Трипсин определение активности

Рис. 117. Определение температуры конформационного перехода активного центра а-трипсина по температурной зависимости эффективной константы скорости ультразвуковой инактивации фермента

Следует подчеркнуть, что в этом небольшом, казалось бы, химическом процессе - отщепление гексапептида от предшественника-заключено важное биологическое значение, поскольку при этом происходят формирование активного центра и образование трехмерной структуры трипсина, а известно (см. главы 1 и 4), что и белки биологически активны только в своей нативной трехмерной конформации. В том, что трипсин, как и другие протеиназы, вырабатывается в поджелудочной железе в неактивной форме, также имеется определенный физиологический смысл, поскольку в противном случае трипсин мог бы оказывать разрушающее протеолитическое действие не только на клетки самой железы, но и на другие ферменты, синтезируемые в ней (амилаза, липаза и др.). В то же время поджелудочная железа защищает себя еще одним механизмом-синтезом специфического белка ингибитора панкреатического трипсина. Этот ингибитор оказался [c.420]

Определение протеолитической активности трипсина основано на количественном определении тирозина в продуктах расщепления казеина. В качестве реагента на тирозин используется фенольный реактив, дающий с тирозином синее окрашивание, интенсивность которого определяется колориметрически. [c.52]

При остром панкреатите, когда трипсин и другие ферменты из пораженной поджелудочной железы вымываются в кровь, уровень их в крови соответствует размерам некротического участка. В этом случае определение активности трипсина в сыворотке крови является надежным ферментным тестом при диагностике острого панкреатита. Следует отметить, что субстратная специфичность трипсина ограничена разрывом только тех пептидных связей, в образовании которых участвуют карбоксильные группы лизина и аргинина. [c.421]

В чем состоит принцип метода определения активности трипсина [c.55]

В настоящее время установлено, что специфичность и каталитические свойства многих ферментов обусловлены наличием в молекуле фермента определенных активных центров или активных участков полипептидной цепочки. В ряде случаев установлен характер и порядок чередования остатков аминокислот в этих функционально наиболее важных участках. Так, особенно важную роль играет фрагмент полипептидной цепи, имеющий строение аспарагиновая или глютаминовая кислота —серин — глицин или аланин (холинэстераза, трипсин, тромбин и др.). От некоторых ферментов оказалось возможным отщепить часть молекулы без существенного снижения их каталитической активности. К числу таких ферментов принадлежат, например рибонуклеаза и ряд протеолитических ферментов. [c.124]

Наполняют пробирку до верха однократным I В. Центрифугируют в мини-центрифуге на низкой скорости 1 мин, удаляют супернатант, добавляют 100 мкл буфера для лизиса хлоропластов, который содержит ингибитор трипсина, и перемещивают. Помещают образец на лед и затем используют для определения активности NPT-II (разд. 6.7.3). [c.346]

Токсическое действие. Вне зависимости от форм химических соединений К., поступающего в организм, направленность действия и известные механизмы развития интоксикации близки. Уровень токсичности соединений К. зависит от их типа, растворимости, а также от наличия в веществе других биологически активных элементов. Достижение близкого токсического эффекта при введении различных соединений К. связывают в основном с количеством свободных ионов Сё . Существует предположение о биологической конкуренции К. с цинком, которая определяет характер многих изменений в организме под воздействием К., а также протекторное действие цинка при кадмиевой интоксикации. Установлено, что металлы (цинк, селен) модифицируют токсические эффекты К., очевидно, в результате конкуренции за связывание с определенными биологическими субстратами. К. снижает активность пищеварительных ферментов — трипсина и, в меньшей степени, пепсина. В экспериментах установлено, что К. подавляет отдельные звенья иммунной защиты организма. [c.445]

Определение активности трипсина [c.49]

Работа 48. Определение характера ингибирования активности трипсина трасилолом [c.82]

Под влиянием кислот инсулин претерпевает денатурацию, но основания регенерируют исходную физиологически активную форму. Агенты, разрывающие связи 8—8 необратимо денатурируют инсулин. Инсулин образует соединения с двухвалентными металлами из поджелудочной железы выделяют, как правило, хорошо кристаллизующееся соединение с цинком. Инсулин переваривается пепсином и химотрипсином и незначительно атакуется трипсином. Инсулин не проявляет антигенных свойств при впрыскивании животным, относящимся к другим родам, чем тот, из которого он был выделен. Как уже отмечалось инсулин быка, овцы и лошади различаются между собой последовательностью трех аминокислот определенного участка молекулы. Однако эти аминокислоты не имеют значения для физиологической активности гормона поэтому инсулин, выделенный из животных, может служить лекарственным препаратом для человека. [c.447]

За последнее время большое распространение получил метод определения активности протеолитических ферментов с помощью хромогенных субстратов. Для трипсина, например, употребляют м-нитроанилид -бензоил-1),Ь-аргинина [1]. Методы получения этого субстрата, описанные в литературе, используют труднодоступные реактивы, такие, как диэтилфос-фин, три-н-бутиламин [2] и дициклогексилкарбодиимид [1]. [c.76]

Далее было выяснено влияние гидрофобного связывания углеводородов ферментами (пепсин и химо-трипсин) на биологическую (протеологическую) активность. Показано, что солюбилизация бензола приводит к значительному снижению протеолитической активности пепсина. После солюбилизации активность его падает со 100 до 40—70% (метод определения активности по Метту). Предполагаемый механизм торможения протеолитической активности пепсина заключается в том, что бензол, взаимодействуя с неполярными группами пепсина, экранируют его активный центр. [c.396]

Бурильон и сотрудники также показали, что -кислый гликопротеин может расщепляться протеолитическими ферментами. Изучая действие этих ферментов на препараты, выделенные из плевральной жидкости человека, эти авторы обнаружили, что трипсин наиболее активно расщепляет гликопротеин, а затем в порядке убывания активности идут пепсин, папаин и химотринсин [138]. Смесь, полученная в результате последовательного действия всех трех ферментов, разделялась при зональном электрофорезе на три компонента, а при хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе — на пять компонентов. При определении коэффициентов седиментации этих фракций были обнаружены очень небольшие различия. Найденные коэффициенты седиментации соответствовали молекулярным весам от 3000 до 3500, Содержание углеводных компонентов в них также было очень сходно, за исключением количества гексозамина. Все гликопептиды содержали одни и те же семь аминокислот (кроме валина), но их молярные соотношения сильно варьировали. На ]Ч-концах были обнаружены четыре различные аминокислоты [25]. [c.92]

Рис. 108. Определение Л Я ионизации ионогенной группы активного центра трипсина, контролирующей реакцию гидролиза л-нитроанилида N-бензоил-Л-аргинина (по данным А. А. Клёсова и В. К.

Определение ферментативной активности иммобилизован ного трипсина. Определение проводят, измеряя скорость ферментативного гидролиза этилового эфира N-бeнзoил-L-apгининa, потенциометрически на рН-стате. Для этого из инкубационной смеси отбирают пробы по 0,5—1,0 мл и помещают в ячейку рН-стата, содержащую 10 М субстрата (pH около 7), 0,1 М КС1 и 10 мМ СаСЬ- Измеряют активность отобранных проб, учитывая фоновую реакцию гидролиза субстрата в отсутствие фермента. [c.148]

Определение активности трипсина, иммобилизованного на эупергите С. Активность трипсина, иммобилизованного на эупергите С, может быть определена с использованием рН-метра, который должен быть оборудован автоматической бюреткой и контролируемой рН-электродом ячейкой для титрования, что позволяет осуществлять непрерывное титрование до установленной конечной точки (т. е. требуемого pH). Одновременно регист- -рируется количество NaOH пошедшего на титрование результаты представляются графически в виде зависимости от времени. [c.136]

Определение активности трипсина производят на другой день после фильтрации. Для этого используют метод Шоу и Петико-лара (Show, Peti olar, 1948) с применением казеина в качестве субстрата. Объем пробы — 30—40 мл. [c.49]

При определении активности 0,3% растворов Дифко 50% расщепления казеина отмечается в интервале разведений раствора трипсина — между 1 96 и 1 122, что соответствует 38 000— [c.50]

Преждевременное превращение таких проферментов, как трипсиноген, в активные протеиназы в поджелудочной железе может иметь губительные последствия. Чтобы предотвратить такую преждевременную активацию, поджелудочная железа должна вырабатывать также специфические ингибиторы. Панкреатический ингибитор трипсина представляет собой небольшой белок с мол. весом 6500, специфически связывающийся в активном центре трипсина (Л[г=10 М в щелочной среде) . Определение кристаллической структуры самого трипсина и его ингибитора показало, что эти две молекулы плотно прилегают друг к другуб. Ингибитор связывается таким образом, как будто он является пептидным субстратом один край молекулы ингибитора образует антипараллельную р-структуру с пептидной цепью фермента. Лизин-15, образующий часть этой р-структуры, входит в специфический связывающий центр для основной аминокислоты субстрата. Таким образом, ингибитор протеиназы представляет собой модифицированный субстрат, который фактически может подвергаться атаке в активном центре. Однако подгонка двух молекул является настолько тесной, что молекула воды не может участвовать в завершающей стадии каталитического акта, и комплекс остается нереакционноспособным. (В тонкой кишке количество ингиби- [c.113]

Проферменты. Протеолитические ферменты пищеварительного тракта, а также поджелудочной железы синтезируются в неактивной форме—в виде проферментов (зимогенов). Регуляция в этих случаях сводится к превращению проферментов в активные ферменты под влиянием специфических агентов или других ферментов—протеиназ. Так, трипсин в поджелудочной железе синтезируется в форме неактивного трипсиногена. Поступив в кишечник, он превращается в активный трипсин в результате аутокатализа или под действием других протеиназ (механизм активации подробно рассматривается в главе 12). Превращение неактивного пепсиногена в активный пепсин происходит аутокаталитически в результате специфического ограниченного протеолиза в присутствии соляной кислоты и также связано с отщеплением от профермента специфического ингибитора пептидной природы. Эти превращения зимогенов в активные ферменты связаны с конформационными изменениями молекулы фермента и формированием активного центра или его раскрытием (демаскирование). Синтез протеиназ в неактивной форме и ряда других неактивных белков-пред-шественников имеет, очевидно, определенный биологический смысл, предотвращая разрушение клеток органов, в которых образуются проферменты. Примерами подобного активирования белков является активиро- [c.153]

Следует отметить, что при пероральном применении протеиназ в ряде случаев общая протеолитическая активность крови заметно повышалась. Это дало основание ряду авторов постулировать возможность всасывания и попадания экзогенных ферментов или их активных фрагментов в кровяное русло. Эффект более выражен при введении фермента не в водном, а в масляном растворе. Аппликационное применение ферментов при лечении гнойных ран и трофических язв давно уже вошло в медицинскую практику. Чаще всего в этих случаях применяют протеолитические ферменты, такие, как трипсин, химотрипсин и др. Фермент гиалуронидазу из семенников крупного рогатого скота используют для рассасывания рубцов и лечения суставов. Для лечения гнойных легочных заболеваний применяют ингаляционные формы химотрипсина или трипсина дезоксирибонуклеазу — для лечения вирусных заболеваний глаз. Однако парантеральное применение ферментов по указанным выше причинам в определенной степени затруднено. Тем не менее и в этом случае некоторые ферменты с успехом используются для лечения ряда заболеваний. Достаточно эффективно применение стрептодеказы — фермента, гидролизующего тромбы в кровеносных сосудах. При многих заболеваниях сосудов, таких, как артериальный тромбоз и глубокий тромбофлебит, с успехом применяют протеолитические ферменты различного происхождения. [c.86]

После очень кратковременного контакта при связывании трипсина с оксиалкилметакрилатным гелем (4 мг связанного фермента на 1 г сухого геля) получали различное микроокружение фермента путем блокирования остающихся реакционноснособных групп глицином, этаноламином или этилендиамином [52]. Ни в одном случае не наблюдался сдвиг оптимума pH для активности, определен- [c.430]

Ангиотонинами называют группу октапептидов, обладающих сосудосуживающим действием. Различия между ангиотонинами, полученными из разных видов, касаются аминокислотного остатка в положении 5. Ангиотонины образуются из присутствующего в плазме белка ангиотонино гена в результате последовательного расщепления определенных пептидных связей протеолитическими ферментами — трипсином, ренином и особым ферментом, катализирующим превращение неактивного ангиотонина I в активный ангио-тонип II (фиг. 9). [c.54]

Смотреть страницы где упоминается термин Трипсин определение активности: [c.166] [c.304] [c.305] [c.307] [c.307] [c.250] [c.18] [c.99] [c.18] [c.62] [c.356] [c.20] [c.194] [c.73] [c.344] [c.347] [c.398] [c.702] [c.244] [c.104] [c.546] [c.244] [c.227] [c.258] [c.265]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология