Комплементация

Рис. 14.3. Вьщеление /гг/-генов методом генетической комплементации. Для комплементации Nif -щтамма К. pneumoniae используется банк клонов ДНК К1Г+-клеток. Трансформированные клетки отбирают по их способности расти на минимальной среде, не содержащей связанного азота.

Помимо комплементации, для идентификации генов биосинтеза антибиотиков могут использоваться и более прямые подходы. Так, с [c.259]

Заметим, однако, что для некоторых других систем наблюдается комплементация в пределах одного и того ше класса. Это оказывается возможным в том случае, если активный белок состоит из двух или нескольких идентичных полипептидных субъединиц и если эти субъединицы, будучи поврежденными в разных местах, сохраняют способность агрегировать с образованием более или менее активного белка. [c.494]

Как следует из рис. 28, сближение тетраэдрической 5 -фосфат-ной группы с атомом кислорода молекулы воды, связанной с Са(И), может приводить к нуклеофильной атаке фосфатной группы [297]. Согласно данным рентгеноструктурного анализа [33] и исследованиям активного центра при комплементации пептидных аналогов [305], фосфатная группа стабилизируется положительно заряженными остатками аргинина-35 и аргинина-87. Это может облегчить поляризацию 5 -фосфатной группы, в результате чего повысится ее чувствительность к нуклеофильной атаке. Более того, расщепление группы 5 -С—О—Р между кислородом и фосфором [306] делает нуклеофильную атаку выгодной с точки зрения структуры. [c.119]

Первые иг/-гены, идентифицированные методом комплементации, были выделены из банка клонов диазотрофной бактерии Klebsiella pneumoniae. Эта хорощо изученная энтеробактерия, которая обнаруживается в почве и воде, а также в кищечнике человека. Схема вьщеления состоит в следующем (рис. 14.3). [c.310]

Рис. 3. Карта комплементации для 5%-ного уровня отсечения между девятью изученными 8-аллелями

Дж. Финчем. 1968. Межаллельная комплементация. М., "Мир". [c.103]

Как можно ответить на вопрос о том, локализованы ли мутации в одном и том же гене, в близко расположенных генах или же в генах, отстоящих друг от друга на некотором расстоянии Ответ на этот вопрос можно получить с помощью теста на комплементацию. Если два мутантных бактериофага несут мутации в разных генах, то при заражении бактерии обоими мутантными фагами одновременно часто оказывается, что бактериофаги могут размножаться в бактерии-хозяине. Поскольку в этйм случае у каждого фага есть неповрежденный ген для Одного из двух затронутых белков, все генетические функции в этом случае выполняются. Если же у обоих мутантных фагов поврежден Один и тот же ген, то такие фаги не смогут дополнять функции друг Друга при совместном заражении. Такой эксперимент часто называют Чис-гранс-сравнением. Одновременное заражение двумя различными мутантами — это транс-тест. В качестве же контроля используют цис-тест бактерию заражают одновременно рекомбинантом, несущим обе мутации в одной и той же ДНК, и стандартным фагом. В этом случае репликация должна протекать нормально. [c.250]

Когда с помощью цис-транс-теста были исследованы фаги с разными мутациями в области гП, то стало ясно, что существуют два гена—гИА и гИВ, причем они обнаруживались лишь по комплементации в цис-транс-тесте. Для обозначения участка ДНК, идентифицируемого как генетическая единица, Бензер предложил термин цистрон. Для больщинства целей, термины ген и цистрон—синонимы, и оба эти термина достаточно свобЬдно используются в бидхнмической литературе [c.250]

Несмотря на то что сейчас выяснены лишь некоторые ключевые моменты тех химических процессов, которые лежат в основе всех этих явлений, использование температурочувствительных мутантов и тестов на комплементацию поможет установить суммарное число генов, принимающих участие в этих процессах, а также локализацию этих генов в хромосоме Е. oli. В ряде случаев это может способствовать более полному пониманию биологического явления. [c.255]

Какие химические процессы лежат в основе супрессии (подавления) одной мутации другой мутацией, локализованной в иной точке хромосомы Однозначного ответа на этот вопрос дать нельзя. Редко мутация супрессируется другой мутацией, локализованной в пределах того же самого гена. Такой эффект может быть назван внутригенной комплементацией. Предположим, что мутация приводит к такой аминокислотной замене, которая нарушает стабильность структуры или функцию белка. Возможно, что мутация в другом сайте, захватывая остаток, взаимодействующий с замещенной аминокислотой, меняет характер взаимодействия двух остатков, что приводит к восстановлению функциональной активности белка. Так, например, если боковая цепь первой аминокислоты мала, а в результате мутации она замещается на более длинную боковую цепь, то вторая мутация, приводящая к уменьшению размера другой боковой цепи, может позволить образующемуся белку свертываться и функционировать подобно нормальному белку. Такой случай был обнаружен среди мутантов триптофансинтетазы [144]. Мутанты этого белка, у которых Gly-211 был заменен на Glu нли Туг-175— на ys, синтезировали неактивные ферменты, тогда как двойной мутант, т. е. мутант, в котором имели место обе эти замены, синтезировал активную триптофансинтетазу. Считают, что в большинстве случаев внутригенной супрессии происходят изменения во взаимодействии субъединиц олигомерных белков. [c.255]

Так же как и пуфы политенных хромосом (которые, возможно, имеют сходное строение), хромосомы типа ламповых щеток активно участвуют в транскрипции. Считают, что приблизительно 3% ДНК участвует в образовании мРНК, накапливающейся в ооците и функционирующей на ранних этапах эмбрионального развития [272]. Было бы логично предположить, что одна петля в хромосоме типа ламповых щеток,, подобно одному диску политенной хромосомы, играет роль транскрипционной единицы. Однако здесь мы сталкиваемся со следующим парадоксом количество ДНК, содержащееся в одном диске или в одной, петле, достаточно для детерминирования 30—35 белков среднего размера. Тем не менее при анализе тонкой генетической структуры хромосомы дрозофилы в каждом диске удается обнаружить не более одной единицы комплементации [273]. Из этого следует, что всего лишь 3% ДНК дрозофилы содержат структурные гены для синтеза белков. Что же делает остальная ДНК и почему мутации в ней не приносят вреда организму Ответы на эти вопросы до сих пор, к сожалению, не получены. [c.297]

Фиксация азота - очень сложный процесс, требующий согласованного действия множества разных белков. Поэтому вряд ли можно было ожидать, что вся генетическая информация, необходимая для фиксации азота, будет содержаться в каком-то одном фрагменте ДНК и что этот фрагмент удастся вычленить из генома диа-зотрофного микроорганизма и перенести в не-диазотрофный организм. Следует еще учесть, что физиологические условия в организме реципиента должны быть подходящими для функционирования активной нитрогеназы. Более приемлемый способ вьщеления генов азотфиксации (и /-генов) состоял в том, чтобы идентифицировать и охарактеризовать те клоны библиотеки ДНК дикого типа, которые восстанавливают способность различных мутантов данного микроорганизма фиксировать азот. Такой метод называется генетической комплементацией. [c.310]

Для вьщеления других генов, участвующих в фиксации азота, применяли два подхода. Во-первых, использовали банк клонов К. pneumoniae для комплементации независимо возникающих Nif -MyTaHTOB, увеличивая тем самым вероятность того, что в каждом случае будет выделен другой иг/-ген. Во-вторых, вьщеленные и//-гены использовали в качестве гибридизационных зондов для скрининга банка клонов хромосомной ДНК К. pneumoniae, несущих большие вставки (от 7 до 10 т. п. н.), исходя из того, что у прокариот гены одного пути биосинтеза обычно образуют кластеры. [c.310]

Для идентификации генов образования клубеньков (йО -генов)вновь использовали генетическую комплементацию. Не способный образовывать клубеньки (Nod ) мутантный штамм R. meliloti трансформировали банком клонов хромосомной ДНК R. meliloti дикого типа и выделяли колонии, приобретшие способность образовывать клубеньки на корнях люцерны (рис. 14.6). Стратегия заключалась в следующем. [c.316]

Идентификация гена в отсутствие гетерологичного зонда или какой-либо информации об этом гене — задача не из легких. В таких случаях часто приходится разрабатывать принципиально новую схему отбора. В ее основе может лежать иммунологическая идентификация искомого белка, определение его активности, ДНК-гибридиза-ция с олигонуклеотидным зондом, нуклеотидная последовательность которого была определена исходя из данных о частично секвениро-ванной аминокислотной последовательности очищенного искомого белка, или комплементация мутантов. Очень часто после идентификации гена, кодирующего определенную функцию, можно выделить аналогичные гены из других организмов, используя первый вьщеленный ген в качестве гетерологичного зонда для ДНК-гибридизации. Результативность данного подхода зависит от близости нуклеотидных последовательностей зонда и искомого гена. Эта стратегия оправдывает себя в случае консервативных в эволюционном плане генов, например генов, кодирующих белки, которые участвуют в фиксации азота, но в больщинстве случаев она малопригодна. [c.319]

Комплементация ( omplementation) Восстановление фенотипа дикого типа (или близкого к нему фенотипа) при объединении в одной клетке двух ДНК с двумя рецессивными мутациями, находящимися в трале-конфигурации. [c.551]

Фермент, выделяемый обычными методами, катализирует не только реакцию (1), но также реакции (2) и (5) однако свободный индол в качестве промежуточного продукта в реакции (1) не образуется. Сейчас известно, что чистый фермент (мол. вес 105 ООО) представляет собой комплекс, который можно разделить хроматографическими методами на две белковые 5 фракции А и В. Белок А состоит из одной полипептидной цепи с молекулярным весом 29 500. Цепь построена из 272 аминокислот (и не содержит триптофана). Остальную часть комплекса составляет белок В. Ни белок А, ни белок В в отдельности реакцию (I) не катализируют реконструированный фермент (молекула которого состоит из одной молекулы А и одной молекулы В) вновь приобретает способность осуществлять свою] функцию. Белок А хотя и слабо, но все же катализирует реакцию (2), а белок В — реакцию (5), что позволяет определять эти компоненты триптофансинтетазы в экстрактах другой, более удобный способ основан на определении недефектного белка А внутриклеточно, с помощью теста на комплементацию, или вне клетки — по ферментативной активности. [c.497]

Информация, которую несут катаболические плазмиды, может расширять круг субстратов хозяина либо полным кодированием нового биохимического пути, либо дополнением и продолжением хромосомально кодируемых путей, либо объединением двух метаболических путей. Комплементация, таким образом, особенно важна, если существующие механизмы приводят только к частичной деградации соединения, в результате которой накапливаются потенциально токсичные метаболиты. Такие цлазмиды могут также обеспечивать существование ферментов, катализирующих с большей субстратной специфичностью реакции ферментных систем, закодированных в хромосомах. Плазмиды с молекулярной массой от 1,5 до более чем 900 тыс. пар нуклеотидов (п. н.) были выделены из природных бактерий. Плазмиды, используемые для конструирования векторов, обычно малы (2—10 тыс. п. н.), в то время как катаболические плазмиды относятся к наиболее крупным. С этими молекулами трудно работать, и, хотя разработаны методы их исследования, об их структурной организации, за исключением нескольких, известно мало. [c.325]

Как уже отмечалось, исследуя взаимодействие 8 -аллелей в диплоидных пыльцевых зернах тетраплоидов, можно построить карту комплементации по этому локусу, подобно тому, как строились такие карть для микроорганизмов. Считается, что такие карты для микроорганизмов отражают взаимодействие между белковыми субъединицами (полипептидами , из которых составлена молекула фермента. Однако толкование истинного значения подобных карт зачастую крайне затруднител но, так как нелегко хфедставить результаты в виде карты, если молекула фермента состоит более чем из двух субъединиц или если ферментативная активность проявляется при различном числе субъединиц в молекуле соответствующего белка и, кроме того, нет возможности дополнить результаты генетического изучения взаимодействия биохимическим исследованием генных продуктов. Несмотря ва эти и другие очень существенные ограничения, построение таких карт взаимодейст ВИЯ у организмов безусловно интересно, так как дает некоторое приближенное представление о внутренней структуре генных локусов. [c.84]

Рассмотрен возможный механизм самосовместимости у тетраплоидов и предложена карта комплементации для девяти изученных 5-ал лелей. [c.92]

В присутствии смеси соответствующих мононуклеотидов свободные концы синтетических ДНК строк б, б, вив могут дополняться компле-ментирующими нуклеотидами, которые далее под действием полимеразы свяжутся в цепь. Роль 10 средних нуклеотидов строк б, в и б, в — это роль кнопок, скрепляющих две цепи синтетического полинуклеотида. Таким образом, в итоге, исходя из синтетических олигонуклеотидов по 20 нуклеотидов в каждом, получаются два отрезка ДНК-кодонов транспортной рибонуклеиновой кислоты, включающих первый — 30 нуклеотидов (от 1 до 30), второй также 30 (от 21 по 50), нуклеотиды от 21 до 30 в строках в и б являются комплементирующими. После их комплементаций до полных двойных нитей и разъединения последних достроенные (что не показано на рисунке) нити в и б могут быть скреплены за [c.695]

В присутствии смеси соответствующих мононуклеотидов свободные концы синтетических ДНК строк б, б, б и б могут дополняться комплементирующими нуклеотидами, которые далее под действием полимеразы свяжутся в цепь. Роль 10 средних нуклеотидов строк б, б и б, б — это роль кнопок, скрепляющих две цепи синтетического полинуклеотида. Таким образом, в итоге, исходя из синтетических олигонуклеотидов по 20 нуклеотидов в каждом, получаются два отрезка ДНК-кодонов транспортной рибонуклеиновой кислоты, включающих первый — 30 нуклеотидов (от 1 до 30), второй также 30 (от 21 по 50)—нуклеотиды от 21 до 30 в строках б и б являются комплементирующими. После их комплементаций до полных двойных нитей и разъединения последних достроенные (что не показано на рисунке) нити в и б могут быть скреплены за счет этих десяти комплементирующих нуклеотидов 21 —30. Затем должно следовать новое комплементирование свободных концов, т. е. 1—20 и 31—50. Таким образом, синтез на матрице полинуклеотида с последовательностью звеньев, комплементарных звеньям т-РНК аланина от 1 до 50, будет завершен. [c.735]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.184 , c.206 ]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.184 , c.206 ]

Основы биологической химии (1970) -- [ c.494 ]

Молекулярная генетика (1974) -- [ c.311 , c.312 ]

Генетика человека Т.3 (1990) -- [ c.149 , c.207 , c.209 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология