Спирт, инактивация ферментов

С целью уменьшения степени инактивации ферментов их осаждение следует проводить при охлаждении вытяжки и органического растворителя (спирта или ацетона) до О—2°С и при оптимальном значении pH. [c.131]

При работе со свежими листьями или растительными тканями, содержащими малое количество крахмала и большое количество воды, свежий материал можно после взвешивания погрузить в кипящий 95%-ный этанол для инактивации ферментов. Растворимые сахара экстрагируют повторной обработкой горячим 80%-ным спиртом или экстракцией в аппарате Сокслета. После этого нерастворимый остаток высушивают и взвешивают. Для определения содержания крахмала в процентах от веса сухого образца спиртовые экстракты объединяют и упаривают досуха. Остаток взвешивают и вес его суммируют с весом остатка от спиртовой экстракции. [c.312]

Это выполняется чаще всего осаждением вытяжки спиртом (этиловым, изопропиловым), но возможны, естественно, и иные способы выделения ферментов из нее, например высаливанием. При осаждении спиртом необходимо вытяжку и спирт предварительно охлаждать (до 5°С), чтобы избегнуть инактивации ферментных белков. Кроме того, при этом способе нужно систематически регенерировать значительные количества спирта, что не представляет сложной задачи. Потери при регенерации составляют 1—2%. [c.176]

Следовательно, уменьшение притяжения активных групп фермента к молекулам воды обусловлено главным образом снижением диэлектрической постоянной среды. Отметим, что это положение справедливо лишь для водных растворов органических растворителей, не вызывающих инактивирования ферментов. Метиловый спирт, например, диэлектрическая постоянная которого равна 35,4, вызывает в водном растворе значительную инактивацию амилолитических ферментов, в связи с чем его не следует применять для осаждения амилолитических ферментов. [c.126]

Балластные белки обычно осаждают одним из известных методов фракционирования — избирательной денатурацией. Если фермент устойчив к нагреванию (например, рибонуклеаза выдерживает нагревание до 90° С без инактивации), проводят термическую денатурацию инертных белков, нагревая экстракт определенное время при 50—70° С. Применяют также кислотную денатурацию (подкисляют экстракт до pH 5 или ниже), если выделяемый фермент не инактивируется при данном pH используют и обработку экстракта хлороформом или смесью хлороформа и спирта. Денатурированные балластные белки отделяют от фермента центрифугированием или фильтрацией, а затем из водного раствора путем дробного осаждения (в основе которого лежит различная растворимость белков-ферментов) выделяют фракцию, обладающую наибольшей ферментативной активностью. [c.200]

Растворы пепсина. Пепсин — однокомпонентный про-теолитический фермент желудочного сока — может быть получен в виде белковых кристаллов, обладаюш их весьма высокой каталитической активностью. Пепсин является альбумином, имеет глобулярные молекулы и растворим в воде. Пенсин свертывается при нагревании, осаждается крепким спиртом, солями тяжелых металлов, дубильными веш ествами. Концентрированные кислоты и щелочи разрушают пепсин. Фильтровальная бумага адсорбирует значительные количества пепсина. Свет способствует инактивации фермента. [c.183]

Кроме того, мелибиоза не сбраживается, если в среде содержится более 5% сахарозы, что, по-видимому, может быть объяснено инактивацией фермента мелибиазы при сбраживании сахарозы спиртом. Для полного сбраживания раффинозы патоки следует искать кофермент мелибиазы или новые дрожжи, обладающие активной мелибиазой. [c.306]

Методы, используемые для экстракции рибонуклеиновых кислот, частично зависят от природы органа или организма. В одном из ранних методов, использованном Левиным 11], к густому тесту из дрожжей добавляли щелочь, смесь перемешивали с пикриновой кислотой, фильтровали и нуклеиновую кислоту осаждали из фильтрата добавлением соляной кислоты. Такая довольно жесткая обработка приводила к тому, что полученная нуклеиновая кислота значительно отличалась от нативной рибонуклеиновой кислоты. Для выделения рибонуклеиновых кислот, приближающихся по структуре к нуклеиновым кислотам живой клетки, необходимо избегать применения жестких условий (pH, тедтература) в то же время необходимо, насколько возможно, затормозить ферментативный распад. Широко применялась экстракция рибонуклеопротеидов изотоническим раствором хлористого натрия [2,3]. Белки от нуклеиновых кислот могут быть отщеплены различными методами, такими, как обработка смесями хлороформа с октиловым спиртом [4], додецилсульфатом натрия [5], нитратом стронция [6] или спиртом [7], а также расщепление белковой фракции трипсином [8]. И снова эффективность каждого метода определяется природой рибонуклеопротеида. Для инактивации ферментов в процессе экстракции полезно применение хлоргидрата гуанидина (денатурирующего агента) [9] для выделения рибонуклеиновых кислот и нативных рибонуклеопротеидов из дрожжей был применен метод. [c.364]

Существуют различные методы выделения брадикинина из продуктов расщепления белков плазмы трипсином или змеиным ядом и его очистки, разработанные в различных лабораториях. Методика, применявшаяся Эллиоттом и сотр. [661, 666, 668, 669], заключалась в обработке фракционированной смеси белков из сыворотки быка 0,1 и. соляной кислотой при 37° (для инактивации ферментов, разрушающих брадикинин) и в последующей их инкубации с трипсином в течение 6 час. Полученную смесь осаждали спиртом, а из фракции, растворимой в 74%-ном спирте, чистый брадикинин удалось выделить с помощью противоточного распределения, хроматографии на, карбоксиметилцеллюлозе (ацетатно-аммониевый буферный раствор pH 6,5 и 5) и электрофореза. Сначала на основании неточных данных аминокислотного анализа считали, что брадикинин имеет следующий аминокислотный состав Ser Gly Pro Phe Arg= 1 1 2 2 2. Результаты кислотного гидролиза, расщепления химотрипсином и разложения по методу Эдмана позволили приписать бради-кинину следующую структуру [c.105]

Биологическая активность фермента в ходе хроматографии может измениться (как уменьшиться, так иногда в возрасти) в силу ряда дополнительных причин. Например, кажущееся увеличение активности фермента может быть результатом его отделения от протеаз. Снизиться активность может как в результате истинной денатурации илп окисления 8Н-групп белка, так и при отделении апофермепта от кофакторов. Иногда инактивация обусловлена разъединением двух или нескольких последовательно работающих ферментов. Такого рода кажущиеся инактивации могут быть обнаружены при объединении хроматографических фракций, когда активность фермента восстанавливается. Для сохранения биологической активности липофильных белков мембран в элюент иногда приходится добавлять спирт или ацетон. При этом может возникнуть определенная неравномерность распределения органического растворителя между жидкостью внутри и снаружи гранул — ионы сорбента, гидратируясь, оттягивают на себя воду. Следствие этой неравномерности — наложение на ионный обмен эффекта распределетельной хроматографии. Для сохранения биологической активности ферментов в элюент часто добавляют глицерин (до 25%) или этиленгликоль (до 5%). [c.292]

Натуральные (несгущенные) соки. Получение этих препаратов не отличается сложностью. Мытый и обсушенный на воздухе свежесобранный растительный материал измельчают на вальцах и траворезках. Полученную кашицу подвергают прессованию под высоким давлением. Если материал беден соком, то до прессования его мацерируют спиртом. Полученный после прессования сок богат белками и ферментами, а потому неустойчив, Для стабилизации его обрабатывают крепким спиртом, осаждающим белковые, пектиновые и слизистые вещества, или с целью инактивации последних подвергают быстрому нагреванию до 75—78°С с последующим быстрым охлаждением. После подобных обработок сок отстаивают и фильтруют или центрифугируют. Осветленный сок обычно консервируют спиртом и хлорэтоном и подвергают стандартизации, [c.394]

Другим качеством, сопряженным с метаболической инактивацией специализированных клеток, является повышение их устойчивости к действию неблагоприятных факторов окружения экстремальным температурам, концентрации водородных ионов, действию литических ферментов, спиртов, ксенобиотиков, иони-зируюш ей радиации и др. Степень устойчивости покояш ихся форм к воздействию повреждаюш их агентов варьирует в зависимости от вида организма и в определенной степени сопряжена с условиями образования. [c.94]

Присутствие органических растворителей является помехой при определении активности почти всех ферментов. Поэтому при осаждении фермента растворителем (спиртом, ацетоном, диоксаном и т. п.) активность следует контролировать только после отделения осажденного белка, его растворения и удаления остатков спирта, ацетона и т. п. По сравнению с фракционированием в растворах солей обработка органическими, легко летучими веществами, имеет то преимущество, что получение готового препарата и его высушивание может быть вьшолнено сразу, без предварительного диализа растворов, а следовательно, без разбавления и частичной (дополнительной) инактивации, которые часто сопутствуют диализу. [c.146]

Разветвленные декстрины были обнаружены в сусле предприятий по производству шотландского виски, и поскольку они не сбраживаются дрожжами, то moi t обусловливать снижение выхода спирта [15]. В отличие от пивного сусла, сусло при производстве спирта перед ферментацией не подвергается кипячению, и поэтому ферменты (включая граничную декстриназу) активны как в лабораторных, так и в промышленных условиях. Считается, что добавление граничной декстриназы к ингибиторам про-теиназы при затирании дает положительный эффект. Такие комплексы с добавлением граничной декстриназы лучше переносят инактивацию в процессе затирания, и тем самым для брожения используется более высокий уровень свободной граничной декстриназы, что сокращает количество разветвленных декстринов и повышает выход спирта [15]. Хотя механизм высвобождения свободной граничной декстриназы ясен еще не до конца, он, возможно, связан с изменением уровня pH в ходе брожения. [c.35]

Допустим, что перед исследователем стоит задача определить природу дефекта у мутантной мыщи, синтезирующей аномально низкое количество альбумина (белка, который в норме секретируется в кровь клетками печени в значительных количествах). Для этого прежде всего необходимо взять образцы ткани печени у дефектных и нормальных мыщей (последние служат в качестве контролей) и обработать клетки сильным детергентом для инактивации клеточных нуклеаз, которые в противном случае могут разрушить нуклеиновые кислоты. Затем отделяют РНК и ДНК от всех других компонентов клетки присутствующие белки при этом полностью денатурируются, их удаляют последовательной экстракпией фенолом - мощным органическим растворителем. Нуклеиновые кислоты остаются в водной фазе. Чтобы их отделить от низкомолекулярных клеточных соединений, проводят осаждение спиртом. После этого ДНК отделяют от РНК, пользуясь их различной растворимостью в спиртах и обрабатывают высокоспецифическими ферментами (соответственно РНКазой или ДНКазой), чтобы освободиться от нежелательных примесей нуклеиновых кислот. [c.239]

При однократном приеме больших доз спирта этилового (острая алкогольная интоксикация) активность. метаболизирующих ферментов цитоплаз.матического ретикулума и микросом гепатоцитов резко падает. Это ведет к за.медлению метаболизма (инактивации) лекарств, [c.165]

Иная картина наблюдается при частом приеме спирта этилового, особенно при хроническом алкоголизме. Здесь спирт этиловый выступает как индуктор микросомальных фер.ментов печени. Вследствие этого метаболизм Л В ускоряется, а значит, укорачивается и ослабляется их эффект. Так, у больных хроническим алкоголизмом практически укорачивается противосвертывающий эффект непрямых антикоагулянтов. В результате индукции микросомальных ферментов ускоряется метаболизация (инактивация) стероидных гормонов и их препаратов, чем резко ослабляется их действие. У пьющих женщин гормональные контрацептивы обычно неэффективны. Снижается у больных алкоголизмом и активность пероральных противодиабетических средств, что связано с их быстрым разрушением и выведением. Так, например, период полувыведения бутамида из организма при алкоголизме вдвое короче, чем у клинически здоровых лиц. По той же причине обычные дозы антибиотиков группы рифампицина не создают терапевтической концентрации в крови пьющих людей. В таких случаях для достижения терапевтического эффекта больным хроническим алкоголизмом нужно либо увеличить разовую дозировку, либо вводить обычные дозы чаще. [c.166]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология