Плазма осаждение глобулина

Ход работы. Окса.татную кровь, т. е. кровь, стабилизированную добавлением щавелевокислого калия (удалены ионы кальция), отцентрифугировать и отделить плазму от форменных элементов. К 30 мл полученной плазмы добавить 20 мл воды, затем 50 мл насыщенного раствора сернокислого аммония. Выпавший осадок, состоящий из фибриногена и сывороточного глобулина, отфильтровать и фильтрат насытить добавлением твердого сернокислого аммония. Образовавшийся осадок альбумина отфильтровать и растворить, добавляя к осадку воды. Отделить на центрифуге прозрачный раствор альбумина и с этим раствором проделать реакции осаждения и цветные реакции. [c.179]

Альбумины, глобулины, фибриноген. Большой интерес для клиники представляет определение отдельных фракций белка крови, которые получаются путем дробного осаждения белка плазмы солями или с помощью каких-либо других методов. Обычно белок плазмы разделяют на а л ь б у-мины, глобулины и фибриноген. Содержание их в 100 мл плазмы в норме выражается следующими цифрами фибриногена 0,2 —0,4 г, альбумина 4—4,5 г, глобулина 2—3 г. [c.440]

Получение гамма-глобулина. Большинство антител против инфекционных болезней найдено в гамма-глобулине плазмы человека [22, 13]. Основные стадии процесса его выделения показаны на рис. 3. Дифференциальной экстракцией гамма-глобулина ацетатом цинка при pH = 5,6 и последующим изо-электрическим осаждением при pH = 7,2 легко отделить его от других протеинов плазмы. [c.614]

Альбумин можно легко выделить в кристаллическом виде из плазмы крови лошади методом высаливания, сходным с методом, описанным для яичного альбумина. Большинство глобулинов осаждается при полунасыщении раствора сернокислым аммонием (т. е. (Приблизительно при 2 М его концентрации см. ниже) [30] увеличение концентрации соли вызывает осаждение кристаллического альбумина (ом. табл. 2). Однако осажденный альбумин не является гомогенным [30, 108, 237, 245] и разделяется на несколько четко различимых фракций. Одна из них не содержит углевода и, если судить по растворимости, ведет себя, как гомогенное вещество эту фракцию можно выделить при рН 4 в виде нерастворимого в воде сульфата альбумина [106], а также с по- [c.55]

Белки агрегируют без денатурации не только под действием солей и органических растворителей. Полсон и др. [32] иссле-довали способность различных высокомолекулярных нейтралЬ ных водорастворимых полимеров осаждать белки плазмы. Хотя некоторые из них эффективно осаждали белки, высокая вязкость растворов полимеров препятствует их практическому использованию. Единственным исключением является полиэтилен-гликоль различной степени полимеризации. Растворы этого полимера при концентрации до 20% (вес/объем) имеют не очень большую вязкость, и многие компоненты плазмы осаждаются полиэтиленгликолем до того, как его концентрация достигает 207о (вес/объем). Наиболее эффективным является полиэтиленгликоль с мол. массой 4000 и выше для осаждения белков обычно используют полиэтиленгликоль двух типов — с мол. массами около 6000 и 20000. Поведение белков в растворах полиэтиленгликоля довольно сходно с их поведением в процессе осаждения органическими растворителями. Действительно, молекулу полиэтиленгликоля (ПЭГ) можно рассматривать как полимерный органический растворитель, хотя для получения нужной степени осаждения требуются более низкие его концентрации. При добавлении ПЭГ первым из плазмы выпадает в осадок фибриноген — довольно крупный белок, имеющий сильно асимметричные молекулы и обладающий наименьшей растворимостью в плазме. Затем (при нейтральном pH, близком к изоэлектрической точке) осаждаются у-глобулины, а вслед за ними и другие компоненты. Как и в органических растворителях, растворимость белков в растворах ПЭГ возрастает по мере удаления pH от их изоэлектрической точки. [c.81]

Другие белки осаждаются из водного раствора добавлением этилового спирта или иных подобных ему растворителей в умеренных концентр ащиях. При низких температурах, которые обычно требуются для предотвращения денатурации (0° или ниже) и при значениях рН, соответствующих минимальной растворимости, для осаждения большинства белков достаточно 40% этилового спирта. Многие белки осаждаются при значительно меньших концентрациях спирта например в интервале температур от О до —2° фибриноген осаждается при содержании этилового спирта, меньшем 10% [181]. При добавлении этилового спирта к сложной смеси, например >к плазме, компоненты ее постепенно осаждаются в порядке их растворимостей, причем большинство глобулинов выпадает в осадок гораздо легче, чем альбумины. Соответствующим регулированием дополнительных переменных, например рН, ионной силы раствора и температуры, можно достигнуть значительно более четкого разделения некоторых компонентов системы. [c.62]

При фракционировании плазмы по методу 6 181] фибриноген осаждается из 8% иного раствора этилового спирта при значении рН, близком к 7, и температуре —2,5°. В случае повышения концентрации этилового спирта до 25% при рН 6,8 и температуре —5° осаждается большая фракция, содержащая почти весь т-глобулин и значительное количество Р -глобулина. Если затем снизить рН до 5,2, а концентрацию этилового спирта — до 18%, то выпадет осадок, состоящий преимущественно из а-глобулина повышением рН снова до 5,8 и увеличением концентрации спирта до 40% из раствора удаляются почти все оставшиеся еще в нем глобулины, главным образом а- и р-глобулины. Если, наконец, при 40%-ной концентрации этилового спирта уменьшить величину ipH приблизительно до 4,8, то произойдет почти количественное осаждение альбумина 95%-ной чистоты. Находящийся над осадком раствор содержит небольшие количества альбумина и тех компонентов плазмы, которые присутствовали в ней в меньших концентрациях. Полученный таким путем альбумин можно очистить переосаждением из 40%-ного раствора этилового спирта при температуре —5° и выделить в кристаллическом виде из спирта или воды при малых значениях ионной силы в присутствии деканола или ряда других веществ [33]. В схеме полного разделения белков, содержащихся в белке куриных яиц, разработанной по образцу методов, предложенных для разделения плазмы, применяется этиловый спирт в концентрациях до 30% при низких температурах и малых значениях ионной силы раствора [267]. [c.63]

Электродиализ находит себе широкое применение как препаративный метод для удаления электролитов из различных суспензий, коллоидных растворов и т. д. Большое применение имеет электродиализ лечебных сывороток. При получении иммунных сывороток было выяснено, что основные иммунологические свойства лечебных сывороток связаны с определенной фракцией белков крови, а именно с глобулинами. Остальные компоненты, такие как форменные элементы крови, фибрин, альбумин, являются балластом и для лучшего иммунологического действия должны удаляться из крови. Для этого используют то обстоятельство, что в нолунасыщенном растворе сернокислого аммония выделяется глобулин, а остальные компоненты плазмы крови остаются в растворе. После осаждения глобулина сернокислым аммонием последний обычно удалялся диализом, и этот процесс представлял собой весьма громоздкую по аппаратуре и длительную но времени операцию. А. В. Маркович первый ввел электродиализ в широкую практику очистки сывороток и разработал технологию его промышленного использования. В настоящее время этот метод в Советском Союзе является общепринятым для бактериологических институтов. [c.182]

Количество цинка, подлежащее удалению ионным обменом, зависит от остаточной концентрации его после осаждения глобулинов для цитратной плаамы оно больше, чем для очищенной от кальция ионитами. О распределении цинка между фракциями SPPS и PGP сведений нет для цитратной же плазмы коэффи-ент распределения цинка 4 1 примерно пропорционален отношению протеина в двух фракциях (неопубликованные наблюдения Пеннела, Сандерса и Казал см. выше). [c.609]

Особое значение имеют глобулины плазмы крови. Первоначально Тизелиус разделил их электрофоретически на три фракции 3- и /-глобулины, которые, однако, ие являются однородными, а представляют собой смеси белков одинаковой подвижности. Позднее Кон и Эдсалл нашли, что фракционированное осаждение спиртом ири низкой температуре более удобно для разделения глобулнновых фракций. Этим способом теперь в больших масштабах получают т-глобулин, В нем содержатся многочисленные антитела, обусловливающие иммунитет по отношению к патогенным микробам, и поэтому -(-глобулин используют для пассивной иммунизации против различных инфекционных заболеваний. [c.399]

Фибриноген крови относят по классификации к глобулинам. Его специфической особенностью является легкая денатурация нагреванием, причем он свертывается. Для этой денатурации достаточна температура в 52—56°, т. е. значительно более низкая, нежели для двух других белковых веществ крови. Под действием фермента тромбина, находящегося в фэрмениых элементах коови и тканях организма, фибриноген прн вы<оде из организма сравнительно быстро (в несколько минут) свертывается и переходит в фибрин. Эго явление мы наблюдаем при поранениях нормальная кровь при выходе из раны образует сгусток и закупоривает рану. Действие фермента активируется кальциевыми солями и при отсутствии их не происходит. Самый механизм действия изучен недостаточно и является спорным, происходит ли свертывание фибриногена и переход его в фибрин путем каталитической ферментативной реакции или коллоидно-химической, взаимным осаждением коллоидов. Изоэлектрическая точка фибрнна находится при рН=7,2. При саертывании фибриногена pH плазмы сдвигается в кислую сторону. Фибрин способен поглощать значительные количества как кислоты, так и щелочи. При этом он сильно набухает, но не растворяется. [c.193]

Впервые ферментативное расщепление гликопротеипа плазмы в целях изучения его строения было использовано, по-видимому, Римингтоном [7]. Из крови лошади осаждением сульфатом аммония автор получал фракции альбуминов и глобулинов, подвергал их денатурации этанолом и обрабатывал трипсином в течение 4 недель. Полученный им углеводный остаток содержал 2-амино-2-дезоксиглюкозу и маннозу. Аналогичные результаты были получены Хьюиттом [135] при обработке серогликоида пепсином (КФ 3.4.4.1) и трипсином (КФ 3.4.4.4). [c.92]

АЛЬБУМИНЫ — простейшие представители природных белков, присутствующие во всех растит, и животных тканях в отличие от глобулинов, с к-рыми они составляют группу растворимых белков, растворяются в гюлунасыщенном (50% насыщения) р-ре сернокислого аммония и в дистиллированной воде. Изоэлоктрич. точка А. в пределах pH 4,6—4,8 мол. в. не превышает 75 ООО. Вое А. — глобулярные белки. А. способны к образованию хорошо оформленных кристаллов в электрофоретич. поле А., как правило, могут быть ра.зде.лены на 2 и более комнонептов. А. растворимы в к-тах, щелочах, при нагревании свертываются нри гидролизе образуют различные аминокислоты, для состава к-рых характерно отсутствие или относи 1 ельно низкое содержание глицина (не более 2%). А. богаты серусодержащими и дикарбоно-выми аминокис.потами. В живых тканях А. обычно находятся в виде соединений с липидами, углеводами и др. белками содержатся в белке яиц, сыворотке крови, мо,локе, семенах растений. А. получают из плазмы крови фракционир, осаждением при пизких темп-рах этот препарат широко применяют в медицинской практике, особенно для питания, путем введения в кровь. Кроме того. А, получают также из крови животных (сывороточный А.), отделением белка яиц от желтка (яичный А.), а также из молочной сыворотки при нагревании до 75° (молочный А.). А. применяются в фармацевтич., кондитерской, текстильной и др. отраслях промышленности и для осветления вии. [c.68]

В настоящее время трудно еще интерпретировать результаты, получаемые при фракционированном осаждении белков плазмы. Мы не можем еще с достаточной уверенностью сказать, существуют ли все эти фракции как таковые в самой плазме крови, а также решить вопрос о возможности их дальнейшего разделения. Всего вероятнее, что белки плазмы находятся в плазме в виде соединений с липидами, у1 леводами, а также друг с другом . Так, например, можно думать, что -глобулины, изоэлектрическая точка которых лежи г около pH 7,0, дают солеобразного тина соединения с альбуминами, изоэлектрическая точка которых находится вблизи pH 4,7. Возможно также, что белковые компоненты липопротеинов и глюкопротеидов плазмы идентичны [c.177]

Существует несколько простых методов, при помощи которых в клинике можно быстро обнаружить изменения в количественных соотношениях белковых фракций плазмы [5]. Одним из этих методов служит метод Таката—Ара к испытуемой сыворотке прибавляется раствор хлористой ртути и углекислого натрия и определяется способность сыворотки препятствовать осаждению ртутной соли углекислым натрием. Чем выше отношение альбумины/глобулины, тем выше эта защитная способность сыворотки. Эта реакция положительна при некоторых болезнях печени. [c.179]

Соединения белков с металлами были выделены также из плазмы крови. Если плазму крови подвергнуть фракционированному осаждению этиловым спиртом, то во фракции IV [62] (см. стр. 175) можно обнаружить pi-глобулины, содержащие металлы. Эти металлопротеиды представляют собой смесь протеидов, содержащих медь, и протеидов, в состав которых входит железо (сидерофилины). Содержащие железо сидерофилины имеют такую же розовую окраску, как и соединения железа с гидрокса-мовыми кислотами. Весьма вероятно, что в сидерофилине железо соединено с группировкой —N(OH) O—, входящей в состав белка [93]. Молекулярный вес сидерофилина 90 ООО. Каждая молекула белка в сидерофилине способна присоединять два атома железа. [c.240]

Замещение иона цинка. Применение ионитов для снижения концентрации ионов цинка при очистке SPPS устраняет необходимость процессов осаждения протеина, которые связаны с обработкой больших объемов разбавленного раствора протеина. Для получения терапевтически годного продукта считают существенным снизить концентрацию цинка примерно до нормального физиологического уровня (5-10 -м.), устанавливающегося после отделения от фракции PGP (осадок глобулина плазмы) [39]. Та-ки.м образом устраняется токсичность и нестабильность, которую можно ожидать у растворов протеина с более высокой концентрацией цинка. [c.609]

К числу глобулинов, входящих в состав плазмы, относится несколько таких, которые осаждаются из раствора при его диализе и соответствующем регулировании величины рН. Этим способом Грин [213] выделил из плазмы лошади три фракции однако он нашел, что при простом осаждении в интервале, охватывающем изоэлектричеокие точки этик трех фракций, в резуль- [c.53]

Глобулины, подобно большинству других белков, также можно осаждать из раствора методом высаливания. Эвглобулины плазмы имеют тенденцию осаждаться при минимальных концентрациях соли, -причем легче других осаждается фибриноген однако, мак и в случае большинства кривых высаливания, здесь имеет место. значительное перекрывание. интервалов осаждения. Такое осаждение может быть полезным в качестве предварительной стадии фракционирования или концентрирования растворов белков. [c.54]

Фракция у-глобулинов плазмы крови наряду с антителами содержит также и имуннонеактивные белки. Отделение антител от неактивных белков является сложной задачей, так как по электрофоретической подвижности различные белки фракции у-глобулинов близки друг к другу. Вы-сокЬочищенные антитела получают осаждением их специфическими антигенами с последующим отделением от антигенов. [c.510]

Уже в течение многих лет известно, что при фракционировании сыворотки крови сульфатом аммония выделяются фракции глобулинов с постепенно увеличивающимся содержанием углеводов [21]. Винцлеру и сотр. [3] с помощью осаждения белков сернокислым аммонием из фильтрата, полученного после обработки плазмы хлорной кислотой, удалось получить фракции, имеющие низкую изоэлектрическую точку, содержащие 15,1% углеводов (определено орциновым методом) и 11,9% гексозамина. Однако эти фракции были все еще гетерогенны. [c.70]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология