Неоднородность ультрацентрифугированием

Аналитическое ультрацентрифугирование полимеров [1, 2, 4, 12] включает в себя три следующих экспериментальных метода скоростную седиментацию, изучение седиментационного равновесия и процесса приближения к нему. Скоростная седиментация позволяет определить константу седиментации и полидисперсность образца. Седиментация макромолекул в зоне (зонное ультрацентрифугирование) — ценный метод обнаружения гетерогенности высокомолекулярного образца. Метод приближения к равновесию позволяет рассчитать молекулярную массу М и получить сведения о неоднородности полимера, а изучение седиментационного равновесия (состояния, достигаемого транспортным переносом макромолекул, хотя сам метод и не является истинно транспортным) — молекулярную массу (надежнее, но с большей затратой времени, чем в предыдущем методе) различных типов усреднения. Метод центрифугирования в градиенте плотности заключается в исследовании седиментации, состояния равновесия и приближения к нему в условиях искусственно создаваемого в кювете градиента плотности это — широко используемый метод определения молекулярной массы, наличия неоднородности и ее типа, служащий и для препаративных разделительных целей. [c.14]

Интерферометр Рэлея весьма чувствителен к наличию оптических неоднородностей в окнах кюветы, возникающих при ультрацентрифугировании. Использование на аналитической ультрацентрифуге в качестве источника света импульсного (аргонового) лазера [42а] приблизительно на 7з уменьшает интенсивность паразитного фона и значительно увеличивает контрастность и разрешение интерферограмм. Достигается это тем, что импульс света продолжительностью до 6 мкс образуется только в тот момент времени, [c.302]

Липопротеиды плазмы неоднородны и могут быть разделены на ряд классов. Наиболее распространенными и надежными методами фракционирования липопротеидов плазмы являются ультрацентрифугирование и электрофорез. [c.369]

Ультрацентрифугирование давно уже считается классическим методом определения молекулярных весов полимеров, поскольку позволяет получить полную кривую распределения по молекулярным весам, а также различные средние величины молекулярных весов. Химики-полимерщики тем не менее довольно часто относятся скептически к полученным в ультрацентрифуге данным в связи с трудностями проведения экспериментов и сложными проблемами интерпретации результатов измерений при использовании неидеальных растворителей для полимеров. Последние достижения в конструировании ультрацентрифуг, развитие методики эксперимента и теоретических основ метода ультрацентрифугирования в значительной мере повысили интерес к этому методу. В настоящее время методы ультрацентрифугирования уже успешно применяют для относительно подробного исследования определенных полимерных систем. В данной главе рассмотрены главным образом те методы седиментационного анализа, которые оказываются полезными при определении степени неоднородности образцов полимеров. [c.216]

В седиментационном анализе можно проводить два типа экспериментов. При анализе методом скоростной седиментации проводят определения скорости оседания и диффузии частиц при бioльшиx скоростях вращения ротора, тогда как при анализе методом седиментационного равновесия выжидают установления равновесия между процессами седиментации и диффузии в процессе центрифугирования при меньших скоростях вращения ротора. Теоретически неоднородность распределения по молекулярным весам в образце можно охарактеризовать с помощью обоих указанных методов, получая методом скоростной седиментации распределение по коэффициентам седиментации, а методом седиментационного равновесия — распределение по молекулярным весам. Распределение по молекулярным весам легче интерпретировать хими-ку-полимерщику, не имеющему специальной подготовки. Было показано, что детализированный характер распределения по коэффициентам седиментации можно получить методом скоростной седиментации в отсутствие дополнительных предположений о форме кривой распределения. Такие дополнительные предположения, как правило, необходимы при анализе методом седиментационного равновесия. Скоростное ультрацентрифугирование приобрело, следовательно, наиболее широкое распространение при исследовании неоднородности распределения но молекулярным весам полученные этим методом данные обычно комбинируют с результатами других измерений, преобразуя кривую распределения по коэффициентам седиментации в кривую распределения по мол екулярным весам, в ряде случаев более подходящую для целей исследования. Метод седиментационного равновесия применяется в основном в качестве способа определения абсолютных величин средних молекулярных весов, но применение этого метода для растворов в смешанных растворителях ультрацентрифугирование в градиенте плотности), как недавно было показано, позволяет оценить распределение полимера по плотности. [c.216]

Изучение полидисперсности образцов представляло собой одну из первостепенных задач применения метода ультрацентрифугирования [23, 24]. Наложение внешнего силового поля ультрацептрифуги на набор неоднородных молекул растворенного веш ества вызывает разделение компонентов растворенного веш,ества в соответствии со скоростями седиментации их. Методы, используемые в большинстве экспериментов для анализа нолидис-персности, можно разделить на два общих типа [c.227]

В целях упрощения расчетов выше принималось, что коэффициент диффузии мошет не зависеть от концентрации. В действительности же подобное положение выполняется в определенных пределах только в условиях идеальных растворителей [16]. Во всех других случаях имеет место более или менее выраженная зависимость коэффициента диффузии от концентрации. Определение параметров диффузии становится более сложным в связи с концентрационной зависимостью, поскольку кривая градиента концентрации становится асимметричной по отношению к начальной границе. Следовательно, теперь уже нельзя получить степень неоднородности по параметрам диффузионной кривой, измеренным только при одной концентрации. Отношения Оп/Оаг В11В2 и В21Вг должны определяться по измерениям при нескольких концентрациях с последующей экстраполяцией к бесконечному разбавлению. Аналогичные операции проводят при определении молекулярных весов методами ультрацентрифугирования и диффузии. Если не учитывать больший разброс величин, полученные в предыдущих разделах уравнения остаются справедливыми для экстраполированных средних значений коэффициентов диффузии. [c.258]

При исследовании химической неоднородности может также оказаться полезным анализ методом ультрацентрифугирования. При ультрацентрифугировании в течение 150 час при 33 500 об1мин раствора сополимера акрилонитрила с винилацетатом в среде диметилформамид — бромоформ в кювете ультрацентрифуги наблюдали появление трех раздельных зон, обусловленных макромолекулами с различной степенью разветвленности. Этим же методом удается разделить в среде бензол — бромоформ атактический и стереорегулярный полистирол [28]. [c.302]

Применяемые интерферометрические схемы можно разбить на два типа. К первому относятся те, где наблюдается интерференция двух световых пучков, разделенных в направлении, перпендикулярном направлению Vn (рис. VH.5, о). Один из пучков проходит при этом через кювету с исследуемым раствором, а другой — через аналогичную эталонную кювету, наполненную растворителем. В интерферометрах этого типа форма интерференционных полос соответствует распределению п (или концентрации) в кювете. В интерферометрах второго типа разделение пучков происходит в направлении, параллельном dn/dx (рис. VU.5, б), и тогда форма контура интерференционной полосы определяется соотношением величины разделения пучков и ширины области перехода от С = О до С = Со. К первому типу относятся схемы, использующие интерферометры Жамена и Рэлея, а ко второму — интерферометры Лебедева, Брингдаля и Бейтельшпахера. Отметим также, что интерферометры второго типа менее чувствительны к оптическим неоднородностям, возникающим в окнах кюветы при ультрацентрифугировании, так как в этих интерферометрах световые пучки разделены на меньшую величину. [c.161]

Эта довольно простая картина осложняется неоднородностью в содержании как белка, так и железа. Содержащиеся в небольших количествах компоненты, обнаруживаемые при ультрацентрифугировании [22, 23, 25] и при гель-электрофорезе [51- 3], были идентифицированы как мономер, димер, тример и т. д., причем содержание мономера составляло 80—90% от массы всего препарата [22, 23, 41, 49]. Биологическое значение этого полимера не выяснено. Неоднородность ферритина и апоферритина наблюдали также посредством изоэлектрического фокусирования [54, 55]. По-видимому, она не связана с содержанием железа или полимера, а, возможно, обусловлена изменениями в ацетильной, амидной, ионизированной карбоксильной или других присоединенных группах или ионах. Средняя изоэлектрическая точка ферритина лошади 4,4. Кроме того, недавно было показано, что ферри-тины из различных органов одного и того же животного имеют [c.304]

Получение белков в кристаллическом виде не всегда еще 1 арантирует выделение индивидуальных белков, так как иногда несколько близких друг к другу по своим свойствам белковых веществ кристаллизуются вместе с образованием кристаллов общей для них формы. В этих случаях кристаллические белки представляют собою смеси или комплексы, состоящие из нескольких индивидуальных белков. Так, например, установлено, чтс> кристаллический миоген, выделенный из мышц, включает несколько индивидуальных белков. Неоднородными по своему химическому составу ока зались кристаллический р-глобулин молока и некоторые иные препараты кристаллических белков. Неоднородность состава препаратов кристаллических белков устанавливается физико-химическими методами (например, методом электрофореза, ультрацентрифугированием), а также изучением их биологических особенностей. Так, например, установлено, что кристаллический миоген обладает активностью нескольких ферментов. Учитывая специфичность действия ферментов, следует считать, что кристаллы мио-гена представлены не одним всего, а несколькими индивидуальными белками. [c.35]

Если не считать предварительных работ, проведенных с медноаммиачными растворами целлюлозы [100], то первое точное исследование линейных высокополимеров методом ультрацентрифугирования было проведено на кристаллической, хорошо фракционированной поли-<о-оксидекановой кислоте Кремером и Лансингом в 1932 г. [101]. Седиментационное равновесие, скорость седиментации и диффузия раствора этого веш,ества в тетрабромэтане в низкоскоростной ультрацентрифуге дали средневесовой молекулярный вес 27 ООО в хорошем соответствии со среднечисленным молекулярным весом 25 200, определенным титрованием конечной карбоксильной группы. Считая реальным это различие молекулярных весов, можно принять, что коэффициент неоднородности р фракции был равен приблизительно 0,4. [c.552]