также белки, анализ

Прямой рефрактометрический анализ широко используется для определения сухих веществ в продуктах кондитерской промышленности, соках овощей и плодов, а также белков в сыворотке крови при клинических медицинских исследованиях и в некоторых других случаях. [c.129]

Спектральные методики для анализа водных растворов можно часто с успехом применять также для анализа неводных растворов и жидкостей. Пенообразующие вещества (например, белки), жидкости с хорошими диэлектрическими свойствами и иногда воспламеняющиеся жидкости (например, масла) можно анализировать только после соответствующей их обработки. Исключение составляют методики, специально разработанные для таких материалов. [c.72]

Ценные данные о структуре белковых глобул могут быть получены также путем анализа измеренных значений рК различных групп. Экспериментальные данные, суммированные в работе [4], показывают, что для глобулярных белков небольшого молекулярного веса значения рК большинства групп такие же, как для соответствующих групп в малых молекулах. Отсюда следует, что эти ионизуемые группы находятся на поверхности глобул, а не в гидрофобной области внутри молекулы. При дальнейшем возрастании молекулярного веса наблюдаются аномальные значения рК (ср. формулу (28)), что может быть объяснено влиянием гидрофобного взаимодействия и необходимостью перестройки структуры [c.38]

НЫМИ катионогенными и анионогенными группами. В отличие от этого кислотный гидролиз сывороточного альбумина приводит к образованию фрагментов, проявляющих иные сорбционные свойства по сравнению со свойствами исходного белка. Анализ взаимодействия белков с ионообменными смолами весьма существен для развития представления о механизме межмолекулярных взаимодействий белков с другими электролитами и полиэлектролитами. Так, например, взаимодействие фермент—субстрат в том случае, когда субстрат является электролитом, также должно определяться и расположением ионогенных заряженных групп в обеих молекулах. [c.196]

Дополнительные замечания. Следует ожидать, что количество амидного азота, найденное с помощью этого метода, должно быть близким к теоретически вычисленному. При анализе аспарагина и других трудно гидролизуемых амидов, экспериментально найденное количество азота всегда более занижено по сравнению с теоретически вычисленным чем при анализе глутамина, ацетамида, а также других малоустойчивых веществ. Имеются указания, что это относится также к анализу белков. Если анализируемый образец содержит большое количество мочевины, желательно предварительно выделить ее из раствора или ввести в результат анализа соответствующую поправку, которую вычисляют, определяя аммиак, образующийся в контрольном растворе, имеющем приблизительно такую же концентрацию мочевины. Вероятно, мочевину следует разлагать с помощью уреазы и удалять аммиак из раствора, пропуская через него пузырьки воздуха. Перед гидролизом раствор должен быть сделан щелочным путем добавления буры. Если в анализируемом образце содержится аммиак в виде ионов аммония, следует определить содержание азота аммиака и вычесть это количество из результата определения амидного азота. Кроме того, от аммиака, содержащегося в растворе в виде аммонийных солей, можно освободиться, добавляя к раствору щелочь и пропуская через него перед гидролизом струю воздуха. При этом следует иметь в виду, что при длительном нахождении амида в щелочной среде может иметь место также и его гидролиз, поэтому эту операцию следует проводить как можно быстрее и избегать избытка щелочи. [c.211]

Не во всех случаях, в которых применяется химическая модификация белков, следует соблюдать столь ограничивающие условия. При получении производных белка с целью исследования его структуры или физических свойств, а также для анализа существенной является не обратимость реакции, а ее специфичность, причем в отдельных случаях не требуется даже специфичности. При химической обработке белков с целью промышленного их использования можно допускать и необратимые изменения. [c.273]

В большинстве случаев при общем физическом осмотре, проводимом при страховании жизни, поступлении на работу, призыве в армию и т. д., производят также и анализ мочи на присутствие в ней белка и глюкозы. Обычно эти анализы проводят с целью выявить диабет или заболевание почек. Рассмотрим вкратце патологическое изменение состава мочи. [c.402]

Последние достижения в развитии новейших технологических приемов значительно расширили наши возможности в определении генетического строения и молекулярной структуры вирусов, а также выявлении сходства штаммов и идентификации различий между вариантами вирусов. Наиболее важные из этих методов — клонирование и определение последовательности нуклеиновых кислот, картирование РНК и пептидов, а также антигенный анализ белков с помощью моноклональных антител. Задача последней обзорной главы данной книги — обсуждение эпидемиологии вируса гриппа в свете применения этих новых методов. Особое внимание уделено оценке последних достижений и изучению вопросов эпидемиологии, которые могут быть успешно решены при использовании молекулярных методов. [c.313]

Электрофорез по методу подвижной границы нашел широкое применение преимущественно при исследовании белков. Многочисленные данные, имеющие основополагающее значение, были получены при определении свойств отдельных белков, анализе белковых смесей, оценке гетерогенности препаратов различных белков, изучении взаимодействий между белками и низкомолекулярными веществами, а также взаимодействий белков между собой. Однако в настоящее время ввиду доступности более удобных методик электрофорез по методу подвижной границы стал применяться значительно реже. [c.21]

Наиболее эффективным путем подавления связывания с носителем является проведение анализа в буфере, содержащем неионные детергенты (твин-20, тритон Х-100, Х-305 и др.), а также белки, обладающие высоким сродством к центрам сорбции носителя [c.214]

Среда активного центра отличается, как правило, сильно развитой микрогетерогенностью. Это связано с тем, что в образовании поверхностного слоя белков принимают участие не только заряженные и полярные аминокислотные остатки (которым, поскольку они сильно сольватированы, термодинамически выгодно контактировать с водой), но также частично и аполярные (углеводородные) боковые группы. Так, например, для а-химотрипсина методом рентгеноструктурного анализа [c.20]

Аминодикарбоновые кислоты и их амиды, определение 7670 2-Амино-4,6-диметил пирамидон, определение 8054 Аминокислот циклические анги-дриды. анализ 7735 Аминокислоты, см. также белки анализ смесей 7678, 7891, 8220 выделение, идентификация 7741 как реактивы 527 константы неустойчивости их медных солей 404 определение 4307, 6739, 7248— 7250, 7668, 7993, 8I4I, 8371 аминного азота в них 4233, 6587, 7413, 7709 [c.349]

Дисульфидные мостики, приводящие к образованию петель в полипептидной цепи, обнаружены в нескольких белках (пепсине, тиоредоксине, А-цепи инсулина, фиброине шелка [145], липоамидной дегидрогеназе и других пиридиннуклеотиддисульфидных окси-редуктазах [ 111 ]). Между мостиковыми цистеиновыми остатками в полипептидной цепи находится 2—4 остатка. Рассмотрение моделей, а также рентгеноструктурный анализ показывают, что такие петли имеют уплощенную жесткую структуру. В глутатионредуктазе и родственных ферментах в петле участвует изоаллоксазиновое кольцо FAD [123, 124]. [c.69]

Субстраты — малые молекулы или малые группы больших молекул. Напротив, фермент макромолекулярен. Следовательно, субстрат непосредственно взаимодействует с определенным малым участком молекулы фермента — с ее активпы.и центром. Природа активного центра, т. е. совокупность и расположение аминокислотных остатков, а также кофакторов (см. с. 48), входящих в его состав, установлена для ряда ферментов. Мы уже упоминали о фермент-субстратном узнавании (с. 58). Изменения активности, возникающие в результате химической модификации белка, позволяют выявить функциональные группы активного центра. Сведения о его структуре дают оптические и спектраль- ные методы, а также рентгеноструктурный анализ комплексов фермента с конкурентными ингибиторами, строение которых близко к строению субстратов. [c.182]

ТОД широко применяют для обнаружения в элюатах белков и крупных пептидов, но он недостаточно универсален. Более общим методом анализа, не зависящим от аминокислотного состава пептидов, является измерение поглощения в области 180— 220 нм, где пептиды и белки характеризуются высокими коэффициентами поглощения [1] (например, поглощение при 210 нм в 10—20 раз выше, чем при 280 нм). Однако здесь имеются определенные технические трудности. Кроме того, в этой области интенсивным поглощением обладают почти все известные буферные растворы исключение составляют нелетучие буферы на основе неорганических солей. Можно также вести анализ по флуоресценции ароматических группировок. Этот метод обладает более высокой чувствительностью по сравнению со спек-трофотометрией при 280 нм, но область его применения также ограниченна. [c.391]

Синтез белков происходит не только в печени, но и во всех остальных тканях организма, причем он не прекращается даже у голодающих животных. [40]. Синтез белка можно наблюдать также и в культурах тканей. Тип белка, образующегося в культуре ткани, определяется свойствами клеток культуры и не зависит от характера белка, используемого для питания культуры. Так, например, при культивировании в плазме кролика фибро-бластов цыпленка образуются специфические белки цыпленка, а не белки кролика. Серологический анализ показал, что в этом случае помимо белков фибробластов цыпленка образуются также белки плазмы цыпленка [41]. Синтез указанных белков происходит, очевидно, из продуктов распада белков кролика. Надо, однако, указать, что гомологичные белки или пептоны утилизируются культурами тканей лучше, чем белки или пептоны, полученные ог других видов животных [42]. [c.388]

Описываемый метод был разработан для количественного определения пропиленгликоля (Lehman, Newman, 1937), но впоследствии применялся также для анализа на этиленгликоль. Метод неспецифичен. Его принцип заключается в освобождении анализируемых жидкостей от белков и сахаров с последующим окислением этиленгликоля перйодатом калия заканчивается определение йодометрическим титрованием. [c.188]

Диагностическая полоска позволяет определить в моче наличие лейкоцитов, нитритов, pH, белка, глюкозы, кетоновых тел, уробилиногена, билирубина, крови, гемоглобина. Диагностические полоски для определения одного или нескольких компонентов в моче представлены также НТК Анализ-Х и фирмой Лахема . [c.426]

Другой подход к изучению реакции азосочетания может быть иллюстрирован работой Говарда и Вилда [140], которые исследовали азосочетание диазотированной п-арсапиловой кислоты с разными белками. Полученные азобелки чрезвычайно тщательно анализировали на содержание общего азота и мышьяка. На основании известного аминокислотного состава исходного белка и количества связанного азобелком мышьяка могут быть получены данные о природе групп белка, участвующих в этой реакции. Затем полученные данные подтверждаются путем проведения модельных реакций с соответствующими соединениями, а также проводится анализ азобелка на содержание групп, наличие которых в нем предполагается на основании полученных ранее результатов. [c.356]

Рис. 10-23. Известные белки-регуляторы, контролирующие экенрессию гена Р-глобина курицы в ходе нормального развития эритроцита. Здесь суммированы данные экснериментов, описанных на рис. 10-20 и 10-21 аналогичных опытов, проведенных с мутантными элементами, расположенными перед промотором, а также результаты анализа другого типа. А. Связывающие участки белков-регуляторов и их действие.

Нет сомнения, что вывод о способности всех аминокислот входить в а-спиральные фрагменты белковой цепи в той же мере, если не в большей, справедлив в отношении -структуры. На отсутствие у аминокислот избирательности к двум альтернативным вторичным структурам указывают также результаты анализа Кэбша и Сандера 62 белков (-10000 остатков), трехмерные структуры которых известны [170, 171]. В исследованных белках были, в частности, обнаружены 25 пентапептидных фрагментов, идентичных по химическому строению, но существенно отличающихся по пространственной структуре. Те же самые пять аминокислотных остатков у одних белков входят в а-спирали, у других образуют -складчатые листы, а у третьих составляют различные нерегулярные участки. [c.276]

В свою очередь Ритчи также произвел анализ связующего вещества, употреблявшегося для накладывания сусального золота на штукатурку (джессо). Спектроскопическое исследование показало присутствие в нем фосфора, что, но мнению Ритчи, может служить показателем применения в данном случае яичного белка". [c.14]

Биохимический состав хромосом. Для изучения химического состава хромосом пользуются различными способами. Наиболее распространенными из них являются окраска специфическими красителями, исследование спектров поглощения в ультрафиолетовых лучах, авторадиография (включение меченых изотопов в состав хромосом), а также биохимические анализы ядер, и выделенных из них компонентов. Согласно биохимическим исследованиям Хромосомы состоят преимущественно из ДНК (около 40%) и гистонов (40%)—белков основного характера с высоким содержанием аргинина и лизина. Второй компонент, часто называемый нуклеогистоном является наиболее постоянной частью химического состава хромосом. Кроме того, в их состав входят РНК и негистоновые (остаточные) белки (20%). Негистоновые хромосомные белки — это главным образом кислые белки. Существует больше ста, вероятно несколько сотен, таких белков. К ним относятся белки ответственные за движение хромосом (актин, миозин, тубулин), ферменты синтеза РНК и ДНК (полимеразы), а также, вероятно, белки, регулирующие активность отдельных генов. Комплексы РНК и негистоновых белков лабильны, тогда как содержание ДНК в хромосомах в пределах вида— относительно постоянная величина. [c.83]

Можно ли считать препарат чистым Является ли он гомогенным по составу Например, содержит ли образец полимерные молекулы лишь одной молекулярной массы На этот вопрос часто можно ответить с помощью измерения размеров молекул, используя такие методы, как ультрацентрифугирование, электрофорез и хроматографию (которые будут подробно описаны в гл. Пи 12). Те же методы могут быть использованы и для выделения одного компонента из смеси макромолекул. При более детальном изучении гомогенности можно использовать также химический анализ, часто с применением спектроскопических измерений. Например, нередко возш1кают вопросы, не содержит ли препарат белка примеси нуклеиновых кислот, нет ли в нем ковалентно связанных с ним сахаров (и если есть, то сколько), состоит ли белок из одной непрерывной полипептидной цепи (и если это так, то какова ее длина). Отметим, что далеко не всегда стоит задавать вопрос об отсутствии загрязнения белка или нуклеиновой кислоты малыми молекулами, так как последние неизбежно присутствуют в препаратах. Большинство биополимеров — полиэлектролиты и поэтому находятся в окружении противоионов. Иногда бывает важно тщательно проконтролировать тип противоионов, которые присутствуют в образце. Очень часто для нормального функционирования макромолекулы бывает необходимо присутствие или отсутствие тех или иных малых молекул. [c.22]

Чувствительность спедп рофотометрических методов, описанных выше, достаточна для количественного определения белка в сыворотке, если его концентрация превышает 10 мкг/мл. Хотя многие сывороточные белки, представляющие интерес с клинической точки зрения, встречаются именно в. таких концентрациях, существуют также белки, для анализа которых нужна гораздо более высокая чувствительность. [c.110]

В Отделе исследуется структурно-функциональная организация генома эукариот на примере модельного объекта - плодовой мушки Drosophila melanogaster. Огромная роль этого объекта в расшифровке механизмов функционирования более сложных геномов, включая геном человека, хорошо известна. Работы на дрозофиле заложили основу для развития работ на позвоночных, включая человека, по следующим основным направлениям молекулярной генетики молекулярный анализ генетики развития организма исследование рецепции сигналов окружающей среды роль структуры хроматина в клеточной дифференцировке. Успехи в исследовании геномов позвоночных, основанные на работах, выполненных на дрозофиле, стали стимулом для организации проекта секвенирования генома D. melanogaster, который в значительной степени был завершен в 2000 г. Доступный банк данных нуклеотидных последовательностей предоставил богатейший материал для выяснения функций генов, которые до сих пор не были идентифицированы, а также для анализа этой информации с помощью компьютерных программ. Однако гены, кодирующие белки, составляют только малую часть сложных геномов многоклеточных эукариот. Одной из наиболее важных задач является выявление в не кодирующих белки последовательностях ДНК тех контролирующих элементов, которые определяют правильную экспрессию генов во времени и в отдельных тканях развивающегося организма. [c.11]

Рис. 10-23. Известные белки-регулятчзры, контролирующие экспрессию гена 3-глобина курицы в ходе нормального развития эритроцита. Здесь суммированы данные экспериментов, описанных на рис. 10-20 и 10-21 аналогичных опытов, проведенных с мутантными элементами, расположенными перед промотором, а также результаты анализа другого типа. А. Связывающие участки белков-регуляторов и их действие. Следует отметить, что энхансер у этого гена расположен за кодирующей последовательностью. Белки, не отмеченные + (активация) или — (подавление), по-видимому, не оказывают существенного влияния на транскрипцию, поскольку мутация их сайта связывания не сказывается на уровне транскрипции (см. рис. 10-21). Б. Относительные количества регуляторных белков на разных стадиях развития. Числами О, 1 и 2 обозначено отсутствие, промежуточный и высокий уровень транскрипции соответственно, по нелинейной шкале. Имеющиеся в настоящее время данные не дают точного объяснения, почему ген включается между 4 и 9 днями развития. (С любезного разрешения Gary Felsenield.)

Система RYSALIS j ] определяет трехмерную структуру белка по распределению плотности электронов (РПЭ). ЭС интерпретирует информацию по дифракции рентгеновских лучей, включающую информацию о положении и интенсивности рассеянных волн, и выводит атомную структуру. ЭС использует знания о составе белка и рентгеноструктурном анализе, а также эвристики, чтобы с помощью анализа РПЭ получать и проверять гипотезы относительно правдоподобных белковых структур. HYSALIS использует архитектуру типа доски объявлений , содержащей независимые источники знаний для выдвижения и проверки многоуровневой структуры гипотез. ЭС написана на языке ЛИСП. [c.262]

У флуоресцирующих групп, находящихся внутри белковой молекулы или соединенных с белком в виде комплексов фермент— кофермент или фермент — субстрат, также обнаруживается поляризация флуоресценциц. Степень поляризации флуоресценции таких комплексов и влияние на нее различных факторов дают информацию о механизме действия фермента. Все это представляет ценность для анализа не только собственно ферментов, но и вообще всех белков. [c.85]

Термин анализ следовых количеств впервые возник при биологических исследованиях. К концу прошлого столетия уже были известны основные компоненты тканей живых организмов — углеводы, белки и жиры, а при анализе растений были обнаружены 10 важнейших элементов С, О, Н, N. 8, Р, К, Са. М , Ре. Позже были найдены также следовые количества других элементов, не вс( гда присутствующих в живых жанях. таких, как В, Со, Си, Мп, Мо, 2п. В организмах животных (редко встречаются бор или марганец, но важным элементом является селен. Заметное влияние на жизненно важные процессы оказывают также Зп. Т1. V, Сг. (N1 и другие элементы, находящиеся в тканях ЖИЕ1ЫХ организмов в следовых количествах. Практически невозможно указать, какие из них наиболее важны, поскольку влияние, оказываемое элементами на жизнедеятельность растений или животных, различно. Такие важнейшие элементы, как В. Си. Мо. 2п, 5е, Сг, находясь в избытке, могут стать для организма ядом. Особенно ядовиты кадмий и серебро даже в следовых количествах. Поэтому очень важно контролировать содержание следовых количеств эж ментов в воздухе, воде, почве, растениях и в организмах животных и людей. [c.407]