Азотистая кислота, реакция с белками

В первичных алифатических аминах, а также аминокислотах, полипептидах и белках, имеющих первичные аминогруппы, определение последних проводят по методу Ван-Слайка (используется реакция с азотистой кислотой). [c.253]

В результате этой реакции аденин превращается в гипоксантин, гуанин в ксантин и цитозин в урацил. Последнее превращение особенно важно, поскольку при этом оба основания, как исходное, так и получающееся в результате превращения, могут естественным образом входить в состав РНК. Если последовательность оснований кодирует последовательность аминокислот, то превращение цитозина в урацил эквивалентно изменению информации. Поскольку, как предполагают, гипоксантин эквивалентен гуанину, его появление также ведет к изменению информации. Образование ксантина приводит либо к разрушению кода, так как он не несет никакой информации, либо к появлению гуанина после репликации. Из более чем ста мутантов, возникающих под действием азотистой кислоты (так называемые нитритные мутанты), примерно одна четвертая часть содержит одну измененную аминокислоту и лишь немногие содержат две измененные аминокислоты в белковой субъединице оболочки вируса. В большинстве же случаев не удается установить каких-либо изменений в белковой части. Этот результат можно понять, если допустить, что часть молекулы РНК вируса кодирует другие белки (ферменты), необходимые для осуществления вирусной инфекции и для репликации. [c.364]

Реакция с азотистой кислотой. Дезаминирование белков азотистой кислотой (метод Ван-Слайка) является одним из наиболее удобных приемов определения количества свободных аминогрупп в белках или степени замещения этих групп в их модифицированных производных. Дезаминирование белков проводят в 0,5 М ацетатном буфере (pH 4) при температуре 0° раствором 1 М азотистокислого натрия в течение различных промежутков времени. В этих условиях легче всего реагируют концевые -аминогруппы белка, значительно медленнее — е-аминогруппы и совсем медленно — гуанидиновые группы. [c.71]

Реакция Миллона выпадение осадка красного цвета, образующегося при нагревании белка с раствором азотнокислой ртути в азотной кислоте, содержащей небольшое количество азотистой кислоты. [c.442]

Поскольку при воздействии азотистой кислоты свободные аминогруппы образуют гидроксилы, эта реакция также была использована для определения свободных л-аминогрупп в белках и белковых гидролизатах [32]. Этим методом было обнаружено, что ни глутаминовая кислота, ни глутамин, входящие в состав белков, не обладают свободными аминогруппами [33]. [c.126]

Алифатические диазосоединения. Ранее была рассмотрена (стр. 173) реакция первичных алифатических аминов с азотистой кислотой, приводящая к образованию спиртов и олефиновых углеводородов. Эта реакция имеет особое значение для аминокислот, так как по объему выделившегося азота можно определить количество аминогрупп. Метод Ван-Слайка для определения аминогрупп в аминокислотах, пептидах и белках основан на этой реакции. [c.474]

Первичные алифатические амины также реагируют с азотистой кислотой, давая соли диазония но поскольку алифатические соли диазония очень неустойчивы и легко разлагаются с образованием сложной смеси органических продуктов (см. задачу 23. И), эта реакция имеет лишь ограниченное синтетическое значение. Однако тот факт, что азот выделяется количественно, имеет некоторое значение в анализе, особенно аминокислот и белков. [c.722]

Кроме синтеза АТФ (основная функция митохондрий), в них, как и в гиалоплазме, осуществляются и другие не менее важные процессы, как например синтез жирных кислот, синтез белка, реакции азотистого и углеводного обмена и т. д. [c.370]

Р е а к ц-и я Милл она. С раствором азотнокислой ртути в азотистой кислоте белки дают красное окрашивание. Эта реакция связана с наличием фенольной группировки. [c.296]

Эта реакция является классическим приемом для оценки хода гидролиза белков посредством превращения высвобождающихся аминогрупп в газообразный азот, который может быть измерен с помощью одного из манометрических методов. Достоинством метода Ван-Слайка является то, что с азотистой кислотой быстро реагируют (реакция протекает в течение 5— [c.57]

При этом под воздействием азотистой кислоты (образующейся из азотной) может произойти дезаминирование. Чтобы избежать этого, азотистую кислоту разрушают добавлением мочевины. Существенное осложнение реакции с азотной кислотой связано с тем, что азотная кислота оказывает на белки гидролизующее и окисляющее действие. [c.128]

Шенбейн ул е наблюдал, что в картофельном соке образуются при длительном хранении нитриты и объяснил это восстановлением нитратов, содержащихся в соке. Мазо установил, что в стерильных растительных экстрактах, нагретых в течение 5 минут при 105°, получается при доступе воздуха у>ке через несколько дней отчетливая реакция на азотистую кислоту. В отсутствии воздуха реакция но наблюдается. Мазо считает, что азотистая кислота непрерывно образуется в живой клетке, и приписывает oil существенную роль в процессе дыхания, высказывая предположение, что дыхательное сгорание представляет собою окисление белковых веществ протоплазмы, происходящее под действием азотистой функции, вероятно связанной с самой молекулой белка . [c.462]

В прошлом маскировке сульфгидрильных и фенольных групп придавали особое значение, так как считали, что кислотные и основные группы белка полностью титруются в интервале значений рН от 2 до 10. Однако характер кривой титрования гемоглобина и медленность реакции белков с азотистой кислотой привели к предположению об экранировании кислотных и основных групп. Идентификация экранированных кислотных групп оказалась возможной при помощи описанного в статье VI т. II метода мгновенного титрования. Экранирование основных групп было обнаружено в результате излагаемого ниже исследования различной реакционной способности белков по отношению к. кетену и фтор- [c.274]

Реактив Миллона - это раствор ртути(П) в азотной кислоте, содержащей примесь азотистой кислоты. Аминокислота тирозин содержит фенильную группу, реакция которой с реактивом Миллона приводит к образованию красного комплекса рту-ти(П). Это неспецифическая реакция, характерная для всех фенолов. Белок при нагревании обычно коагулирует, т. е. дает плотный осадок. Из всех белков, используемых для такого анализа, не содержит тирозина один только желатин [c.149]

Миллонова реакция — появление вишнево-красного окрашивания при действии на белок Миллонова реактива (раствор нитрата ртути в азотистой кислоте). Реакция объясняется присутствием в белке фенольных группировок. [c.266]

Аланин принадлежит к числу тех аминокислот, которые сначала были получены синтетически и лишь позднее признаны природными продуктами. В 1850 г. Штреккер [2], пытаясь получить молочную кислоту, обработал продукт конденсации ацет-альдегида и аммиака цианистоводородной и соляной кислотами полученный в кристаллической форме аланин был превращен в молочную кислоту путем обработки азотистой кислотой. Реакция Штреккера ведет к образованию аминонитрила, который после гидролиза дает соответствующую аминокислоту оказалось, что эта реакция может быть использована для по-отучения ряда других аминокислот из соответствующих альдегидов. Через 38 лет после того, как Штреккер синтезировал аланин, Вейл [3] выделил эту аминокислоту из кислотного гидролизата шелка — белка, наиболее богатого аланином. Позднее Фишер и Скита [4] получили Ь-аланин из шелка и установили его структуру и конфигурацию путем превращения его в молочную кислоту. [c.12]

Милоновая реакция. Милоновый реактив — это водный раствор азотнокислой ртути, содержащий азотистую кислоту. С белком (при кипячении) дает красное окрашивание. Реакция указывает на присутствие в белке тирозина [c.382]

Миллонова реакция — образование красного окрашивания при кипячении белка с миллоновым реактивом (раствор нитрата ртути, содержащий азотистую кислоту). [c.422]

Реакция дезаминирования азотистой кислотой лежит в основе общеизвестного метода определения аминогрупп по Ван-Сляйку он описан выше. Если соответствующим образом учитывать ограничения этого стандартного метода и тщательно контролировать условия реакции, то он окажется наиболее удобным способом определения количества свободных аминогрупп в белках. Легче всего реагируют концевые, а-аминогруппы, несколько медленнее—е. -аминогруппы и уже весьма постепенно выделяют азот гуанидинные группы. Тот факт, что количество свободных аминогрупп, определенных по методу Ван-Сляйка, превосходит содержание лизина, рассчитанное на основании аналитических данных, является первым доказательством наличия М-концевых групп в белках. Реакция с азотистой кислотой протекает быстро и количественно она нашла широкое применение для определения степени замещения аминогрупп в модифицированных белках. В последнее время предпочтение стали отдавать нингидринному методу. [c.313]

В лизине реагирую г обе аминогруппы, но с разной скоростью, а-ами-ногруппа во всех аминокислотах, пептидах и белках разлагается азотистой кислотой за 5 минут, ш-аминогруппа лизина взачмодепствует с азотистой кислотой значительно медленнее. Для количрственного определения реакцию проводят в течение 30 минут. [c.464]

Изучалось также влияние частичного дезаминирования полинуклеотидов на способность тРНК вступать в биохимические реакции а также на способность синтетических полинуклеотидов служить матрицей для ДНК-полимеразы или функционировать в бесклеточной системе биосинтеза белка Азотистая кислота является эффективным мутагеном. По современным представлениям (обзор — см. з), этот мутагенный эффект связан с дезаминированием остатков аденина и цитозина, так как продукты таких реакций — гипоксантин и урацил — способны образовывать комплементарные пары с цитозином и аденином. Дезаминирование же остатка гуанина приводит в основном к инактивации генетического материала. [c.421]

Из обычных аминокислот флуоресцируют только те, которые содержат ароматические системы, например триптофан, тирозин и фенилаланин [343]. Они поглощают только ниже 300 нм, и в этой области возбуждаются также многие другие распространенные соединения, например продукты гидролиза белков. Поэтому Ваалкс и Юденфренд [344] разработали для тирозина химический метод (реакция с а-нитрозо-р-нафтолом в присутствии азотной и азотистой кислот) получения флуоресцирующего продукта, который можно возбудить в видимой области при 460 нм. Такой способ применяется, например, для определения тирозина в плазме или ткани с использованием сравнительно простой методики, не требующей полного выделения тирозина. В биохимических исследованиях такой принцип — сдвиг параметров флуоресценции в более длинноволновую область — очень часто используется с целью избежать помех, обусловленных многими сопутствующими веществами, и обеспечить более надежную идентификацию. [c.435]

Функциональные группы способны вступать в реакции алки-лирования, арилирования, окисления, восстановления, ацилирования, этерификации, дезаминирования (азотистой кислотой), йодирования, нитрования, фосфорилирования, диазотирования, реакцию с формалином. Белки могут осаждаться кислотами трихлоруксусной, салициловой, пикриновой, фосфовольфрамовон и фосфомолибденовой, а также солями тяжелых металлов. Благодаря наличию некоторых функциональных групп протеины дают ряд специфических реакций, как например биуретовую (реагируют пептидные связи), ксантопротеиновую (реагируют ароматические ядра циклических аминокислот), Миллона (фенольная группа тирозина), Адамкевича (индольная группа триптофана), Сакагучи (гуанидиновая группа аргинина), сульфгидрильную, нингидриновую, пикриновую и др. Больщинство из них исполь- [c.28]

Химические реакции белков отличаются от реакций аминокислот и тем, что большинство реагентов на белок взаимодействуют более чем с одной функциональной группой. Например, кетен, который применяется для ацетилирования аминогрупп белка, реагирует не только с ними, но и с фенольными, и сульф-гидрильными группами. Для предотвращения этих побочных реакций обработку желательно вести либо в 1 М растворе кислоты, либо при pH 10, что не всегда благоприятно сказывается на биологической активности ряда белков. Недостаточно специфически реагируют с аминогруппами и такие реагенты, как дини-трофторбензол, азотистая кислота и фенилизотиоцианат, причем специфичность каждого из них оказывается различной для различных белков. Поэтому для каждого белка часто приходится подбирать такие условия, в которых специфичность реакции была бы максимальной. При этом для каждого белка необходимо испытать несколько различных реагентов. [c.63]

Существенным недостатком этой реакции является то обстоятельство, что ряд белков не выдерживает подоб1 ой обработки, денатурируется и выпадает в осадок даже тогда, когда еще не достигнуто полное дезаминирование. В этом случае количественное определение аминогрупп, равно как и изучение влияния дезаминирования белка на его биологическую активность становится невозможным. Примером таких белков может быть сывороточный альбумин. Вместе с тем при дезаминировании белков в реакцию могут вступать не только аминогруппы, но и индольные, имидазольные, гуанидиновые и дисульфидные группы. Некоторые авторы отмечали также и окисление сульфгидрильных групп. Поэтому весьма вероятно, что денатурация белка связана со вторичными реакциями азотистой кислоты с перечисленными группировками. [c.71]

Цветные реакции. Существует большое число цветных реакций на белки большинство из них основано на присутствии в белках тех или других аминокислот. Наиболее важными цветными реакциями являются следующие а) Биуретовая реакция при добавлении к щелочному раствору белка разбавленного раствора сульфата меди образуется фиолетово-красное окрашивание, б) Реакция Миллона при добавлении к раствору белка раствора азотнокислой ртути, содержащего азотистую кислоту, образуется белый осадок, который npuoopeiaeT яркорозовую окраску, в) Ксантопротеиновая реакция добавление к раствору белка концентрированной азотной кислоты вызывает желтое окрахиивание, которое становится более интенсивным при нагревании, а при добавлении аммиака делается оранжевым, г) Трпптофановая реакция при добавлении к раствору белка небольшого количества глиоксиловой кислоты и осторожном выливании этой жидкости на концентрированную серную кислоту на границе двух слоев образуется красноватофиолетовое кольцо. [c.420]

Существует несколько качественных реакций, характерных для всех белков. Так, при нагревании с крепкой азотной кислотой белки окрашиваются в желтый цвет, который от аммиака переходит в оранжевыЛ (ксантопротеиновая реакция). При нагревании с раствором азотнокислой ртути с содержанием азотистой кислоты (Миллонов реактив) белки дают красный осадок. При нагревании с едкой щелочью от капли медного купороса появляется фиолетовое окрашивание (биуретовая реакция). [c.414]

Кетен (Н2С = С =О) представляет собой исключительно токсичный газ, образующийся при пропускании паров ацетона над нагретой электричеством металлической спиралью. В литературе описано [93, 94] несколько конструкций аппаратов для получения кетена, пригодных для работы с белками. Газ обычно. пропускают в раствор белка через пористый стеклянный диск, хотя это, повидимому, Я1вляется недостатком в случае опытов с белками, склонными к денатурации на твердой поверхности. Ацетилирование ведется при 0—25°, р>Н 4—8 и быстром пропускании газа в течение не более 20—30 мин. Количество свободных аминогрупп измеряется, как обычно, с помощью реакции с азотистой кислотой по методу Ваи-Сляйка. Степень ацети-лирования тирозиновых остатков определяют по методу Херри-отта [49а], согласно которому сравнивают окраску, образующуюся [c.302]

Дезаминирование белков азотистой кислотой сопровождается вторичной реакцией, протекающей с участием фенольных групп и, возможно, также индольного и имидазольного колец. Тирозин диазотируется в о/7го-положении, повидимому, путем образования нитрозопроизводных. Диазопроизводные белков, имеющие желтый или красноватый цвет, легко вступают в реакцию сочетания с фенольными производными, образуя окрашенные соединения. Эта реакция явно неспецифична, и, за исключением результатов, полученных при исследовании пепсина Филпотом и Смоллом [120], почти ничего не известно о природе и количестве реагирующих групп. Авторы диазотировали кристаллический пепсин, обрабатывая его разбавленным раствором NaNO2, и нашли, что в реакцию вступает только половина тирозиновых остатков, т. е. такое же количество тирозина, которое может быть проиоди-ровано [130]. Образующийся желтый диазопепсин обнаруживает максимум поглощения при 412 ту и обладает лишь 50% активности исходного фермента. При реакции с азотистой кислотой химотрипсин [53] и амилаза поджелудочной железы [121] также [c.326]

Цианкобаламин (витамин B 2j и фолиевая кислота (витамин Вс) образуют коферменты, участвующие в переносе одноуглеродных радикалов (метильного -СНз, оксиметтьного -СН2ОН, формильного -СНО, метиленового -СН2-, метенового -СН= и пр.) с последующим включением их в синтезируемые вещества. Такие реакции имеют место в ходе синтеза некоторых аминокислот и азотистых оснований, что в итоге способствует ускорению синтеза нуклеиновых кислот и белков. Другими словами, эти витамины обладают явным анаболическим эффектом. Особенно анаболическое действие витаминов В и Вс проявляется в процессе кроветворения. Благодаря этим витаминам увеличивается количество эритроцитов в крови и, следовательно, кислородная емкость крови. Наибольший эффект от приема цианкобаламина и фолиевой кислоты наблюдается у спортсменов, выполняющих аэробные нагрузки. [c.215]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология