Получение экстрактов липидов

Определение содержания фосфолипидов осуществляется на основании анализа содержания липидного (липоидного) фосфора, т. е. фосфора, определяемого в экстракте липидов. Для этих целей возможно использовать многие методы, поскольку липиды во всех случаях подвергаются минерализации. Существенным моментом является лишь трудность минерализации образцов, в которых фосфолипиды составляют лишь небольшую долю в сравнении с триглицеридами. Часто для ускорения минерализации используют хлорную кислоту [2], однако, увеличив время минерализации, можно применять и серную. Полученные величины содержания липидного фосфора умножают на усредненный лецитиновый коэффициент 25 и находят суммарное количество фосфолипидов. [c.217]

Экстракция липидов плазмы крови соответствующим растворителем и последующее фракционирование полученного экстракта показали, что в плазме крови содержатся триацилглицеролы, фосфолипиды, холестерол и эфиры холестерола, а также небольшое количество неэстерифицированных длинноцепочечных жирных кислот (свободных жирных кислот), которые составляют менее 5% от общего количества жирных кислот, находящихся в плазме. Свободные жирные кислоты (СЖК) являются метаболически наиболее активными липидами плазмы. Основные классы липидов, обнаруженные в плазме крови, приведены в табл. 26.1. [c.256]

Целью хроматографии липидов являются разделение липидов различных классов и последующее получение индивидуальных соединений с целью их идентификации и количественного анализа. В ходе изучения липидов с помощью хроматографических методов выяснилось, что многие организмы, ткани, клетки и субклеточные компоненты имеют характерный состав липидов, который можно определить, не прибегая к полному разделению и получению индивидуальных соединений. Количественный анализ липидов, полученных в результате частичного разделения первичного экстракта, часто является достаточным для установления источника, из которого были выделены эти липиды, и выяснения, с каким метаболическим состоянием (нормальным или аномальным) связан данный состав этих соединений. Практически все хроматографические методы могут быть применимы для выполнения этой задачи, однако более предпочтительны те, которые сочетают быстрое разделение с эффективной количественной оценкой. Такой подход имеет широкое применение — от определения полного состава липидов плазмы до характеристики индивидуальных липидов бактерий, основанной на анализе метиловых эфиров жирных кислот этих липидов или продуктов пиролиза последних. [c.204]

Вначале проводят экстракцию смесью хлороформ — метанол (2 -f 1) и полученный экстракт липидов разделяют на слоях силикагеля Г смесью [c.342]

Получение экстрактов липидов [c.131]

В тканях ганглиозиды ассоциированы с белками, поэтому во всех обычных методиках их выделения используются сильно полярные растворители чаще всего применяют смесь хлороформ — метанол [3]. В качестве растворителя был также предложен тетрагидрофуран [4], однако он не нашел широкого ирименения. Ранние методы выделения были основаны на фракционировании липидов при экстракции тканей растворителями с возрастающей полярностью. С появлением распределительного метода [5] старые методы были забыты. Первая стадия распределительного метода включает исчерпывающую экстракцию липидов из ткани смесью хлороформ — метанол. При диализе полученного экстракта против воды (процедура распределения) ганглиозиды переходят в верхний водный слой, в то время как основная масса других липидов остается в нижнем хлороформном слое. В модифицированном варианте распределения вместо воды используется слабый солевой раствор. [c.349]

Помимо аминокислот индийские ученые исследовали также содержание высших жирных кислот в водных сбросах [14]. Для извлечения жирных кислот твердые отстой сточных вод высушивали и тщательно измельчали. Сухой остаток подкисляли 1 н. НС1 (в количестве 3 мг/л) и многократно экстрагировали сначала холодным, а затем горячим этанолом. Экстракты соединяли и упаривали при пониженном давлении. Из полученного остатка липиды извлекали этиловым эфиром. [c.566]

Эргостерин при определенных режимах аэробного культивирования накапливался в дрожжевой клетке в огромных количествах. Дрожжи разрушали, обрабатывали щелочью (стерины - неомыляемая часть липидов), и экстрагировали органическими растворителями стерины, экстракт концентрировали и эргостерин осаждали этиловым спиртом. Для получения витамина D2 эргостерин облучали ультрафиолетовым светом. Такой витамин D2 может быть использован в медицине. [c.276]

На том же основании можно представить, что липиды, полученные ацетоновой экстракцией псевдотуберкулезных бактерий, являются глицеридами, липиды эфирного и хлороформного экстрактов — смесью глицеридов с эфирами полисахаридов с преобладанием первых. [c.295]

Экстракт общих липидов составлял 10% от сухого веса водорослей. Активность этого неочищенного материала была взята как единица измерения по отношению к препаратам, полученным на разных стадиях очистки. Достигнутая степень очистки препаратов представлена в табл. 24. [c.202]

При экстрагировании из тканей летучих соединений с помощью растворителей можно также извлечь такие нелетучие метаболиты, как липиды или углеводы. Эти метаболиты следует удалить на одной из последующих стадий. Кроме того, при экстрагировании такими растворителями, как петролейный эфир, из влажных проб не удается извлечь растворимые в воде соединения. При экстрагировании же полярными растворителями возникает опасность значительных потерь нейтральных летучих соединений при испарении растворителя. Тем не менее для экстрагирования ароматических соединений из измельченного мяса использовали воду при комнатной температуре [52]. Для этого экстракт вымораживали и лиофилизировали. Полученный в результате сухой порошок составлял 3,5% сырого веса ткани. По-видимому, низкокипящие нейтральные соединения улетучивались с водой. Порошок возгоняли под вакуумом при 100" и давлении 10 мм рт. ст. и фракции конденсировали в ловушках, охлаждаемых сухим льдом с изопропанолом и жидким азотом. Полученные соединения идентифицировали экспериментальным путем как аммиак, лактат аммония и молочную кислоту кроме того, обнаружили следы метиламина, формальдегида, ацетальдегида и ацетона. [c.226]

Экстракты хлороформа помещают в доведенный до постоянного веса стеклянный или фарфоровый сосуд и выпаривают досуха под струей азота в водяной бане при 35—40 °С для получения сухого неочищенного суммарного препарата липидов. Все операции проводят в вытяжном шкафу. [c.310]

Элюат концентрируют при пониженном давлении и комнатной температуре до получения мутной водной эмульсии. Эмульсию лиофилизуют. Высушенные липиды растворяют в смеси хлороформа и метанола (2 1, по объему), переносят в сосуды с известным весом и выпаривают растворители в токе азота при 35—40 °С. Сушку завершают в вакуумном эксикаторе с парафиновой стружкой. После высушивания сосуд с сухим липидным экстрактом взвешивают. [c.311]

Растительный материал (надзелшая часть травянистых растений, листья, цветки, плоды, корни, древесина или кора) экстрагируется водой для извлечения фенольных гликозидов [593, 595, 596, 652], водно-спиртовыми смесями (50, 70, 80%-ными) или спиртом (метанол, этанол) — для извлечения флавоноидов [135, 497, 571], ацетоном [214, 218, 294], а также метилэтилкетоном с водой [280] — для извлечения агликонов фенольного характера. Полученные экстракты упаривают в вакууме (иногда в атмосфере азота) до сухого состояния или до концентрированных растворов. Суммарные экстракты подвергают очистке от сопутствующих липофильных веществ, таких, как хлорофилл, липиды и др., промыванием петролейным эфиром, диэтиловым эфиром, хлороформом или бензолом [135]. Очищенные продукты растворяют или разбавляют дополнительно водой, и этот водный раствор после фильтрации используют для хроматографирования. Это типичный и наиболее простой пример первичной подготовки [106, 613]. В ряде работ [112, 135] водный концентрат подвергают дополнительной обработке и проводят осаждение водорастворимых примесей (пептиды, полисахариды и др.) путем разбавления водного раствора этанолом, метанолом илй ацетоном. Этот метод оказал большую услугу для отделения от водных растворов сапонинов, которые, солюбилизируя флавоноидные соединения, не давали возможности разделить их на капроне [47, 98]. [c.136]

Гликолипиды, полученные в результате предварительного фракционирования первичного экстракта липидов, можно далее разделять с помощью адсорбционной или колоночной хроматографии. Наиболее эффективными методами разделения разнообразных соединений этой группы являются ТСХ и ВЭЖХ,, однако обычная адсорбционная и распределительная хроматографии в отдельных случаях достаточно эффективны. [c.159]

Высокотемпературная ГЖХ — хороший метод качественной и количественной оценки общего состава липидов первичного экстракта. Часто обычные природные свободные жирные кислоты и их MOHO-, ди- и триэфиры с глицерином сильно отличаются по молекулярной массе между собой, а также от свободного холестерина и его эфиров с жирными кислотами. Поэтому на основании различий в молекулярной массе можно получить, за немногими исключениями, эффективное разделение нейтральных липидов, в том числе полученных после триметилсилилиро-вания свободных окси- и карбоксигрупп [566, 711]. Большинство первичных экстрактов липидов пз природных источников обогащены ионными липидами, такими, как глицерофосфатиды, сфинголипиды и гликолипиды, которые подвергают ГЖХ лишь [c.207]

Время инкубации в среде с изотопом составляет I—2 ч. По окончании инкубации срезы извлекают из среды, ополаскивают 1.5 мин и гомогенизируют в 3—5 мл смеси хлороформ—метанол (2 1) для экстракции общей фракции липидов. Экстракция длится 20— 40 мин при встряхивании. Экстракт отфильтровывают в стаканчики через бумажные фильтры и отмывают от водорастворимых примесей по методу Фолча (Ро1сЬ е а1., 1957). Полученный экстракт высушивают и используют для получения отдельных фракций фосфолипидов методом двумерной ТСХ (РитрЬгеу, [c.95]

Полученные таким обраэом липиды Содержат часто также свободные аминокислоты и пептиды, сахар и другие гидрофильные природные вещества, которые попадают в экстракт при добавлении веществ, способствующих растворению, например лецитинов. Отделение этих примесей затруднительно. Для отделения липидов от нелипидов пригодна хроматография на колонках с целлюлозой по Леа и Родесу [70] и препаративная хроматография на бумаге с применением растворителей, описанных Вестлеем, Вреном и Митчеллом [139]. Рекомендуется противоточное распределение [9, 53, 105]. [c.146]

По методу Огура и Розен [38], предназначенному первоначально для работы с растительными тканями, прежде всего удаляют кислоторастворимые вещества и липиды. Затем выделяют РНК, обрабатывая остаток ткани 1 н. хлорной кислотой в течение 18 час нри 4°. Для выделения ДНК полученный остаток обрабатывают 0,5 н. хлорной кислотой при 70° в течение 20 мин. При работе с животными тканями нагревание рекомендуется проводить до 80° в течение 30 мин в присутствии 1 н. хлорной кислоты. Содержание нуклеиновой кислоты в каждом из экстрактов определяют затем по содержанию фосфора, пентозы (или дезоксипентозы) или пуринов и ниримидинов. Недостаток этого метода заключается в том, что некоторое количество ДНК может экстрагироваться холодной хлорной кислотой и переходить во фракцию РНК [35]. [c.102]

Необходимо сделать некоторые общие замечания, которые следует иметь в виду при определении фракционного состава липидов. Для анализа используют суммарный липидный экстракт, предварительно освобожденный от нелипидных компонентов. Такая очистка предусмотрена в УСМВОЛ и приведена в прописи метода [3]. При других методах экстракции, когда используют бинарные системы растворителей, экстракт, как правило, промывают слабыми водными растворами сильных электролитов (например, 0,87%-ным раствором КС1) с последующим удалением верхней водной фазы, содержащей нелипидные примеси [16]. Может быть использована очистка на сефадексе Q-25 [24]. Важно не допустить в процессе получения липидов их окисления, так как продукты окисления имеют иную хроматографическую подвижность, чем нативные липиды, и на хроматограммах будут присутствовать дополнительные пятна и хвосты . Во избежание окисления липиды защищают от действия прямого солнечного света и хранят в экстрактах в плотно закрытых колбах (флаконах) с притертыми пробками в холодильнике. Растворители отгоняют в токе азота или под вакуумом, допуская лишь слабое (до 40—50°С) нагревание. Выделенные для весового определения и подсушенные на воздухе липиды для фракционирования обычно не используют. [c.213]

В то время как казеин был предметом многочисленных исследований, фосфопротеиды яиц, икры и т. д. изучены до сих пор еще очень мало. Фосфопротеиды желтка яиц получили название вителлинов. Для получения вителлина из яйца курицы экстраги-Р Т0Т желток 10-процентным раствором хлористого натрия, удаляют липиды из экстракта, извлекая их диэтиловым эфиром, и осаждают свободные от липидов белки путем разведения раствора водой [82]. Вителлины содержат 0,92% фосфора [82]. Если на вителлин воздействовать 12-процентным раствором аммиака, то от него отщепляется вителлиновая кислота. Гидролиз этой кислоты 2н. соляной кислотой ведет к отщеплению фосфорного эфира серина [83]. [c.239]

Газовую хроматографию (ГХ) можно использовать для количественного определения липидов, разделенных методов ТСХ. Виоке и Холман [138] анализировали методом ГХ эфиры жирных кислот после хроматографирования их на силикагеле G с различными смесями диэтилового эфира и гексана. Зоны затем элюировали диэтиловым эфиром, объем полученного раствора доводили до определенной величины, отбирали аликвотную часть его и вводили в газовый хроматограф. Бойер и др. [182, 183] таким же методом определяли липиды крови, но сначала эти авторы экстрагировали примерно 5 мг липидов из крови и наносили пробу на слой кремневой кислоты. После разделения пятна обрабатывали 10 %-ной серной кислотой (масса/ /объем) и этерифицировали, добавляя безводный метанол и нагревая 1 ч при 80 °С (сфингомиэлин нагревали 16 ч). К смеси на этой стадии добавляли кристалл гидрохинона, выполняющий роль антиксиданта. После метилирования к пробе добавляли воду и экстрагировали сложные эфиры петролейным эфиром (40—60°С). Экстракт петролейного эфира сушили над смесью безводного сульфата и бикарбоната натрия (4 1), концентрировали и вводили в колонку газового хроматографа. Неподвижной фазой служил полиэфир янтарной кислоты и этиленгли-коля. При разделении указанным способом не следует применять для обнаружения иод, поскольку это приводит к частичной потере ненасыщенных кислот [184]. Аналогичным методом анализируют и стероиды [185, 186]. В этом случае трнметилсили-ловые эфиры можно получить при взаимодействии с гексаме-тилдисилазаном. Описанным способом в суточной пробе мочи определили 15 мкг тестостерона с точностью 7% [185]. [c.338]

Чаще всего гликосфинголипиды выделяют из биологических материалов вместе с большей частью других липидов экстракцией смесью хлороформ — метанол (2 1 по объему) [6]. Чтобы удалить глицеро-фосфатиды, суммарную полярную липидную фракцию, полученную после хроматографической очистки экстракта на колонке с кремневой кислотой, подвергают щелочному метанолизу [7, 8]. Эту операцию можно проводить и до хроматографической очистки липидной фракции [9, 10]. Далее индивидуальные гликосфинголипиды выделяют хроматографией на кремневой кислоте [11-—13], флоризиле [7, 14] или ДЭАЭ-целлю-лозе [9, 15]. Небольшие количества нейтральных гликосфинголипидов очищают методом препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле [8, 9]. [c.14]

В настоящее время не существует простых и надежных способов выделения ганглиозидов из экстрактов тканей, а в основе большинства существующих лежит методика Фолча и сотрудников, в соответствии с которой все липиды экстрагируют смесью хлороформ — метанол, затем ганглиозиды переводят в водную фазу и полученный водный раствор диализуют. Ранделл и Пеннок [35] рассмотрели множество модификаций подобных рутинных процедур и предложили усовершенствованную простую методику экстракции ганглиозидов. Она основана на существующих способах экстракции и включает стадию диализа против карбовакса или использование фильтров фирмы М11И-роге. [c.132]

Для целей качественного анализа липидов первичного экстракта наиболее полезным является метод ТСХ. Однако таким методом даже с помощью самых тщательно разработанных процедур не удается осуществить количественную оценку фракций липидов. Трансметилирование эфиров различных жирных кислот с последующим количественным анализом метиловых эфиров жирных кислот методом ГЖХ дает удовлетворительные результаты, но анализ занимает много времени [45, 663—668]. Этот метод широко применяют для количественной оценки соотношения глицеролипидов в различных фракциях, полученных с помощью ТСХ, а также для дальнейшей характеристики состава этих фракций. Опубликованы многочисленные работы, в которых указанные методы были использованы для анализа липи- [c.204]

Необходимо сделать некоторые общие замечания, которые следует учитывать при определении фракционного состава липидов. Для анализа используют суммарный липидный экстракт, предварительно освобожденный от нелипидных компонентов. Такая очистка предусмотрена в УСМВОЛ и приведена в описании метода [3]. При других методах экстракции, когда используют бинарные системы растворителей, экстракт, как правило, промывают слабыми водными растворами сильных электролитов (например, 0,87 %-ным раствором КС1) с последующим удалением верхней водной фазы, содержащей нелипидные примеси [21]. Может быть использована очистка на сефадексе G—25 [28]. Важно не допустить в процессе получения липидов продуктов их окисления, так как последние имеют иную хроматографическую подвижность, чем нативные липиды, и на хроматограммах будут присутствовать [c.320]

Легкую фазу липидного экстракта, полученного по методу Фолша. можно использовать в качестве антигена при твердофазном РИА без очистки или с дальнейшей очисткой. Его очистка состоит в освобождении от солей и низкомолекулярных примесей диализом или, что быстрее, адсорбцией липидов на патроне для обратнофазовой хроматографии с последующей элюцией их органическим растворителем. Освобождение экстракта от солей и низкомолекулярных примесей является обязательным этапом, если материал будет использован для ТСХ. Фиксированные формальдегидом клетки можно экстрагировать так же, как и нативные. Однако образцы тканей следует гомогенизировать перед экстракцией, поскольку после фиксации эта процедура существенно осложняется. Лучше измельчить ткань в десятикратном объеме воды в небольшом электрическом блендере и перед экстракцией гомогенат лиофилизовать. [c.161]

При использовании ТСХ, когда сначала разделяются компоненты липидного экстракта и только после этого они выявляются антителами, устраняется влияние других липидов. Этот метод является, таким образом, более надежным и чувствительным, чем твердофазный РИА в микротитрационных панелях. Однако он требует больших затрат времени, большего расхода антител и для получения хороших радиоавтограмм этим мето- [c.171]

Гомогенат фильтруют через воронку с фильтром напористого стекла и осадок реэкстрагируют 5 мл хлороформа. Фильтраты объединяют. В фильтрат пр>ибавляют на 1 объем экстракта 0,2 объема 0,1 М КС1 и перемешивают (или центрифугируют), при этом образуется двухфазная система. Верхний слой с промежуточной фазой, если она образуется, отсасывается пипеткой. Экстракт упаривают на водяной бане при 40—50°С (под тягой). Для предохранения липидов от окисления и ускорения высушивания на образец рекомендуется подавать струю азота. Еще лучше полученный таким образом раствор липидов упаривать на роторном вакуумном испарителе. После этого определяют общее количество липидов. [c.256]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология