хорошо растут в виде суспензионных культур и хуже или совсем не растут в адгезированном состоянии. [c.535]

В противоположность суспензионным культурам клеток на микроносителях разработаны способы инкапсулирования их в полимерные сферы (полилизиновые, агарозные, из полимерных смол), когда клетки, по-существу, не испытывают того механического напряжения, которое они должны проявлять в свободном виде. Эти способы оказались выгодными для культивирования гибридом в целях получения моноклональных антител. Диаметр микрокапсул, размер пор в них и их толщина могут быть независимо проконтролированы в процессе изготовления и оптимизированы для конкретного типа гибридом. Например, согласно данным фирмы Damon Biote h (Германия) гибридомные клетки человека или животных вначале суспендируют в биосовместимом растворе [c.541]

Неопределенно длительное время можно выращивать клетки млекопитающих в непрерывных хемостатных культурах, когда удается добиваться постоянства концентрации лимитирующего субстрата и плотности клеток (см. главу 7). Теория и практика непрерывного культивирования впервые сформулированы в 1950 г. Ж. Моно, и, независимо от него, А. Новиком и Л. Сцилардом, предложившими термин "хемостат". В хемостатах скорость подачи свежей среды и отбора культуры равны (как и объем их). Скорость роста, развития и размножения клеток контролируется скоростью подвода лимитирующего компонента, а численность — его концентрацией. В качестве лимитирующего рост агента чаще всего используют глюкозу, реже — фосфат и другие вещества. При правильном подборе условий выращивания в хемостатах удается на порядок увеличить выход клеток по сравнению с периодическим культивированием. Причем, хемостатные культуры отличаются накоплением физиологически однотипных клеток. Это можно показать на примере с клетками лейкемии мышей — L 1210 (таблица 55), которые засевали (инокулят) в концентрации 2 10 клеток/мл для периодического культивирования, длившегося 3 суток до пол П1ения максимальной плотности 2,5 10 клеток/мл (суспензионные культуры). При хемостатном культивировании скорость подачи среды и отъема культуры составляла 0,3 сут . [c.543]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология