Антиген агрегация

На первом этапе реакции преципитации происходит связывание молекул антигена с антителами, но видимых преципитатов не образуется. На втором этапе реакции происходит агрегация возникших ранее комплексов антиген — антитело с образованием больших нерастворимых частиц, видимых невооруженным глазом. Первый этап реакции протекает быстрее, более обратим и специфичен, чем второй. [c.16]

Для проведения такого анализа необходимо эффективное отделение комплексов от свободных компонентов. Эта задача достаточно легко решаема, если антиген, либо антитело иммобилизовать на твердом носителе. Иммобилизация позволяет предотвратить агрегацию в растворе и разделить иммунные комплексы и свободные компоненты. Возможность прочного связывания на носителе антигенов или антител с сохранением их способности к специфическому образованию иммунных комплексов привела к созданию твердофазных иммунохимических методов, широко используемых в настоящее время в химическом анализе. [c.114]

Если в материале содержится специфический антиген, он соединяется с сывороткой, адсорбированной на поверхности лунок, и, в свою очередь, связывает иммуноглобулины на поверхности эритроцитов. В результате происходит агрегация эритроцитов (гемагглютинация). В описанной модификации реакция применяется для выявления антигенов ротавирусов и других вирусов в фекалиях больных. [c.279]

Л — образование комплекса антиген—антитело между поливалентным антигеном и одновалентным антителом (антитело взято в избытке) Б —образование преципитатов при неспецифической агрегации комплексов антиген-антитело В—растворимый комплекс при избытке антигена. [c.343]

Для выявления молекул клеточной поверхности, участвующих в межклеточной адгезии, белки плазматической мембраны солюбилизируют, отделяют друг от друга и каждую фракцию испытывают на способность нейтрализовать действие фрагментов антител, блокирующее агрегацию клеток (этапы 3 и 4). Затем фракции, проявившие такую способность, очищают и вновь тестируют до тех пор, пока не будет получен чистый белок (этот процесс на схеме не показан). Другой Иммунологический подход состоит в получении большого числа моноклональных антител (разд. 4.5.4) к антигенам клеточной поверхности и их скрининге для выявления тех, которые будут блокировать межклеточную адгезию. Оба иммунологических метода основаны на важном общем наблюдении простое нанесение на клеточную поверхность антител само по себе не препятствует нормальной клеточной адгезии адгезия блокируется только тогда, когда мишенями для связывания антител служат специфические молекулы клеточной [c.518]

IV. Немедленно смешайте компоненты каждой капли с помощью разных стеклянных палочек н наблюдайте прп малом увеличении наличие агглютинации. В отрицательном контроле также может происходить некоторое слипание клеток, но эта агрегация оказывается ничтожной по сравнению с таковой в смеси суспензии, содержащей антиген клеток с антисывороткой. [c.142]

Агрегация растворимых антигенов антителами [c.71]

По принципу организации и функционирования система комплемента сходна с системой свертывания крови. И в той, и в другой системах имеется инициативный механизм. Биохимический каскад свертывающей системы запускается при повреждении клеток, например, эндотелия сосудов. Каскадный механизм комплемента активизируется вследствие агрегации антител. Конечный результат активации первой системы — формирование тромба, второй- образование дыр в мембране той клетки, на поверхности которой сформировался агрегат антиген — антитело. [c.75]

Эффекты неспецифического связывания могут также быть источником проблем. Изменение поверхности частиц влияет на агрегацию частиц и адсорбцию реагента, так что следует оптимизировать условия, чтобы уменьшить вандерваальсово притяжение между частицами, обеспечив достаточное куло-товское отталкивание, но не ингибируя реакцию антитело—антиген. [c.585]

Хотя повышение pH и ионной силы или присутствие липидов способствует агрегации всех глиадинов [10], образование фибрилл наблюдалось только у некоторых а-глиадинов. Ввиду этого возможно, что образование фибрилл вовлекает вторичные специфические взаимодействия, зависящие от конформации основных единиц [114]. Структура других глиадинов может препятствовать образованию фибрилл этого типа. К тому же иммунохими-ческое исследование глиадинов [28] показывает, что а-, р-, у- и ы-глиадины состоят из иммунологически различных белков, т. е. различных по своей третичной структуре. Различие антигенных структур недавно подтверждено методом ELISA [179]. Обнаружены различия в N-концевых последовательностях. Изучение структуры глиадинов с помощью трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопии обнаруживает в них не определенную структуру, а аморфную совокупность [55, 142]. [c.198]

При помощи РПГА определяют полные (бивалентные) антитела. Неполные (моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этим методом, так как, соединяясь с антигеном, блокируют его, но не могут вызвать агрегации частиц в крупные конгломераты. Для выявления неполных, например антирезусных, антител в исследуемой сьшоротке используют специальную реакцию — п р о б у с антиглобу-линовой сывороткой, которая получила название р е а к - [c.108]

Предполагают, что для прочного связывания lq необходима определенная конформационная перестройка IgG. Это предположение базируется на том, что IgG в форме комплекса с антигеном, а также IgG, агрегированный иными способами (прогреванием при 63°С, сшивкой бифункциональными реагентами), прочно связывает lq. IgM прочно связывает lq также после его агрегации. Но это условие не является обязательным. Как убедительно показали Х.-Ч. Чианг и М. Кошланд (Н.— h. hiang, М. Koshland, 1979), даже комплекс IgM-антител с одновалентным гаптеном имеет высокое сродство к lq. Хотя агрегации IgM не происходит, наблюдаются вызванные гаптеном изменения конформации иммуноглобулина, в том числе F -участка молекулы. Все эти данные позволяют предполагать лишь, что связывание lq — кооперативный процесс, и прочная фиксация достигается скорее всего в случае соединения lq с иммуноглобулинами по нескольким точкам. Так как в молекуле IgG два центра для связывания lq, но стерически доступен, по-видимому, только один, для связывания lq по нескольким точкам необходимо сближение в пространстве нескольких эффекторных центров. Это достигается при агрегации IgG или его фиксации на нерастворимом носителе. В молекуле IgM пять доступных для lq центров. Поэтому кооперативный эффект при взаимодействии может быть достигнут даже при формировании эквимолекулярного комплекса, но при условии, что все центры для связывания lq в молекуле IgM будут располагаться в пространстве наиболее благоприятным образом для фиксации лиганда. Этому, очевидно, способствует гаптен, связывающийся с IgM-антителами. [c.136]

Взаимодействуя с комплексом антиген-антитело, компоненты системы комплемента способны изменять физикохимические свойства этого комплекса и, таким образом, влиять на его судьбу в организме. Способность к )мпле-мента увеличивать степень дисперсности (уменьшать степень агрегации) иммунных комплексов была впервые продемонстрирована Г. Миллером и В. Нюссеицвейгом [c.182]

Реакция преципитации не принадлежит к числу чувствительных реакций определения антител (антигена). Если концентрация антител в пробе ниже 0,5 мг/мл, преципитат образуется медленно. Для полноты осаждения комплекса пробы приходится оставлять на холоду на несколько суток. При низкой ко1щентраини антител преципитат вообще не выпадает. Однако агрегация антител антигеном все же идет и, чтобы ее оценить, прибегают к технике нефелометрии. Прибор основан на оценке степени рассеивания света, в качестве источника которого [c.252]

Клетки для разделения суспендируют в СРЭЗ или ЗФР без СПК, которой следует избегать, так как по неизвестным причинам она повышает неспецифическое связывание клеток селезенки слоем желатины. Чтобы экранировать клетки, несущие рецепторы к антигенным детерминантам желатины, можно воспользоваться 0,1%-ным раствором желатины, которая не образует геля при 4°С. Агрегацию клеток можно уменьшить, прибавив [c.284]

Преципитацию иммунных комплексов можно стимулировать полиэтилеигли-колем. Например, после инкубации в теченне 1,6 ч прн комнатной температуре с 2,5% ПЭГ-6000 иммунные комплексы осаждают центрифугированием (2000 д, 10 мнн) из раствора со стократным соотношением количества антигенов и антител при суммарной их концентрации 50 мкг/мл [Ма1(]теп1 е1 а .. 1981]. По-видниому, в этом случае осаждение комплексов идет за счет обычной агрегации, а не путем образования пространственной сетки. [c.118]

Иммунопреципитацию осуществляли следующим образом. 0,1 мл суммарной ферментной фракции из плаценты суспендировали в буфере (0,02 М Трис-НС1, pH 7,9+5 мМ Mg Ia+O, мМ ЭДТА+0,6 мМ ДТТ+20 мМ КС1), содержащем по 0,25% Тритона Х-100 и дезоксихолата натрия. Детергенты были введены для предотвращения возможности неспецифической агрегации компонентов иммунной реакции и их комплексов. К суспензии добавляли 0,5 мкл иммунной антисыворотки кролика. Это количество антисыворотки содержит большой избыток антител по отношению к находящемуся в 0,1 мл ферментной фракции количеству ПНФ. Такой избыток, с одной стороны, обеспечивает связывание в индивидуальные иммунные комплексы (здесь сетка не образуется) всех молекул ПНФ, а с другой—подготавливает выполнение условия эквивалентности концентрации для образования пространственной сетки со вторичными антителами козы, для которых антитела из сыворотки кролика являются антигенами. Если для полного связывания ПНФ можно обойтись меньшим, чем 0,5 мкл, объемом иммунной антисыворотки кролика, то этот объем следует дополнить до 0,5 мкл его неиммунной сывороткой. В отношении взаимодействия со вторичными антителами обе сыворотки эквивалентны. [c.271]

Преципитация (агрегация) антигена антителами происходит не всегда, даже если сам факт высокоаффинного связывания имеет место. Агрегация требует соблюдения нескольких условий. Во-первых, и антитело, и антиген должны быть, как минимум, бивалентными (т. е. каждая молекула антигена должна иметь не менее двух идентичных детерминант, а каждая молекула антитела не менее двух активных центров, специфичных к этим детерминантам). На рис. 28 легко увидеть, что моновалентность любого из двух партнеров запрещает образование мультимолекулярных комплексов. [c.72]

В организме практически на любой белковый антиген вырабатывается спектр антител, специфичных не к одной, а к двум или нескольким детерминантам. При этом на каждую детерминанту реагирует не один клон лимфоцитов, а несколько клонов или даже несколько десятков клонов, различающихся строением активного центра Ig-рецептора и степенью сродства к антигену. Такая поли-клональность реакции синтеза антител обеспечивает надежную Агрегацию антигена. Вместе с тем решается проблема поиска и блокировки функционально значимой детерминанты патогена, поскольку продуцируется спектр антител, перекрывающий практически все сколько-нибудь оригинальные участки молекулярной поверхности белкового антигена. Иммунная система выстреливает по антигену не пулей, а дробью, что повышает вероятность попадания. [c.74]

Агрегация антигена — это необходимый шаг в процессе его удаления из организма, полного уничтожения антигена. Здесь важно отметить, что для выполнения защитной функции антител важна их способность не столько преципитировать антиген, сколько образовывать мультимолекулярные комплексы. Зачастую эти комплексы сохраняют растворимость, но сам факт их образования уже включает механизм элиминации антигена. В этот механизм вовлечены нелимфоидные клетки, о чем пойдет речь в следующей главе. Здесь же проведем анализ эффекторной функции антител против антигенов, представленных на поверхности живых клеток. [c.74]

Связывание мономерного IgE с F R не ведет к дегрйну-ляции базофилов и тучных клеток. Только перекрестное сшивание (агрегация) F R в клеточной мембране инициирует высвобождение содержимого гранул. Этого эффекта можно достичь с помощью мультимолекулярных агрегатов, образованных антителами класса IgE и антигеном. В качестве дегранулирующих лигандов эффективны и химически агрегированные IgE, а также бивалент- [c.88]

Кэппинг. Процесс агрегации молекул клеточной поверхности (обычно вызываемый антителами). Лейкотриены. Фармакологически высокоактивные метаболиты арахидоновой кислоты. Лейкоцитарные функциональные антигены (LFA). Группа молекул лейкоцитарной поверхности, опосредующих антиген-неспецифическую межклеточную адгезию лейкоцитов и других клеток. LFA-1 представляет собой антиген D11a/ D18, LFA-2 - D2 и LFA-3 - D58. Лектин-зависимый путь. Путь активации комплемента, инициируемый маннан-связывающим лектином (МСЛ) и пересекающийся с классическим путем активации. [c.560]

Важнейшими рецепторами поверхностной мембраны макрофагов являются F -рецепторы, способные связывать иммунные комплексы и тем самым облегчать фагоцитоз патогенных агентов, которые соединились со специфическими антителами против их антигенов. Специфические антитела против конкретного антигена составляют очень небольшую часть всех иммуноглобулинов плазмы. Поэтому важно, чтобы F -рецепторы фагоцитов отличали антитела, связанные со своим антигеном, от свободных антител. При формировании иммунного комплекса иммуноглобулины претерпевают агрегацию и конформационные изменения в области F -фрагмента. Эти изменения объясняются поливалентностью антигена. В результате резко возрастает аффинитет связывания иммуноглобулинов с F -рецепторами, которые являются изотип-спе-цифическими, т. е. существуют особые F -рецепторы для каждого класса иммуноглобулинов. IgG-антитела в составе соответствующих иммунных комплексов распознаются и связываются F yR, которые экспрессированы на мембранах моноцитов/макрофагов в количестве 10 рецепторов на клетку [37]. [c.151]

Система комплемента человека включает в сеоя 20 белков плазмы. Механизм их последовательного взаимодействия довольно хорошо изучен. Классический путь активации комплемента начинается с того, что субъединица lq макромолекулы С1 связывается с IgG или IgM в случае их соединения с антигеном или агрегации. Затем следует активация С1г и С Is. Активированный С1 последовательно расщепляет С4 и С2, в результате чего происходит сборка фермента С4Ь2Ь, расщепляющего СЗ при классическом пути. Активность С4Ь2Ь ограничивается лабильностью С2Ь и в меньшей степени специфическими регуляторными белками, инактивирующими С4 (сюда входят белок, связывающийся с С4, и фактор I). [c.26]

Одна серия экспериментов, выполненная в лаборатории Кошленда (Brown, Koshland, 1975), основана на исследовании способности F -фрагмента к фиксации комплемента в результате связывания антителом антигена. В этих опытах использовали IgM-антитела против бета-лактозида. Сам по себе этот гаптен не индуцировал комплементсвязывающую активность. Только после присоединения к неспецифическому белковому носителю (РНКаза с одним гаптеном на моль) он приобрел способность вызывать такую активность. Поскольку такой антиген был моновалентен, то он не мог обусловить агрегацию или поперечную сшивку молекул IgM—антител, что, как известно, может явиться причиной активации системы комплемента. Другое объяснение, а именно, что функционирование определенных участков F -фрагментов зависит от конформационных изменений вследствие связывания антигена в активном центре, является более вероятным. Это объяснение предполагает наличие аллостерических свойств у иммуноглобулинов. [c.31]

Состояние агрегации иммунных комплексов не должно препятствовать фиксации на Рс-фрагменте компонентов комтемента и, следовательно, их диффузии в преципитате. Изучение структуры специфического преципитата антител с антигенами бьпо проведено с помощью спиновых меток (Григорян и др., 1969). Для мочения белка исполь овали нитроксильный радикал, синтезированный на базе малеинимида. Он ковалентно реагировал с SH-группами кроличьих антител после восстановления 2-мсркаптоэтанолом межцепочечных дисульфидных связей. При этом активность антител сохранялась. В результате преципитации спин-меченых антител яичным альбумином метка продолжала вращаться свободно, не испытывая стерических препятствии. С другой стороны, неспецифическое осаждение спин-меченых антител сульфатом аммония приводило к сильной иммобилизации метки. Эти данные указывают на решетчатую, рыхлую структуру преципитата, образованного иммунными комплексами. [c.32]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология