Динитрофенил аминокислоты

V. К-(2,4-ДИНИТРОФЕНИЛ)-АМИНОКИСЛОТЫ И З-ФЕНИЛ-2-ТИОГИДАНТОИНЫ [c.412]

Гидролиз дает К-(2,4-динитрофенил)аминокислоту, которая легко идентифицируется по методу бумажной или тонкослойной хроматографии. [c.384]

Аминогруппа аминокислоты или пептида реагирует в этом случае с 2,4-динитрофторбензолом с образованием К-(2,4-динитрофенил)производного, имеющего желтый цвет. [c.521]

Подкисленный или подщелоченный перманганат калия окисляет очень многие соединения, образуя при этом пятна от желтой до белой окраски на фиолетовом фоне хроматограмм. После сушки фон становится коричневым, а через несколько суток даже исчезает. Для обнаружения веществ кислотного или основного характера также пригодны кислотно-основные индикаторы в водном или спиртовом растворе. Раствором динитрофенил гидразина обнаруживают вещества, содержащие карбонильную группу. В частности, с ним интенсивно реагируют ароматические альдегиды и кетоны. Раствор нингидрина — очень чувствительный реагент на аминокислоты и вообще алифатические амины. [c.95]

При исследовании структуры белков используются эти и другие методы расщепления. Предложен ряд технических приемов для идентификации конечных аминокислот. Один из них широко применяется для идентификации аминокислот, содержащих концевую аминогруппу. Согласно этому методу, проводят реакцию полипептида с 2,4-динитрофторбензолом, при этом свободная аминогруппа превращается в 2,4-динитрофенил-производное (разд. 4.2.2). Последовательный гидролиз полипептидов дает обычные аминокислоты, за исключением конечной N-apилaмииoки лoты, которую можно отделить и идентифицировать хроматографически. [c.297]

Наиболее специфичным из ферментов является трипсин. Он расщепляет только пептидные связи, образованные карбоксилом аргинина и лизина. Его действие можно еще более ограничить, если динитрофени-лировать в-аминную группу лизина. Химотрипсин расщепляет связи, образованные ароматическими аминокислотами. Недавно было обнаружено, что он гидролизует и лейциновые пептиды. Менее специфичны папаин, пепсин и субтилизин. Последний позволяет, однако, получать смесь низкомолекулярных пептидов, что часто оказывается удобным прн исследованиях. [c.516]

Взаимодействие пептида с 2,4-динитрофторбензолом ДИФ-метод, Сенджер, 1945 г.). Последующий гидролиз и идентификаш1Я Н-(2,4-динитрофенил) производного а-аминокислоты хроматографическими методами позволяет определить Ы-коицевую а-аминокислоту. [c.652]

D-Аминокислотная океидаза (для определения о- и аминокислот). Получают две одинаковые бумажные хроматограммы. Одну из них опрыскивают раствором о-аминокислотной оксида-зой в 0,06 М пирофосфатном буфере (pH 8,3). Инкубируют 2,5 ч цри 37°С в атмосфере влажного кислорода. Высушивают и опрыскивают обе хроматограммы нингидрином. На обработанной бумаге останутся только L-аминокислоты и глицин. В другом варианте а-кетокислоты (см.), образующиеся из D-аминокислот, могут быть определены при опрыскивании 2,4-динитрофенил-гидразином. [c.391]

Динитрофенил аминокисл оты (ДНФ-аминокислоты) ифенилтиогидантоины (ФТГ-аминокислоты) образуются при действии динитрофторбензола [151 — 154] или фенилгорчичного масла [155] на протеины или пептиды продукты конденсации разделяют соответствующим методом. Их выделение из реакционной смеси, и в особенности их идентификация, имеет большое практическое значение, так как указанная последовательность реакций делает воз- [c.412]

Так как в нитро- и динитробензолах в о- и -положениях электронная плотность понижена (см. правила замещения в бензольном ядре, том, П), приведенная выше динитрофенильная группировка обладает ярко выраженными электроноакцептор-нымя свойствами. Поэтому она оттягивает свободную электронную пару от атома азота, лишая его основных свойств. Этим объясняется тот факт, что в отличие от аминокислот динитро-фениламинокислоты не амфотерны и хорошо растворимы в органических растворителях. Для Ы-(2,4-динитрофенил)-аминокис- [c.782]

Когда влажную бумагу помещают в электрическое поле, неподвижная бумажная фаза, будучи заряжена отрицательно, вызывает эндосмотический поток жидкости по направлению к катоду. Полярность бумаги можно изменить химической обработкой [6], но обычно мирятся с наличием этого потока или нейтрализуют его до некоторой степени наложением противоположно направленного гидростатического течения. Эндосмотический поток приблизительно пропорционален градиенту потенциала и уменьшается с увеличением ионной силы буферного раствора. Его можно измерить при помощи электронейтральных или имеющих очень малую подвижность веществ. В тех случаях, когда требуется внести поправку на эндосмос в величины подвижности, подбирают такое вещество, молекулярный объем которого близок к молекулярному объему исследуемых молекул.В опытах по электрофорезу белков для этой цели используют декстраны, а в опытах по электрофорезу несложных ионов, таких, как аминокислоты или пептиды, используют глюкозу, сахарозу, перекись водорода, о-нитроанилин [6] или 2,4-динитрофенил-этаноламин [7]. [c.248]

Блассу [ПО] удалось разделить ДНФ-лейцин и ДНФ-изолей-цин, применив длительное элюирование смесями толуол—2-хлор-этанол—пиридин—25%-ный аммиак (20 12 6 1) (в одном направлении) и хлороформ—-грег-амиловый спирт—уксусная кислота (95 5 1) (8 ч в другом направлении). С помощью системы Бреннера и др. [107] этого сделать не удалось. Вальц и др. [111] использовали разделение производных динитрофенила для обнаружения аминокислот в моче. Общее разделение проводили по методу Бреннера и др. [107]. Кроме основных растворителей эти авторы применяли еще четыре вспомогательных растворителя толуол—пиридин—этиленхлоргидрин—25 %-ный гидроксид аммония (50 35 15 7), хлороформ—метанол— уксусная кислота (70 30 5), пиридин и н-бутанол, насыщенные 25 %-ным гидроксидом аммония при комнатной температуре. Результаты исследования показали, что разделение следует проводить двумерным хроматографированием при многократном элюировании. [c.500]

Блестящие исследования английского химика Ф. Зан-гера, о которых будет идти речь ниже в статье Э. Томпсона, подтверждают эффективность этих методов. Зан-геру удалось установить полностью строение важного белкового гормона — инсулина. В основе его исследования лежало применение химического реактива — дини-трофторбензола. Это вещество легко присоединяется к альфа-аминогруппам на концах пептидных цепей инсулина. В результате этого присоединения образуется вещество, называемое динитрофенил-инсулином (ДНФ-инсулин). Все концевые альфа-аминогруппы в этом соединении заняты динигрофенильными (ДНФ-) группами. Если белок подвергнуть гидролизу с помощью сильной кислоты, то все пептидные связи разрываются, только связи между ДНФ-группой и альфа-аминогруппами концевых аминокислот остаются в основном ненарушенными. Другими словами, каждая концевая аминокислота остается связанной с ДНФ-группой. Так как любое вещество, в котором присутствует ДНФ-группа, окрашено в отчетливо желтый цвет, то Зангеру удалось разделить ДНФ-аминокислоты путем хроматографии и определить последовательность, в которой они связаны в пептидных цепях молекулы инсулина. [c.72]

Описан [1679] анализ концевых групп цепей привитого полиметилметакрилата, выделенного из привитых сополимеров с шерстью. По этому методу привитые полимеры практически полностью выделяли из анализируемого материала, вываривая в соляной кислоте. В выделенном привитом полимере содержалось небольшое количество концевых аминокислотных остатков. Ззтем проводили динитрофенилирование выделенного полимера. Полученный продукт имел почти такие же спектральные характеристики, как и обычные динитрофенилированные аминокислоты типа валина, лейцина и метионина с максимумом поглощения в УФ-области при 340—345 нм. По данным колориметрического анализа было определено число динитрофени-лированных концевых аминокислотных групп, из которого, определив молекулярную массу выделенного полимера, можно рассчитать число аминокислотных концевых групп, связанных с привитым полимером, которое оказалось равным примерно [c.339]

В дальнейших исследованиях Сенгер разработал, а впоследствии довел до полного совершенства, метод, позволивший определять последовательность аминокислотных остатков в полипетидных цепях. При этом он исходил из следующих, сформулированных им на симпозиуме по аминокислотам и белкам в Колд Спринг Харборе в 1949 г. положений Методом динитрофенилирования можно определить природу концевых групп путем идентификации ДНФ-аминокислот (динитрофенил-амино-кислот.—Л. Ш.), полученных при гидролизе ДНФ-белка. Однако, если гидролизовать ДНФ-белок лишь частично, можно получить ДНФ-пептиды, исследование строения которых дает указания относительно природы аминокислот, расположенных в пептидных цепях вблизи концевых групп. ДНФ-пептиды довольно хорошо поддаются отделению от незамещенных пептидов и аминокислот путем экстракции органическим растворителем из подкисленного раствора и хроматографическим фракционированием на силикагеле. Смеси ДНФ-пептидов, полученные этим способом, гораздо менее сложны, чем продукты частичного гидролиза необработанного белка, так как отделяются только пептиды, содержащие М-концевые группы исходного белка. Для дальнейшего упрощения анализа последовательности аминокислот вместо инсулина были взяты очищенные фракции А и В, образующиеся при его окислении и содержащие только по одной концевой группе [37]. [c.133]

Кент [1] и Кент с сотрудниками [2] проводят разделение глюкозамина и галактозамииа и некоторых других амипосахаров, в частности смесей, содержащих нейтральные сахара или аминокислоты, пользуясь переводом их с помощью 2,4-динитрофторбензола П 94) в соответствующие М-(2,4-динитрофенил)-производные. Результаты хроматографического разделения этих производных приведены в табл. 32. [c.292]

Пептиды обнаруживали, с одной стороны, путем нагревания бумаги до 105° с наблюдением флуоресценции в ультрафиолетовом свете, с другой стороны, опрыскиванием хроматограммы 0,025%-ным раствором нингид-рииа в этаноле. Положение на хроматограмме пептидов нейтральной (N) и кислой (К) фракций можно видеть на рис. 192. Отдельные пептиды были элюированы из хроматограммы, и методом Зангера (динитрофенил-произ]юдные) были определены N-кoпцeвыe аминокислоты. [c.494]

М арил-ьь-аминокислоты. В качестве примеров для этой группы веществ выбраны Н- (2,4-динитрофенил) -оь-аминокисло-ты, легко получаемые из 2,4-динитрофторобензола и соответст- [c.148]

Рнс. 4.9. Реакция аминокислоты с 1-фтор-2,4-динитробензолом (реагентом Сенгера). Реагент назван в честь нобелевского лауреата (1958 г.) биохимика Фредерика Сенгера, который использовал его для определения первичной структуры инсулина. Вначале арилируют (с количественным выходом) всех свободные аминогруппы, после гидролиза пептида образуются 2,4-динитрофенил-производные аминокислот, обладающие яркой желтой окраской. Количественный анализ этих производных осуществляют спектрофотометрическими методами. С динитрофторбензолом реагируют также Е-аминогруппа лизина, имидазольная группа гистидина, ОН-группа тирозина и 8Н-группа цистеина. Динитрофе-нильные группы не отщепляются при кислотном гидролизе и используются для идентификации N-кoнцeвыx аминокислот в полипептидах. [c.38]

Смотреть страницы где упоминается термин Динитрофенил аминокислоты: [c.914] [c.72] [c.478] [c.694] [c.25] [c.265] [c.418] [c.131] [c.50] [c.185] [c.268] [c.335] [c.43] [c.317] [c.119] [c.295] [c.485] [c.201] [c.149] [c.431]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология