Амилаза, разделение

При помощи органических растворителей были очищены (и кристаллизованы) многие ферменты. Например, этанол применен для фракционной очистки гексокиназы из дрожжей, пепсин выделен и кристаллизован из водного этанола. С помощью ацетона были получены частично очищенные препараты ферментов из мышечного экстракта, а также очищена амилаза слюны. Применение диоксана (фракционирование различными его концентрациями) позволило очистить каталазу бычьей печени, а затем кристаллизовать ее прибавлением сульфата аммония. В растворах этанола различной концентрации удалось из экстрактов поверхностных культур плесневых грибов получить осадки, содержащие почти полностью разделенные фракции амилаз и протеаз. [c.146]

В 1974 г. был предложен метод разделения компонентов крахмала при помощи обезжиренной целлюлозы [80]. Из 2М раствора мочевины целлюлоза не связывает ни амилозы, ни амилопектина. Однако при прибавлении к системе этанола наблюдается заметная обратимая адсорбция амилозы на целлюлозе, достигающая максимума при концентрации этанола 32— 35% (повышение концентрации спирта не увеличивает связывания амилозы). Полное осаждение крахмала из 2М мочевины происходит при концентрации этанола 38—40%. Путем повторной адсорбции амилозы на целлюлозе можно получить раствор очень чистого амилопектина и осадить его спиртом. Такой амилопектин имеет голубое число 0,16, расщепляемость его Р-амилазой 50—51%. [c.128]

Установлена также зависимость растворимости амилазы от pH раствора. Наименьшая растворимость, т. е. максимум осаждения, обнаруживается при pH 5,5—6,4. В данном интервале pH при 56%-НОЙ концентрации этилового спирта осаждается до 40% амилазы, а при других значениях pH всего от 2 до 8%. При pH 5,0—5,1 происходит наиболее полное разделение ферментативного комплекса. [c.61]

Здесь уместно отметить, что разделение амилазы и протеазы при указанных концентрациях спирта проходит при температуре, близкой к О °С. [c.61]

Химическая индивидуальность поверхности может также играть известную роль. Как было установлено Адамсом и Холмсом , наряду с общей тенденцией адсорбировать катионы благодаря своим кислотным свойствам, синтетические смолы, получаемые из разных фенолов, обнаруживают индивидуальные различия. Что касается смол, получаемых из ароматических оснований, то они адсорбируют преимущественно анионы. Эти адсорбционные свойства имеют важные технические применения, например, при очистке воды. Различия в адсорбционной способности разнообразных твёрдых тел дают ценное средство разделения смесей, как сложных органических соединений, так и неорганических ионов. Эти различия успешно используются для выделения веществ, имеющих большое значения в биохимии, в особенности энзимов и пигментов. Использование для этой цели адсорбентов имеет большую давность. В 1862 г. Данилевский выделил амилазу из трипсина, сока поджелудочной железы, путём адсорбции на свеже-осаждённом коллодии. В более позднее время гидроокиси железа и алюминия, а также каолин и древесный уголь весьма успешно при- [c.188]

Моноглицериды и диглицериды образуются при частичном гидролизе триглицеридов под действием амилазы поджелудочной железы. Реакция протекает по этапам. Вначале образуются а,р-диглицериды, после чего разрывается вторая эфирная связь и получаются р-моноглицериды. Таким образом, природу жирных кислот в р-положении триглицеридов можно определить, выделяя р-моноглицериды из реакционной смеси и исследуя содержащиеся в них кислые компоненты. Поэтому хроматографическое разделение моноглицеридов и в меньшей степени диглицеридов представляет известный интерес вследствие информации, которую оно позволяет получить о строении жиров. [c.514]

Иногда применяли органические адсорбенты, например бензойную кислоту [350, 351], хинин и крахмал. Подобно фосфату кальция, бензойная кислота может растворяться (в эфире или при изменении раствора рН), что упрощает операцию. Было показано, что многие, но не все, образцы продажного маисового крахмала адсорбируют амилазу [352, 353] причины такого различия в поведении разных препаратов крахмала не выяснены. Вследствие этого оказалось невозможным проверить правильность заманчивого предположения о том, что в данном случае адсорбция обусловлена теми же силами, которые вызывают взаимное притяжение фермента и его субстрата. Дальнейшее расширение подобных исследований было бы в высшей степени желательным. Для разделения белков, обладающих специфическим сродством , особенно подходящими могут оказаться нерастворимые полимеры известного состава. [c.75]

Как видно из фиг. 29, для разделения ферментов поджелудочной железы наиболее подходит сефадекс 0-75. Это установили следующим образом. Три колонки одинакового размера (2X42 см, 130 мл) заполнили сефадексами разных типов. Для получения экстракта обезжиренную порошкообразную поджелудочную железу собаки в течение 30 мин обрабатывали 0,05М натрийацетатным буфером (pH 5,3) в 0,005 М ацетате кальция (5 мл па г порошка). На колонки наносили по 3 мл раствора и элюировали тем же буфером. Пик 1 соответствует липазе, 2 — рибонуклеаза, <3 — трипсиногену и химотрипсиногену, 4 —амилазе. [c.153]

Механизм действия специфических гидролитических ферментов, принимающих участие в метаболизме крахмала, и строение крахмала взаимозависимы, поэтому их лучше всего рассматривать вместе. По, поскольку этот вопрос будет подробно рассматриваться ниже, здесь мы лишь отметим следующее Мейер и др. [119] предложили линейное строение для амилозы и разветвленное для амилопектина, основываясь на том факте, что при действии Р-амилазы на амилозу происходит полное осахари-вание последней, тогда как из амилопектина образуется остаточный декстрин. Группа Мейера впервые иредлоя ила специфичный метод разделения амилозы и амилопектина, основанный на том, что амилоза в отличие от амилопектина растворима в горячей воде (70—80°). Позднее Шох [156] нашел, что амилоза избирательно осаждается к-бутанолом, с которым она образует кристаллический комплекс он использовал это свойство для фракционирования и очистки кукурузного и картофельного крахмала. Позднее было обнаружено, что еще более эффективным осадителем по сравнению с / -бутанолом являются к-амиловый спирт, к-пропиловый спирт и тимол. [c.141]

Первое применение) адсорбции для разделения и очистки ферментов было осуществлено русским биохимиком А. Я. Данилевским в 1862 г. С помощью свежеосажденного коллодия, использованного в качестве адсорбента, он отделил в панкреатическом соке амилазу от трипсина. Однако эта работа не давала общего метода анализа, который можно было бы применять для тонкого разделения сложных смесей. Такой общий адсорбционный метод анализа бьш впервые разработан М. С. Цветом. В основу метода М. С. Цвет положил избирательность адсорбции, т. е. способность разных веществ удерживаться на поверхности адсорбента при одинаковых условиях с разной интенсивностью. Он писал Для того, чтобы два находящихся в растворе вещества могли быть разъединены адсорбционным методом, необходимо, чтобы они занимали неодинаковый ранг в адсорбционном ряду , иначе говоря, имели бы разные коэффициенты адсорбции. М. С. Цвет обнаружил, что при фильтрации раствора растительк-ых пигментов через колонку с адсорбентом пигменты располагаются по длине колонки в виде отдельных зон. Исходя из этого, он сделал вывод, что зональное распределение составных частей раствора выражает относительное положение последних в адсорбционном ряду . Даже разница в таких свойствах двух веществ, как, например, молекулярная масса. [c.5]

Первые успехи в очистке ферментов были достигнуты Э.Брюкке (20), разработавшим метод очистки ферментов с помошью адсорбции. Первое по-настоящему успешное разделение ферментов (трипсина и панкреатической амилазы) было осуществлено в 1862 г. А.Я.Данилевским (21) путем адсорбции на коллодии. [c.173]

Разделение амилаз из Aspergillus niger и картофеля s . На полосках фильтровальной бумаги (ватман № 1, размером 40 X 12 см) проявляют пятна ферментативных экстрактов 50%-ным водным спиртом или ацетоном. Ацетон дает четкие пятна также и при высоких концентрациях ферментов. Хроматограммы высущивают и прижимают к верхней поверхности пластинок, покрытых агар-агаром, содержащим крахмал. Через 2--8 ч пластинки обрызгивают 0,01 н. раствором иода. Ниже приведены полученные величины [c.916]

Высокоспецифическая сорбция белков биосорбентами зависит от объемной концентрации карбоксильных групп в ионите (рис. 6) и от pH раствора. Специфичность обусловлена строением биосорбентов, но регулируется и условиями проведения фронтальных сорбционных и десорбционных процессов. На биосорбенгах биокарб можно осуществлять не только разделение белков близкой молекулярной массы и с близкими изоточками, как, например, протеазы и амилазы (ММ 28 ООО и 30 ООО, р/ 4,8 и 4,6), но также и одноактное выделение с получением высокоочищенных препаратов из культуральной жидкости и экстрактов протеолитических и амилолитических ферментов, ацетилхолинэстеразы, нейрамини-дазы, урокиназы, иммуностимулятора тималина, нейрогормонов, а также других белков и пептидов. [c.134]

Из других методик необходимо ( тметить очень хороший способ разделения аденозиндезаминазы, амилазы и фосфатазы на столбиках из кружков хроматографической бумаги (хроматотшил) (Митчелл и сотрудники). 13 качество растворителя был использован 60%-ный раствор сернокислого натрия с непрерывным иадением градиента концентрации за счет добавле-ння воды (рис. 190). [c.503]

Экспериментальные исследования и вполне научное описание действия ферментов проводились К. С. Кирхгофом (1814). Он показал, что водные вытяжки из солода способны при обычной температуре расщеплять крахмал с образованием сахара и декстрина. До этого Пермантье (1781) наблюдал превращение крахмала в сахар под влиянием кипячения его с минеральными кислотами. Однако эти работы были оценены и подтверждены значительно позднее. Только через 19 лет Пайен и Персо выделили из солода вещество, которое разлагает крахмал. Они назвали его диастазой (от греч. А а5 з1г — разделение). Этот фермент в настоящее время называется амилаза. [c.121]

На рис. 11 отражена последовательность движения образца при определении а-амилазы при помощи клинического прибора. При пониженных скоростях потока получены четыре пика. Считают, что эти пики отражают разделение изоферментов на колонке с иммобилизованным субстратом. Единственный пик, полученный при высокой скорости потока (>0,5 мл/мин), был далее разделен на два пика при умеренной скорости потока (>0,2 мл/мин, но <0,5 мл/мин), каждый из которых давал два хорошо разделенных пика при низкой скорости потока (<0,2 мл/мин) таким образом, были получены все четыре пика. Литературные данные, касающиеся выхода с хроматографической колонки а-амилазы, указывают, что смесь компонентов а-амилазы может быть электрофоретически разделена на четыре компонента — два изофермента панкреатического происхождения и два изофермента из слюны [37]. [c.40]

Экспрессия уникального а-амилазного кодирующего участка в клетках околоущных слюнных желез и печени находится под контролем двух элементов, разделенных сегментом длиной примерно 3 т.п.н. (рис. 9.17). Уровень экспрессии этого участка, если последняя в обоих типах клеток находится под контролем ближайшего регуляторного элемента, одинаков и относительно низок. Но в околоушных железах у взрослых мышей дальний регуляторный элемент может активироваться, в результате чего транскриптов образуется почти в 30 раз больще. Именно этим объясняется высокое содержание а-амилазы в клетках околоушных желез. Каждый регуляторный элемент сцеплен со своим ТАТА-бло-ком. Экзоны, находящиеся на 5 -конце первичного транскрипта, различаются при последующем сплайсинге они унифицируются и оба содержат инициирующий кодон AUG. Таким образом, 5 -ли- [c.180]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология