Иммунологическая идентификация

Рис. 14-63. Иммунологический метод идентификации белков плазматической мембраны, участвующих в межклеточной адгезии. На этапе 1 получают антитела (обычно кроличьи) к исследуемым клеткам или к их изолированным плазматическим мембранам. На этапе 2 выделяют и тестируют моновалентные фрагменты, чтобы получить препарат антитела, блокирующий межклеточную адгезию. (Используются моновалентные фрагменты, пол ченные с помощью протеаз - см. разд. 18.2.4), так как они не сшивают клетки и, таким образом, не вызывают ложной адгезии.

Для характеристики организмов используют разнообразные признаки морфологические, цитологические, культуральные, физиологические, биохимические, иммунологические и др. Если объем информации для характеристики объектов по существу беспределен, как бесконечен сам процесс познания природы, то для целей идентификации может быть использован ограниченный объем информации, достаточный для распределения организмов по таксономическим группам. [c.155]

До разработки иммунологического теста идентификация гетерозигот основывалась только на определении активности фактора УП1. Хотя средняя активность у гетерозигот действительно была низкой и составляла около 50%, сохранялось боль- [c.57]

Идентификация и количественная оценка иммунологических продуктов [c.155]

Обнаружение специфических IgM к вирусу краснухи имеет важное значение при постановке диагноза первичной и врожденной инфекций. Существует множество методов определения и идентификации таких антител. В основе ранее применяемых методов лежит разделение сывороточных IgG и IgM гель-фильтрацией или центрифугированием в градиенте плотности сахарозы. Полученные фракции тестируют в РТГА на присутствие специфических иммуноглобулинов. В последнее время эти методы заменены чисто иммунологическими методами, которые не требуют фракционирования сыворотки. Существуют два основных варианта этих методов. Первый предполагает идентификацию иммобилизованного антигена. При этом антиген вируса краснухи связывают с поверхностью пластика (например, дном лунки 96-луночного планшета), инкубируют его с сывороткой пациентов, а затем с меченными антителами против IgM человека, содержащихся в исследуемой сыворотке. Если после [c.327]

Все изложенное не имеет своей целью дискредитировать исключительные возможности использования иммунологических подходов для идентификации заранее выбранных белков. Следует лишь иметь в виду некоторую вероятность ошибки, обусловленную неоднозначностью иммунного ответа. К счастью, такая вероятность достаточно мала, поскольку в реальной ситуации анализируемая смесь биологических макромолекул содержит сравнительно небольшое число антигенов. [c.102]

Хотя подход с использованием синтетических пептидов обладает значительными потенциальными возможностями, остается неразрешенным ряд реальных или теоретических препятствий. Слабая антигенная активность большинства синтетических пептидов вынуждает для усиления иммунного ответа использовать в экспериментальных исследованиях на животных адъювант Фрейнда. В связи с тем что на людях адъювант Фрейнда использовать нельзя, для клинического применения синтетических пептидов необходимо обнаружение или разработка эффективных адъювантов, пригодных для человека. Не исключено, что одного пептида будет недостаточно для индукции резистентности, так как большие поверхностные антигены обычно содержат несколько различных иммунологических доменов, вызывающих защитный гуморальный и (или) клеточный ответ [15, 197]. Иногда идентификация небольших защищающих пептидов может оказаться невозможной, как, например, пептидов гемагглютинина вируса гриппа А, которые стимулировали бы образование антител, эффективно нейтрализующих инфекционность вируса [58, 70, 119]. Можно также предсказать трудности в стимуляции иммунного ответа к эпитопам, которые сформированы в результате сближения разных участков линейной белковой молекулы. Наконец, ожидаемому анти-тельному ответу у значительной части населения может препятствовать полиморфизм антигенов гистосовместимости класса II, контролирующих ответ на синтетические антигены [168]. Однако, поскольку уже достигнута защита на одной экспериментальной модели, можно надеяться на получение иммуногенных препаратов, активных в отношении других вирусов. [c.154]

Идентификация гена в отсутствие гетерологичного зонда или какой-либо информации об этом гене — задача не из легких. В таких случаях часто приходится разрабатывать принципиально новую схему отбора. В ее основе может лежать иммунологическая идентификация искомого белка, определение его активности, ДНК-гибридиза-ция с олигонуклеотидным зондом, нуклеотидная последовательность которого была определена исходя из данных о частично секвениро-ванной аминокислотной последовательности очищенного искомого белка, или комплементация мутантов. Очень часто после идентификации гена, кодирующего определенную функцию, можно выделить аналогичные гены из других организмов, используя первый вьщеленный ген в качестве гетерологичного зонда для ДНК-гибридизации. Результативность данного подхода зависит от близости нуклеотидных последовательностей зонда и искомого гена. Эта стратегия оправдывает себя в случае консервативных в эволюционном плане генов, например генов, кодирующих белки, которые участвуют в фиксации азота, но в больщинстве случаев она малопригодна. [c.319]

Следует иметь в виду, что антигенной активностью обладает не молекула вводимого белка в целом, а определенные группировки, разные в разных случаях. Такими группировками могут быть и искусственно введенные в белок антигены. Например, диазотированная л-аминофе-ниларсоновая кислота вступает в реакцию азосочетания с тирозинным звеном белка, и модифицированный таким образом белок (сыворотка крови лошади), будучи введен кролику, вызывает образование специфического антитела. Но это же антитело действенно и по отношению к обработанной подобным образом сыворотке других животных. Таким образом, нельзя переоценивать возможности иммунологической идентификации белков. Мы не приводим гипотез механизма возникновения антител, поскольку здесь ничего окончательного не имеется. [c.669]

Перешедшие на фильтр белки Таубин и соавторы идентифицировали иммунологически. Подробное рассмотрение метода выходит за рамки этой книги, поэтому ниже он описан лишь вкратце. Фильтр вымачивали в 3%-ном растворе бычьего сывороточного альбумина для насыщения оставшихся свободными центров сорбции, затем инкубировали с антисывороткой к интересующему белку, промывали и инкубировали с индикаторными антителами к иммуноглобулинам первой сыворотки, конъюгированными с флюоресцентным красителем или меченными радиоактивно. Перенос белков из геля на нитроцеллюлозный фильтр существенно облегчает их иммунологическую идентификацию, так как крупные молекулы у-глобулинов плохо диффундируют в гель, тогда как фильтр сорбирует белки на своей поверхности и они легко доступны для антител. [c.108]

Методы, собранные в этих двух книгах, весьма разнообразны и охватывают почти все стороны исследований этой важнейшей грунны соединений. Здесь можно найти методы выделения и анализа отдельных компонентов нуклеиновых кислот (пуриновых и пиримидиновых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов), методы выделения, разделения и анализа олигонуклеотидов, изолирования отдельных клеточных органелл, выделения и фракционирования нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), а также изолирования их суммарной фракции для различного рода исследований, способы идентификации нуклеиновых кислот, методу. модификации их молекул, методы изучения их синтеза как in vivo, так и in vitro, методы изучения нуклеиновых кислот в связи с процессом биосинтеза белка и, наконец, методы изучения биологических свойств нуклеи1говых кислот, в том числе их иммунологических свойств. [c.5]

Метод гибридизации ДНК и иммунологические методы позволяют идентифицировать многие гены и их продукты. Если при этом искомый ген кодирует фермент, не синтезируемый клеткой-хозяином, то для обнаружения клонов, содержащих данный ген, можно использовать метод идентификации на чащках. Так были идентифи- [c.69]

Другие методы идентификации рекомбинантных плазмид основаны на экспрессии включенного в них гена. При этом идентифицируется белковый продукт, для чего используются иммунологические методы или методы определения его специфической активности. Для обнаружения антигенов в бактериях путем скрининга, на основе специфического их взаимодействия с антителами, часто используется метод, разработанный Брумом и Джилбертом. Для этого пластиковый диск покрывают слоем специфических радиоактивных антител и помещают его на предварительно лизированные колонии. Антигены из лизиро-ванных бактерий связываются с антителами на диске. Положение антигенов, адсорбированных на диске, определяют с помощью радиоавтографии. [c.316]

Один из важных п чрезвычайно избирательных методов идентификации и разделения белков — иммунологический. Иммунологические реакции — специфические защитные реакции высших животных по отношению к попадающим в организм чужеродньш белкам (по последним данным, и к нуклеиновым кислотам). При повторном введении в кровяное русло животного чуж еродного белка в кровяной сыворотке появляются белки, относящиеся чаще всего к классу у-глобулинов (так называемые антитела), которые специфически реагируют с тем веществом (антигеном), к которому они выработались. Реакция антиген—антитело может быть изучена вне организма, как обычная химическая реакция, путем смешения раствора антигена с так называемой антисывороткой. Одна из типичных иммунологических реакций — прецп-питиповая — состоит в выпадении осадка при соединении антигенов с антителами. [c.135]

Быстрое обнаружение и идентификация наркотиков в биологических материалах —задача чрезвычайно важная во многих случаях это необходимо для спасения жизни. Идентифицировать наркотики методом ТСХ можно достаточно быстро, но из-за присутствия в пробе других наркотических и даже не наркотических соединений можно получить ложный ответ. Поэтому следует помнить, что определенная величина Rf или данная цветная реакция — такой показатель, который еще необходимо подтвердить. Способы подтверждения могут быть различными параллельный анализ с использованием различных хроматографических систем, спектрофотометрический анализ, ГХ, определение температуры плавления, микрокристаллогра-фический анализ, методика многократного опрыскивания различными реагентами, иммунологические испытания и т. д. В качестве обязательного контрольного испытания должна применяться не ТСХ, а другой метод. Однако ТСХ весьма эффективна в тех случаях, когда необходимо исследовать большое число проб, как, например, при анализе мочи на наличие в ней наркотиков. Проводя разделение, можно очень быстро отсортировать пробы, не содержащие наркотиков, и одновременно получить некоторое представление о составе проб, давших положительные результаты. На сложных дорогостоящих установках для газовой хроматографии и высокопроизводительной жидкостной хроматографии одновременный анализ многих проб провести невозможно. [c.185]

Для идентификации белков важную роль играют иммунологические реакции. Введенный в кровяное русло животного чужеродный белок автоматически вызывает образование белкового же антитела, связывающего введенный белок. Антитело образуется из углобулиновой фракции белков крови. Иммунитет к новому заражению, вырабатываемый в результате заболевания некоторыми болезнями или в результате прививки, имеет в своей основе выработку антител к данным видам бактериальных или вирусных белков. Антитело дает и видимую глазом реакцию с вызвавшим его появление белком (антигеном) — образование осадка при смешении растворов. Пользуясь иммунологическими реакциями, можно различать белки даже близкого строения. Так, можно отличить, например, гемоглобин человека от гемоглобина быка. [c.669]

Идентификация чужеродных клеток в организме облученного животного — это проблема, к решению которой подошли различными путями. В экспериментах, проведенных van Bekkum, крысиные эритроциты в циркулирующий кр01ви были идентифицированы методом агглютинации со специфической антисывороткой, а гра-нулоциты крысы и мыши можно было различить по реакции щелочной фосфатазы 6, 7]. Другие иммунологические i[8] и цитологические [4] методы требуют забоя исследуемых животных. [c.405]

Метод имеет большое значение при изучении взаимосвязи между структурой и специфичностью групповых веществ. Применение его позволяет устанавливать природу ответственных за специфичность групп без их непосредственного выделения и идентификации. С другой стороны, с помощью метода торможения можно отличать иммунологически активные фрагменты от неактивных при выделении олигосахаридов после частичного кислотного или щелочного гидролиза групповых веществ. [c.179]

Для идентификации некоторых гликопротеинов клеточной поверхности, участвующих в межклеточной адгезии у позвоночных, был использован иммунологический метод, представленный на рис. 14-63. В одном из наиболее изученных примеров были получены фрагменты моновалентного антитела к клеткам сетчатки куриного эмбриона. Затем были отобраны антитела, ингибирующие реагрегацию этих клеток in vitro. Мембранные белки клеток сетчатки были затем фракционированы и испытаны на способность нейтрализовать блокирующую активность антител. Таким путем был идентифицирован крупный (около 1000 аминокислотных остатков) грансмембранный гликопротеин, названный молекулой адгезии нервных клеток (N- AM). N- AM экспрессируется на поверхности нервных и глиальных клеток (разд. 19.1.6), склеивая их при участии [c.520]

В 1972 г. Д. Сачс и соавт. [114] разработали иммунологический метод, который был использован для изучения процесса ренатурации белков, не содержащих дисульфидных связей. Метод основан на предположении о двухфазном механизме свертывания и идентификации конформационных состояний фрагментов нативной трехмерной структуры белка с помощью специально подобранных антител. Далее выявляются зависимости между константой равновесия предельных состояний (D и N) и константами связывания антител с белковыми фрагментами. Д. Сачс и соавт. [115] применили метод для определения константы равновесия N D стафилококковой нуклеазы, а Дж. Харрел и соавт. [116] и Б. Фурье и соавт. [117] — для изучения конформаций промежуточных состояний миоглобина. О характере получаемой при исследовании иммунохимического метода информации можно судить по результатам рассмотренной в разд. 9.4. работы Л. Чавеца и Г. Шераги [86], применивших его в исследовании ренатурации рибонуклеазы А. [c.385]

Иммунологические методы пгароко используются для идентификации мембранных компонентов, их локализации, оценки количества, выделения. Это методы получения поликлональных и моноклональных антител к компонентам мембран, иммуно-блоттинг (электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата на рия с перенесением разделенных белков на нитроцеллюлозные фильтры для последуюп] его выявления с по- [c.202]

Известны и другие новые методы учета и дифференциации T.ferrooxidans, например, метод иммунологической и электрофоретической идентификации различных штаммов T.ferrooxidans в культуре, содержащей другие железоокисляющие или гетеротрофные бактерии [151]. [c.75]

Книгой Антитела. Методы , первый том которой вы держите в руках, издательство IRL Press продолжает свою чрезвычайно популярную серию руководств по биологии Практические подходы , охватывая при этом область иммунологических исследований. Специфичность и антигенсвязывающие свойства антител используются в практике с начала нынешнего века, но за последние 20 лет популярность антител значительно возросла. Среди лабораторий, занимающихся изучением живых систем и биомолекул на физиологическом биохимическом уровне, едва ли найдутся такие, где еще не оценили антитела и не поняли, что это самый удобный, а часто и незаменимый инструмент идентификации, количественной оценки и изучения структуры и биологических свойств различных молекул. Диапазон применения антител чрезвычайно широк с их помощью изучают гормоны животных и растений, ферменты, клеточные рецепторы и маркеры дифференцировки, сывороточные белки, тканевые и клеточные антигены, опухолеспецифи-ческпе, бактериальные и паразитарные антигены и др. Для того чтобы эффективно использовать антитела при решении столь широкого круга задач, необходимо обладать компетентностью в двух тесно связанных областях, а именно уметь приготовить препараты высокоспецифичных антител с воспроизводимыми свойствами, а также выбрать и осуществить необходимый метод, основанный на использовании этих антител. В этой книге оба методологических аспекта сведены вместе. Она посвящена тому,. как получить антитела, проверить их качество, а также как с ними работать. В ней собран богатейший опыт и глубокие знания нескольких моих коллег по отделу иммунологии в Бирмингеме некоторые главы написаны специалистами из других центров. [c.6]

Быстрое развитие иммунологии нашло свое отражение в данной, третьей книге из серии Иммунологические методы , которая включает изложение экспериментального опыта, накопленного в Базельском институте иммунологии. В нее входят пять глав, посвященных применению рекомбинантных ДНК в иммунологии в двух главах описано использование высокоэффективной жидкостной хроматографии для разделения белков отдельные главы касаются следующих вопросов применение моноклональных антител для идентификации мембранных антигенов лимфоцитов, типирование антигенов гистосовместимости, новые методы анализа белков с помощью двумерного электрофореза, лимфокины, поддерживающие рост В-клеток. В четырех главах описано получение и ведение линий клонированных В- и Т-кле-ток и гибридом, а еще в четырех обсуждаются новые методы детектирования клеток, продуцирующих ревматоидный фактор. Две главы посвящены таким общим иммунологическим методам, как флуоресцентный сортинг клеток и анализ методом лимитирующих разведений, и наконец, четыре последние главы касаются сложных методов, используемых при работе с определенными видами животных (птицами, овцами и амфибиями) для изучения специальных иммунологических вопросов. [c.7]

Идентификация и количественное определение иммуноглобулинов различных аллотипов открывают возможности для изучения регуляции аллельного исключения и для выяснения взаимосвязи между аллотипией антител и их специфичностью. Кроме того, аллотип может служить маркером, позволяющим определять происхождение антителообразующих клеток в опытах с адоптивным переносом или у иммунологических химер. [c.218]

Методы определения поверхностных клеточных антигенов нашли широкое применение во многих областях биологии. Среди антигенов клеточной поверхности первыми были описаны продукты генов главного комплекса гистосовместимости — те самые антигенные молекулы, которые обусловливают иммунологическую индивидуальность организма (Klein, 1975). Кроме этих универсальных поверхностных антигенов, присущих всем клеткам данной особи, отдельные клеточные популяции обладают уникальными, свойственными только им антигенами. Это было использовано при анализе тканей нервной системы (S ha hner et al., 1975) и особенно успешно — для идентификации многочисленных субпопуляций морфологически неразличимых лимфоцитов (Raff, 1971). [c.273]

Лабораторная диагностика наследственных болезней (фено- или генотипи-рование индивидов) может быть направлена на идентификацию одной из трёх ступеней болезни. Во-первых, это выявление этиологической причины наследственной патологии, или характеристика генотипа, т.е. определение конкретной мутации у индивида (генной, хромосомной, геномной). Эти цели достигаются с помошью цитогенетических или молекулярно-генетических методов. Во-вторых, лабораторные методы позволяют регистрировать первичный продукт гена. Для этого используются биохимические и иммунологические методы. В-третьих, возможна регистрация специфических метаболитов изменённого обмена, возникших в процессе реализации патологического действия мутации. Такая регистрация возможна на уровне жидкостей (кровь, моча, секрет) или клеток. Следовательно, на этой ступени можно применять биохимические, иммунологические и цитологические методы, что и нашло подтверждение в клинической практике. [c.248]

Различные вновь синтезируемые белки способствуют процессу межклеточной адгезии, позволяя мигрирующим миксамебам плотно слипаться друг с другом и формировать многоклеточный организм. В первые 8 ч голодания клетки слипаются с помощью Са -зависимого механизма с участием адгезивной молекулы, называемой контактным сайтом В. Через 8 ч вступает в действие другая адгезионная система, ще слипание кпеток осуществляется Са -независимым механизмом с участием молекулы межклеточной адгезии, называемой контактным сайтом А. Контактные сайты А и В были вьщелены и идентифицированы как интегральные гликопротеины плазматической мембраны с помощью остроумного иммунологического метода, представленного на рис. 14-63. Позднее этот метод был использован для идентификации молекул межклеточной адгезии также и у позвоночных. [c.517]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология