Ферменты протеолитическая деградация

Еще одно важное достоинство кристаллизации это то, что она позволяет сохранять в течение длительного времени очищенные белки. Многие фирмы выпускают ферментные препараты в виде суспензии кристаллов не просто из желания продемонстрировать высокую степень их чистоты, а потому что такие суспензии — это самый надежный метод хранения ферментов (кроме, может быть, глубокого замораживания). Это объясняется рядом причин. Во-первых, молекулы в кристаллах плотно упакованы и потому оказываются иммобилизованными, так что вероятность тепловой денатурации снижается. Далее, трудно себе представить, что протеолитические ферменты, присутствующие в препарате, могут кристаллизоваться вместе с очищенным ферментом или белком (хотя протеазы могут вполне адсорбироваться на поверхности кристаллов). Поэтому в суспензии кристаллов большинство белковых молекул предохранено от протеолитической деградации. И наконец, кристаллизация обычно проводится в условиях высоких концентраций сульфата аммония, что предотвращает бактериальное загрязнение и стабилизирует белковые молекулы. [c.334]

Общая схема деградации белков пищи протеолитическими ферментами в пищеварительном тракте представлена на рис. 24.2. [c.362]

Иммуноглобулины IgA являются основным классом антител в секретах (молоке, слизи, слезах, секретах дыхательных путей и кишечника). Эти белки существуют либо в виде мономера (как IgG), либо чаще в виде димера, содержащего дополнительно одну J-цепь и еще одну полипептидную цепь, называемую секреторным компонентом (рис. 119). Секреторный компонент синтезируется эпителиальными клетками и первоначально находится на внешней поверхности этих клеток, где он служит в качестве рецептора для связывания IgA из крови. Образующийся комплекс (IgA — секреторный компонент) поглощается клетками путем эндоцитоза, переносится через цитоплазму эпителиальных клеток и выделяется в секреты. Дополнительно к этой транспортной роли секреторный компонент может также предохранять молекулу IgA от деградации протеолитическими ферментами в секретах. [c.215]

Проблемы последующей обработки конечного продукта при синтезе полисахаридов связаны прежде всего с удалением микроорганизмов, что крайне важно, если этот продукт применяется в пищевой промышленности. Для разрушения бактерий используют литические и протеолитические ферменты, что в свою очередь приводит к дальнейшему загрязнению среды,, поскольку при этом добавляется потенциальный субстрат для роста микробов. При удалении бактериальных остатков фильтрованием применяют обработку полимера протеолитическими ферментами при щелочном pH с последующим добавлением кремниевого адсорбента. Во избежание деградации полимера при щелочном pH можно при необходимости подкислять среду. Для осветления растворов полисахаридов их пропускают через иммобилизованные эндоглюканазы, что приводит к незначительному уменьшению вязкости вследствие гидролиза г ико-зидных связей. [c.221]

Хотя теперь уже не вызывает сомнения решающая роль углеводной части в специфичности групповых веществ, однако в опытах по ферментативной деградации было показано значение всей макромолекулярной структуры для серологической активности. Ограниченное, но тем не менее значительное уменьшение активности веществ А, В, Н и Le при их обработке определенными протеолитическими ферментами, которые деполимеризуют их молекулы (но, насколько известно, не изменяют строение углеводной части, ответственной за специфичность), показывает, насколько важна целостность всей макромолекулы групповых веществ для проявления ими максимальной активности. Причина потери активности групповых веществ под влиянием указанных выше факторов выяснится, очевидно, когда будет известно строение их молекул. [c.212]

Однако гидролиз пептидных связей в белках может происходить и при нормальных условиях — комнатной температуре, нейтральных значениях pH. Это является результатом работы протеаз — ферментов, созданных природой для деградации других белков в мягких условиях. Поскольку в любых (даже высоко-очищенных) препаратах белков могут находиться протеазы в качестве сопутствующих примесей, при изучении механизмов инактивации необходимо учитывать и возможность протеолиза. ф Другим примером протеолитической инактивации может служить бактериальное заражение реакторов, содержащих ферменты. Случайно попавшие в реактор клетки микроорганизмов [c.121]

Таким образом, усиление протеолиза при голодании может быть обусловлено как активацией протеолитических ферментов, так и модификацией белков-субстратов, повышающей их чувствительность к действию этих ферментов. Следует отметить, что протеиназы, ответственные за деградацию нормальных клеточных [c.51]

Естественно, Bt-протеин не представляет угрозы для теплокровных животных и человека, поскольку пищеварительный тракт у них устроен иначе, чем у насекомых, и у них другие протеолитические ферменты. Более того, Bt-протеин — весьма нестойкий белок, который легко денатурирует при нагревании, в кислой среде желудка, быстро переваривается желудочным соком (лишь разбавление желудочного сока в тысячу раз позволило построить кривую его деградации во времени уже через десять минут от него не оставалось и следов). В остром эксперименте на мышах (15 дней скармливания Bt-протеина в дозах до 5 граммов на один килограмм веса) не установлено никаких отклонений в здоровье опытных особей. За почти сорокалетнюю историю использования препаратов на основе Bt-протеина не отмечено ни одного случая аллергий или его токсичности для людей, в том числе сотрудников предприятий, на которых его производят. [c.48]

Известен еще один способ активации КФ, связанный с действием протеолитических ферментов [23, 24, 48, 111—ИЗ]. В ранних работах в препаратах КФ из мышц был обнаружен белковый ки-назо-активирующий фактор (КАФ), повышающий активность фермента при pH6,8 [ИЗ—115]. Этим фактором оказалась Са +-зависимая протеиназа [116]. Эффект активации фермента при ограниченном протеолизе трипсином и химотрипсином наблюдали также при изучении КФ из сердца и мозга [38, 115, 117]. Активирующее действие эндогенных протеиназ выявлялось при хранении очищенных препаратов КФ, которые за две недели при 4°С активировались в 12 раз [23]. Имеет ли физиологическое значение активация КФ протеолизом, пока остается неясным. Однако он широко использовался для изучения регуляторных свойств и функциональной роли субъединиц КФ [21, 23, 54, 112, ИЗ, 118, 119]. В нашей работе с этой целью был применен субтилизин, действие которого вызывало 10-кратное увеличение активности КФ при рн 6,8. Одновременно с активацией фермента исчезала зависимость активности от Са . Такое же явление оказывало действие трипсина [14]. Протеолиз КФ субтилизином протекал более медленно, чем протеолиз трипсином, и это давало возможность детально анализировать изменение активности и структуры фермента во времени. Под действием протеиназ первой разрушалась -а-субъединица. Если сравнить активацию фермента цАМФ-зави- симой протеинкиназой, которая главным образом зависела от фосфорилирования р-субъединицы, то активация протеолизом коррелировала с деградацией а-субъединицы. Следовательно, механизмы этих двух путей активации различны., хотя в обоих случаях [c.62]

Низкая стабильность лигандов. Как правило, низкая стабильность лигандов связана с тем, что мембранные препараты содержат целый набор протеолитических ферментов, или же с транспортом лиганда (см. также 3.3 Деградация и транспорт лиганда ). Обычно для решения этой проблемы в инкубационную среду добавляют ингибиторы пептидаз, снижают температуру проведения опытов, используют стабильные аналоги лигандов (В-замещенные или содержащие амидные группы на С-конце). [c.462]

После завершения процесса трансляции на рибосомах белки могут претерпевать дальнейшие модификации. Последние различаются по степени сложности от образования дисульфидных мостиков в результате окисления близко расположенных пар тиольных групп и введения в молекулу белка малых групп, таких как гидроксил,. метил, ацетил, карбоксил и фосфат, до присоединения достаточно больших олигосахаридных звеньев. Многие белки, напротив, синтезируются и хранятся в виде биологически неактивных молекул, из которых в результате ограниченной и контролируемой протеолитической деградации образуются ферменты или полииептидные гормоны, [c.543]

Изменение количества ферментов в клетках осуществляется путем индукции или репрессии генов, а также его протеолитической деградации в клетке. Ферменты, которые присутствуют в клетке в относительно постоянном количестве, называются конституитивны-ми. Ферменты, количество которых резко изменяется в зависимости от метаболической ситуации, называются адаптивными, или инду-цибельными. Индуцибельные ферменты и их изоформы чувствительны к протеолизу. [c.375]

Следует отметить участие специфических протеиназ в таком явлении, как катаболитная инактивация. У дрожжей глюкоза вызывает не только катаболитную репрессию определенных ферментов, но и протеолитическую деградацию малатдегидрогеназы и фосфоенолпируваткарбоксилазы, а также аминопептида-зы. По-видимому, глюкоза или ее метаболиты, а возможно, само повышение скорости образования АТФ активируют или индуцируют синтез протеиназы, необходимой для избирательного разрушения указанных ферментов. [c.56]

Механизм узнавания аномальных или нефункциональных белков неизвестен, скорее всего, важную роль в нем играют особенности третичной структуры белков, и замена даже одной аминокислоты сильно снижает устойчивость белка к внутриклеточному прогеолизу. Последнее обстоятельство может существенно мешать получению микроорганизмов-сверхпродуцентов, у которых повышенное образование целевого продукта обусловлено мутациями по соответствующим ферментам. Такие ферменты будут восприниматься системой узнавания как аномальные и подвергаться протеолизу, что тормозит биосинтетические процессы, а иногда и рост микроорганизма. Специфический (АТР зависимый) протеолиз может дополнять регуляцию по механизму катаболитной репрессии. Например, у некоторых дрожжей глюкоза не только репрессирует синтез определенных ферментов (малатдегидрогена-зы, ФЕП-карбоксилазы), но и стимулирует их протеолитическую деградацию, по-видимому, за счет индукции или активации соответствующей протеи назы. Решающую роль играет протеолиз в так называемой 808-регуляции, т. е. активации 808-регулона, включающего около 20 генов, которые индуцируются в ответ на некото- [c.91]

Расщепление полипептидной цепи на фрагменты проводят обычно при помощи протеолитических ферментов, таких, как трипсин, химотрипсин или пепсин. Эти ферменты действуют на различные участки полипептидной цепи, так как имеют повышенное сродство к различным аминокислотным остаткам. Необходимо учитывать также соседние аминокислотные остатки, т. е. пространственное окружение атакуемой пептидной связи. Оказалось, что трипсин гидролизует только те пептидные связи, в образовании которых участвует карбоксильная группа лизина или аргинина, а химотрипсин гидролизует связи по фенилаланину, триптофану и тирозину Обычно протеолитические ферменты, гидролизующие полипептидные цепи, предварительно иммобилизуют на нерастворимых матрицах для более легкого отделения их от продуктов гидролиза. Далее определяют аминокислотные последовательности каждого полипептидного фрагмента. Для этого чаще всего используют метод Эдмана, заключающийся в анализе полипептида только с Ж-конца. Концевая аминокислота при взаимодействии с фенилизотиоцианатом в щелочной среде образует стойкое соединение, которое можно отщепить от полипептида без его деградации. Фенилтиогидантоиновое (ФТГ) производное аминокислоты идентифицируется хроматографическим методом. После идентификации концевого Ж-амино-кислотного остатка метка вводится в следующий аминокислотный остаток, [c.41]

Аминокислотная последователыность небольших пептидов определялась химическими методами — динитрофенильным, деградацией по Эдма у и гидразинолизом, а также расщеплением карбокоипептидазой. Триптические пептиды большой длины подвергались дальнейшему расщеплению другими протеолитическими ферментами — химотрипсином, пепсином или папаином аминокислотная последовательность полученных меньших пептидов определялась обычными химическими методами (см. кн. L стр. 83). [c.129]

Интерфазной гибели предшествует ряд закономерных физиологических и морфологических изменений. Нарушается ядерное фосфорилирование, изменяется проницаемость ядерной, митохондриальной и цитоплазматической мембран, угнетается дыхание, происходит деградация дезоксирибонуклеопротеидного комплекса в ядре, активируются протеолитические ферменты, клетки теряют способность выводить краситель — эритрозин Б (гибнущие клетки окрашиваются этим красителем). Среди морфологических изменений наиболее отчетливо выражены набухание и пикноз ядер, вакуолизация и распад ядрышек. [c.120]

Представленные данные свидетельствуют о том, что эластическая ткань и во взрослом организме не является инертной, а подвергается процессу разрушения и восстановления, особенно интенсивному в условиях патологии. Главную роль в эласто-лизе, по-видимому, играют локальные ферментные процессы, однако нельзя исключить диффузию циркулирующих эластолитических энзимов. Так, в наших исследованиях [Шехтер А. Б. и др., 1977] при пересадке обработанных протеолитическими ферментами сосудов с резко сниженной антигенностью (колла-ген-эластических каркасов) эластические мембраны были сохранны, однако местами и очень медленно (через 1—2 года) все же происходила их деградация, несмотря на отсутствие клеточных элементов и, следовательно, локальных источников эластазы. [c.158]

Деградация рецепторов происходит в результате присоединения к рецепто-росоме лизосомы, содержащей протеолитические ферменты. [c.377]

В Е. ali обнаружен ряд протеолитических ферментов, которые участвуют в деградации белков и пептидов. При этом протеазы имеют разную локализацию в клетке, а именно в цитоплазме, периплазме и в мембранах. Особый интерес для генетичесшй инженерии представляет протеаза La Е. oli. Она кодируется геном [c.153]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология