Разделение свободных стеринов

Разделение свободных стеринов [c.285]

Обращенно-фазовую распределительную хроматографию применяют для разделения как свободных стеринов [48, 53], так и их сложных эфиров [54]. Обычно смеси хроматографируют на колонках с г-бондапаком is, причем наилучшие результаты дает элюирование безводными органическими растворителями [55, 56]. На рис. 6.2 приведена хроматограмма смеси стеринов одного гомологического ряда, показывающая, что время их удерживания на обращенной фазе возрастает с уменьшением числа углеродных атомов в молекуле, а при одинаковом числе этих атомов — с увеличением степени ненасыщенности. [c.293]

Для выделения холекальциферола (Од) из жира печени тунца или палтуса применяют следующие операции [20] омыление и отделение неомыляемой фракции жира, частичное отделение витамина В от витамина А путем разделения между углеводородом и спиртом (на основании их различной растворимости), хроматографическую адсорбцию на окиси алюминия, удаление стеринов кристаллизацией из метанола и осаждение дигитонином, этерифи-кацию хлорангидридом 3,5-динитробензойной кислоты, хроматографическую очистку сырого эфира, гидролиз очищенного эфира и кристаллизацию свободного витамина. [c.109]

Такой способ фракционирования можно сочетать с выделением пробы. Например, при исследовании липидных фракций одноклеточных организмов первой стадией является деструкция клетки, обычно выполняемая под давлением или с помощью ультразвука. В любом случае разрушаемые клетки помещают в метанольный или водный раствор. Раствор сильно подщелачивают (10%-ный раствор гидроксида натрия) и оставляют на ночь. На этой стадии большинство эфирных связей (триглицериды) гидролизуются, а свободные кислоты, конечно, полностью нейтрализуются сильным основанием. Экстракция таким неполярным растворителем, как -гептан, приводит к удалению только так называемых не омыляемых липидов (стеринов), не затрагивая заметную часть основы клеточного вещества. Большие массы остатков органического вещества клетки могут создавать затруднения при экстракции, особенно после гидролиза. Поэтому перед экстракцией удобно проводить чисто механическое разделение — удалять остатки органических веществ центрифугированием. Фракция, содержащая жирные кислоты, может быть получена подкислением водной фазы с последующей второй экстракцией гептаном. [c.516]

Винтьенс и др. [12] анализировали стерины в условиях программирования состава газовой фазы. Картниг и Микула [13] использовали для разделения свободных стеринов слон оксида магния пробу они элюировали на 15 см смесью циклогексан—диэтиловый эфир—уксусная кислота (20 79,5 0,5). [c.286]

Барбье и др. [15] разделили группу стеринов на слоях силикагеля, элюируя пробу смесью циклогексана с этилацетатом (7 3 и 17 3). Айкен и др. [8] применили для разделения свободных стеринов оксид алюминия О и смесь бензол—этанол (19 0,4). В табл. 29.2 собраны величины / / и полученные для группы стеринов в различных хроматографических системах. [c.288]

Газохроматографическое разделение свободных стеринов лучше проводить на фенилметилсиликонах типа 0У-17 и ОУ-25, а не на менее полярных фазах иСС У-982 и 8Е-30 (табл. 6.1) [c.287]

Обычно для газохроматографического анализа предпочтительнее использовать не свободные стерины, а их триметилси-лиловые эфиры или другие производные, поскольку в модифицированных стеринах ярче проявляются их стереохимические различия и отвечаюш,ие им хроматографические пики более симметричны. В табл. 6.1 представлены значения отношений времени удерживания триметилсилиловых эфиров к времени удерживания триметилсилилхолестерина. Обычно производные стеринов одного гомологического ряда хорошо разделяются, причем относительное время их удерживания возрастает с увеличением молекулярной массы. Наличие двойных связей, особенно при С-7 и С-24, как правило, приводит к увеличению относительного времени удерживания, однако этот эффект, как и при разделении свободных стеринов, зависит от локализации этих связей в молекуле и от природы неподвижной фазы. В частности, насыщенные стерины и их Д -аналоги близки по своим хроматографическим свойствам, поэтому их разделение представляет собой трудную задачу, а введение двойной связи при С-22 всегда приводит к уменьшению относительного времени удерживания. [c.290]

Для разделения нейтральных липидов на колонке с кремневой кислотой в качестве основного неполярного растворителя применяют гек-сан. Фракционирование происходит следующим образом гексан элк -ирует пигменты и углеводороды, 15% бензола в гексанестериды, 5% эфира в гексане — триглицериды + свободные жирные кислоты, 15—20% эфира в гексане — свободные стерины, 30% эфира в гексане — диглицериды, от 90 до 100% эфира в гексане — моноглицериды. [c.77]

На пропитанном раствором нитрата серебра силикагеле авторы работы [37] разделили холестерин и различные изомеры холестанола элюирующим растворителем при этом служила смесь гексан—бензол (97 3). На этом же адсорбенте при элюировании пробы смесью хлороформ—ацетон (95 5) разделены свободные стерины, содержащиеся в дрожжах. С этим же растворителем получены аналогичные результаты при разделении на оксиде алюминия, пропитанном раствором нитрата серебра [39]. На оксиде алюминия, пропитанном нитратом серебра, при элюировании пробы смесью хлороформ—ацетон (13 7), в частности, разделены десмостерин и 7-дегидрохолестерин. [c.291]

Кауфман и Висманатан [11] использовали смесь петролейного эфира (35—45°С) и бензола (4 7) и силикагель С. При этом фосфатиды оставались в исходном положении, а за ними в порядке возрастания величин Rf следовали свободные кислоты, холестерин, триглицериды и эфиры холестерина. Мен-голд [12] элюировал пробы липидов смесью петролейного эфира (60—70°С) и диэтилового эфира (92 8) и получил хорошее разрешение. Николс [13], исследуя экстракты липидов из салата и капусты, провел предварительное разделение в колонке с кремневой кислотой, элюируя пробу диэтиловым эфиром. Этот растворитель элюирует нейтральные липиды, к которым относятся углеводороды, сложные эфиры стеринов, триглицериды, свободные жирные кислоты, диглицериды и стерины, тогда как полярные липиды (гликолиниды, фосфолипиды и гликозиды) стеринов остаются вверху колонки. Полярные липиды Николс элюировал смесью эфира с метанолом (1 1) и метанолом, после чего разделял нейтральные липиды на кремневой кислоте, применив смесь гексан—диэтиловый эфир—уксусная кислота (70 30 1) в качестве элюирующего растворителя. Фо- [c.52]

Экстракт, содержащий фракцию общих липидов, омыляют, разрывая эфирные связи. Выделившиеся таким образом свободные жирные кислоты затем отделяют от неомыляемых липидов, например углеводородов, высших жирных спиртов и стеринов. Липиды неомыляемой части можно фракционировать далее методом жидкостно-адсорбционной хроматографиии или путем образования клатратов мочевины с последующим хроматографическим разделением. [c.450]

Высшие жирные спирты были обнаружены в неомыляемой фракции растительных и животных жиров вместе с углеводородами и стеринами. Они также являются основными компонентами растительных твердых парафинов кутина и суберина и твердых парафинов насекомых. Как правило, в состав растительных твердых парафинов наряду со свободными кислотами, углеводородами и спиртами входят эфиры высших жирных кислот и высших спиртов жирного ряда. Некоторые растительные парафины могут также содержать эфиры жирных кислот и каротинов, а также свободные и связанные стерины. Перед хроматографическим разделением необходимо выделить связанные спирты омылением и отделить их от других компонентов липидной фракции. [c.461]

Полезным методом модификации гидроксилсодержащих стероидов является их превращение в кетопроизводные под действием холестериноксидазы [31], в результате которого многие стерины приобретают свойства, необходимые для их разделения с помощью газовой хроматографии [32]. 4-Метил- и 4,4-диме-тилстерины можно анализировать на колонках с 0У-17 или ОР-1 как в свободной форме [33], так и в виде их ацетатов [34]. Значения Д7 ас, т. е. отношения времен удержания стерил-ацетатов и соответствующих незащищенных стеринов на колонке. содержащей 1,5% ОУ-17, уменьшаются в ряду 4-деметил- [c.290]