Реакция нингидриновая

Рис. 5. Нингидриновая реакция для определения аминного азота аминокислот

Идентификация аминокислот и пептидов во фракциях. А. Нингидриновая реакция. Нингидрин реагирует со всеми аминокислотами, имеющими а-МНа-группу, давая фиолетовое окрашивание, за исключением пролина или оксипролина, в реакции с которыми нингидрин дает желтое окрашивание.Некоторые примеси (медь, кадмий и др.) могут влиять на цвет пятен. Для проявления хрома- [c.192]

На месте пептидов и белков появляются синие пятна. Через 1— 3 мин хроматограмму промывают 27о-ным раствором СНзСООН и высушивают на воздухе Окраска устойчива. Для пептидов эта реакция более чувствительна, чем нингидриновая. Реакцию дают также пуриновые и пиримидиновые основания, нуклеозиды, нуклеотиды и др. [c.131]

Аминокислоты определяют с помощью цветных реакций. Основная из них - нингидриновая реакция, которая позволяет определить аминный азот любой АК (рис. 5). [c.18]

Предложено два микрометода (нингидриновый и нитропруссид-ный) количественного определения метионина, меченного Оба метода позволяют определять метионин с точностью 2—3%. По простоте приемов и сравнительной точности результатов определения метионина нитропруссидный метод предпочтительнее нингидринового. Реакции с нингидрином и нитропруссидом натрия могут быть использованы для испытания на подлинность метионина, меченного S . Методы внедрены в практику производственной лаборатории. [c.216]

Нингидриновая реакция — качественная реакция на а-аминокислоты и пептиды, основанная на образовании окрашенных продуктов при их нагревании с нингидрином. [c.202]

Этим же методом, исходя из внутрикомплексного (хелатного) медного соединения 1-2, 4-диаминомасляной кислоты, получается /-2-амино-4-уреидо-С -масляная кислота. При проведении реакции с количествами веществ порядка 1 жмоля выход в расчете на мочевину составляет 26% т. пл. 207—208° (разл.). При бумажной хроматографии в системе фенол—вода (80 20) обнаружено одно нингидриновое пятно Rj 0,58. Двусолянокислая [c.224]

Проявление нингидрином. Раствор нингидрина наливают в ванночку и равномерно пропитывают им хроматограмму. Хроматограмму высушивают под тягой и выдерживают в темноте при комнатной температуре около 12 ч. В этих условиях с нингидрином реагируют все а-аминокислоты (другие аминокислоты дают реакцию при более высокой температуре — около 100°С). Проявление хроматограмм при качественной хроматографии можно ускорить, помещая последние на 5—10 мин в термостат при 60° С. Окраска, получаемая при проявлении аминокислот нингидрином, неустойчива. Ее можно закрепить, опрыскивая проявленную хроматограмму из пульверизатора раствором ацетона, содержащим азотнокислую медь. Стойкую окраску можно получить при внесении в нингидриновый реактив кадмия (с. 135) или стронция. Окраска сохраняется в течение нескольких недель при проявлении аминокислот смесью 1%-ного раствора нингид-рнна в ацетоне и 1%-ного раствора хлористого стронция в 20%-ном растворе СН3СООН (1 6). [c.129]

Из каждой фракции отбирают по 0,2 мл элюата, проводят щелочной гидролиз и затем ставят нингидриновую реакцию (см. стр. 199). [c.200]

Специфические реакции на отдельные аминокислоты. Наряду с нингидриновым реактивом существуют и другие реагенты, дающие цветные продукты с некоторыми аминокислотами. Это свойство избирательного окрашивания часто используют в хроматографии для идентификации отдельных аминокислот. Так, для определения соединений с гуанидиновой группой (аргинин) используют реакцию Сакагуши. Хроматограмму смачивают 0,1%-ным раствором 8-оксихинолина в ацетоне и после ее подсушивания на воздухе слегка опрыскивают из пульверизатора раствором гипобромита (1 мл брома в 500 мл 0,5 н. NaOH). Наблюдается оранжевое окрашивание. [c.131]

На основе нингидриновой реакции были разработаны методы количественного определения аминокислот, в частности метод распределительной хроматографии на бумаге, впервые внедренный в 1944 г. (А. Мартин и Р. Синдж). Эта же реакция используется благодаря своей высокой чувствительности в автоматическом анализаторе аминокислот. Впервые такой прибор сконструировали Д. Шпакман, С. Мур и У. Стейн (рис. 1.7). После разделения смеси аминокислот в колонках, заполненных специальными ионообменными смолами (сульфополистирольный катионит), ток элюента из колонки поступает в смеситель, туда же поступает раствор нингидрина интенсивность образующейся окраски автоматически измеряется на фотоэлектроколориметре и регистрируется самописцем. Этот метод нашел широкое применение в клинической практике при исследовании крови, мочи, спинномозговой жидкости. С его помощью за 2—3 ч можно получить полную картину качественного состава аминокислот в биологи- [c.42]

Для обнаружения материала, имеющего пептидные связи, но не дающего нингидриновую реакцию (например, циклических пептидов), применяют реакцию Райдона и Смита. С этой целью хорошо высушенную хроматограмму смачивают в смеси спирта и эфира (1 1). Избыток растворителя удаляют фильтровальной бумагой. Влажную хроматограмму помещают в замкнутое пространство над свежеприготовленной смесью 10%-ной соляной кислоты и 1%-ным раствором КМпО (1 1) на 5—15 мин. Погружают хроматограмму в смесь 0,05 н. раствора KI и насыщенного раствора о-толидина (или бензидина) в 2%-ной уксусной кислоте (1 1) [c.131]

В р-рах Ь амфотерны. Изоэлектрич. точки Б. могут иметь значения от < 1,0 (у пепсина) до 10,6 (у цитохрома с) и выше. Боковые группы аминокислотных остатков способны вступать во многие р-ции. Б. дают ряд цветных р-ций, обусловленных наличием определенных аминокислотных остатков или хим. группировок. К важнейшим из них относятся биуретовая реакция (пептидные связи), ксан-топротеиновая реакция (ароматич. ядра остатков тирозина, триптофана, фенилаланина), Адамкевича реакция (нндоль-ное кольцо триптофана), Миллона реакция (фенольный радикал тирозина), Паули реакция (имидазольное кольцо гистидина), Сакагучи реакция (гуанидиновая группа аргннина) и нингидриновая реакция (аминогруппа). [c.250]

Хим св-ва олигопептидов определяются содержащимися в них функц. группами, а также особенностями пептидной связи Их хим. превращения в значит мере аналогичны соответствующим р-циям аминокислот. Они дают положит. биуретовую реакцию и нингидриновую реакцию. Дипептиды и их производные (особенно эфиры) легко циклизуются, превращаясь в дикетопиперазины. Под действием 5,7 й. [c.469]

Нингидриновая реакция 3/488, 711, 930 1/475 2/476 4/191, 397 Ниобаты 3/488, 489, 493 96, 777 4/575, 985. См. также Тантамтио-баты [c.661]

Как нингидриновая реакция, так и катализируемое пири-доксальфосфатом декарбоксилирование аминокислот являются примерами деградации, описанной Штрекером. В 1862 г. [c.214]

Разделение АК в ходе хроматографии на бумаге основано на различной подвижности аминокислот в смеси растворителей. АК определяют при этом или по поглощению в УФ-области, или после проведения цветной реакции (чаще всего нингидриновой). [c.18]

Цитруллин можно получить с выходом 60%. Проведение реакции при 100° в течение 20 мин. приводит к образованию вещества с выходом на 10—157о меньше. При бумажной хроматографии [2] в системе фенол—вода (80 20) обнаружено только одно нингидриновое пятно Rf 0,62. Перекристаллизация из водного спирта повышает температуру плавления цитруллина до 230—232° (разл.). [c.224]

Аналогичным образом, исходя из медной соли /(- -)-лизина, получен солянокислый /-5-уреидо-С -норлейцин (солянокислый С] -/-гомоцитруллин). При проведении реакции с исходными количествами веществ порядка 1 жмоля выход в расчете на мочевину составляет 60% т. пл. 177 178°. При бумажной хроматографии в системе фенол—вода (80 20) обнаружено одно нингидриновое пятно 0,73. [c.224]

Купер [5] описал получение /-5-уреидо-С д-3-М /1-норва-лина конденсацией мочевины- l/i-Nifi с комплексной солью /-орнитина и сульфата меди. Реакцию проводят в запаянной трубке при 100° по методу Куртца [4]. Осажденную медную соль С iVn5/i-/-цитруллина разлагают сероводородом и получают при этом продукт, плавящийся при 220—221°. При бумажной хроматографии в системе фенол — вода обнаружено только одно нингидриновое пятно с правильной величиной Rf. [c.224]

Белки дают ряд цветных реакций, обусловленных наличием определенных аминокислотных остатков нли общих химических группировок. Эти реакции широко используются для аналитических целей. Среди них широко известны нингидриновая реакция, позволяющая проводить количественное определение аминогрупп в белках, пептидах и аминокислотах, а также биуретовая реакция, применяемая для качественного и количественного определения белков и пептидов. (При нагревании белка или пептида, но не аминокислоты, с Си 01 в щелочном растворе образуется окрашенное в фиолетовый цвет комплексное соединение меди, количество которого можно определить спектрофотометрически.) Цветные реакции на отдельные аминокислоты используются для обнаружения пептидов, содержащих соответствующие аминокислотные остатки. Для идентификации гуанидиновой группы аргинина применяется реакция Сакагучи — при взаимодействии с а-нафтолом и гипохлоритом натрия гуанидины в щелочной среде дают красное окрашивание. Индольное кольцо триптофана может быть обнаружено реакцией Эрлиха — красно-фиолетовое окрашивание при реакции с п-диме-тиламинобенэальдегидом в Н 804. Реакция Паули позволяет выявить остатки гистидина и тирозина, которые в щелочных растворах реагируют с диазобеизолсульфокислотой, образуя производные, окрашенные в красный цвет. [c.32]

Общепринято определять пептиды с помощью нингидриновой реакции. Добавление Сс1 к раствору нингидрина не только увеличивает ее чувствительность, но и повышает стабильность окрашивания. Ы-ацильные пептиды можно выявлять в реакции с хлором [67]. Некоторые аминокислоты выявляются реакциями специфического окрашивания, например гистидин — реакцией Паули, аргинин — реакцией Сакагуши. С помощью этих же реакций можно обнаруживать и пептиды, содержащие гистидин и аргинин. [c.38]

Хроматография. Фракционируемый материал растворяют с таким расчетом, чтобы 15 мг содержалось примерно в 30—40 мл растворителя, pH раствора подводят до 5—6 и раствор медленно наносят на колонку. После нанесения образца через колонку пропускают равный объем дистиллированной воды, а затем начинают элюирование 0,1 н. НС1. Скорость элюирования должна быть примерно вдвое меньше скорости нанесения фракционируемого материала. Вытекающий с колонки элюат собирают фракциями в пробирки по 1 мл. За ходом элюирования можно следить с помощью нингидриновой реакции, которую ставят с аликвотами фракций на фильтровальной бумаге начиная с 11-ой пробирки 1 каплю каждой фракции [c.195]

Хроматография. Пептиды фракционируют с помощью градиентного элюирования. Стартовый буферный раствор имеет pH 3,Ь Смеситель содержит 2500 мл 0,5 н. буферного раствора pH 5,1. Элюат, вытекающий из колонки, собирают фракциями по 10 мл-Нингидриновую реакцию ставят либо непосредственно с полученным элюатом, либо после его щелочного гидролиза. [c.198]

Щелочной гидролиз. Из каждой фракции отбирают по 0,3 мл, перемешивают с 1 мл 2,5 и. раствора NaOH и инкубируют при 90° С в водяной бане 2,5 ч. За это время концентрация препаратов увеличивается. К каждой пробе прибавляют по 1 мл 30%-ной уксусной кислоты и проводят нингидриновую реакцию следующим образом. [c.199]

Если концентрацию фракционируемых веществ не удается определить спектрофотометрически, то полученные фракции можно подвергнуть щелочному гидролизу и проанализировать с помощью нингидриновой реакции (см. стр. 199). [c.202]

Трудоемким, но очень чувствительным методом анализа отдель ных фракций может служить нингидриновая реакция. Из каждой фракции отбирают равные пробы объемом 0,2—0,3 мл, добавляют к ним по 1 мл 2,5 н. NaOH и инкубируют 3 ч при 90 С. Затем к каж- дой пробе добавляют по 1 мл 30%-ной уксусной кислоты, 0,25 мл 0,2%-ного раствора Sn l2 в 0,2 М цитратном буферном растворе и [c.228]

Предварительное фракционирование на колонке с сефадексом очень удобно для выделения и очистки компонентов смеси, избирательно помеченных радиоактивными изотопами. В этом случае кроме определения концентрации пептидов спектрофотометрией или с помощью нингидриновой реакции, измеряют также радиоактивность полученных фракций в соответствующем приборе (в сцинтилля-ционном или других счетчиках). [c.228]

Окраска нингидриновой реакции связана с образованием красителя — синего Руэмана. [c.623]

В результате исследования нингидриновой реакции оказалось, что тирозин с помощью нингидриновой реакции количественно определяется в среде органических растворителей и в присутствии восстановителя. Выполнение реакции осуществляется следующим образом. [c.218]

Особенного внимания заслуживает возможность гидролитического расщепления солей аминокислот. Гидрохлорид аминокислоты, например, при растворении в воде в зависимости от концентрации более или менее полно расщепляется на амфотерный ион аминокислоты и НС1 при большем разбавлении происходит полное расщепление. Каждый хроматографический процесс сопровождается разбавлением. Чтобы проанализировать соли без изменения, необходимо слой и растворитель предварительно забуферить. Следует учесть также химические изменения, которые могут происходить при определенных условиях на хроматограмме, причем в адсорбированном состоя-ниина носителях они происходят гораздо быстрее и отчетливее, чем в стекле. Примером может служить нингидриновая реакция на бумажной хроматограмме и в растворе. [c.392]

Окислительное дезаминирование а-аминокислот под действием 1,2,3-ин-дантриона - нингидрина - лежит в основе их качественного обнаружения. При этом а-аминокислота претерпевает глубокие превращения, а продукт реакции имеет характерную синюю окраску (нингидриновая реакция). Синий цвет обусловлен образованием красителя синий Руэмана [c.515]

Условия проведения реакции с нингидрином описаны в прописи для реактива № 108. Добавление уксусной кислоты гарантирует необходимое для нингидриновой реакции значение pH около 5 даже при использовании щелочного растворителя. При более длительном нагревании и повышении температуры (110°) фон становится розовым. Чувствительность определения методом ХТС некоторых аминокислот приведена в табл. 104. [c.404]

Р) Полихроматическая нингидриновая реакция. Для наших исследований оказался пригодным реактив Моффата и Литле [3] (реактив № 109). Аналогичного эффекта достиг Войвод [51] с коллидином, а также Харди и др. [52] с циклогексиламином и дщиклогексиламином. [c.408]

Особенно предпочтительна комбинация нингидриновой методики и хлорирования. Вначале проводят опрыскивание нингидрином, отмечают пятна, а затем обрабатывают хлором, как указано выше предварительная обработка нингидрином не оказывает влияния на результаты. Вещества, обнаруживающиеся только при галогенировании, таким образом, можно легко отделить от соединений, дающих положительную реакцию с нингидрином. [c.412]

Раствор для опрыскивания. 1 мл насьиценного водного раствора нитрата меди с добав-койО,2л л 10%-ной азотной кислоты растворяют в 100лм этилового спирта (96%-ный). Проведение реакции. На нингидриновое пятно напыляют раствор до максимально интенсивного окрашивания и помещают пластинку в закрытый сосуд, содержащий стакан с концентрированным аммиаком. [c.487]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология