Ионообменная хроматография в мочевине

Ионообменная хроматография родственных мочевине соединений [II] [c.303]

Этот метод основан на образовании множества электростатических связей между заряженными группами пептида и несущими противоположный заряд ионогенными группировками поверхности ионита. Благодаря амфотерному характеру пептидов в этом методе можно использовать катиониты или аниониты. Единственным ограничением является слабая растворимость пептидов в той или иной области pH. Если же смесь пептидов вообще не растворяется в обычных буферных растворах, то применяют буферы с высокой концентрацией мочевины или солянокислого гуанидина. Применение летучих буферных растворов в ионообменной хроматографии позволяет миновать стадию обессоливания. Б настоящее время ионообменная хроматография пептидов полностью или частично автоматизирована, а метод стал настолько универсальным, что позволяет разделить практически любую смесь пептидов. [c.389]

Значительное улучшение разделения олигонуклеотидов и низкомолекулярных полинуклеотидов может быть достигнуто ионообменной хроматографией в присутствии мочевины для устранения образования вторичных связей [569]. [c.366]

Оказалось, что основные свойства ионообменной хроматографии проявляются как при использовании концентрированных растворов мочевины, так и при работе с обычными буферными растворами. На стр. 109 описано разделение цепей А и В инсулина на колонке с дауэкс 50-Х2 — в 8 УИ растворе мочевины. Коуль [32] хромато- [c.231]

ИОНООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ В ПРИСУТСТВИИ МОЧЕВИНЫ 85 [c.85]

Исходный гибридный белок вначале был очищен с помощью ионообменной хроматографии в присутствии 8 М мочевины, а затем — с помощью гель-фильтрации в присутствии 5 М гуанидинхлорида (табл. 4.10). Несколько других примеров использования такого подхода можно найти в другой работе [30]. [c.123]

Пептиды, образованные при частичном гидролизе, могут быть разделены с помощью целого ряда методов, среди которых наиболее широко применяются гель-фильтрация, ионообменная хроматография и электрофорез на бумаге (гл. 5). Обычно только-часть пептидов можно получить в чистом виде с помощью одного-из этих методов смеси пептидов, полученные при разделении одним из методов, должны быть подвергнуты дальнейшему разделению другим методом. Очистка больших гидрофобных пептидов часто вызывает затруднения, но в подобных случаях с успехом применялись такие методы, как гель-фильтрация в водных растворах кислот (например, в 50%-пой уксусной или муравьиной кислоте) или в растворах мочевины или гуанидингидрохлорида (от 2 дО 8 моль/л). Благоприятным обстоятельством является доступность различных молекулярных сит, широко применяемых на практике для очистки пептидов (табл. 5.6). [c.182]

П. ХРОМАТОГРАФИЯ НА РАЗНЫХ СОРТАХ ИОНООБМЕННОЙ БУМАГИ В ОТСУТСТВИЕ МОЧЕВИНЫ [c.16]

Подвижная фаза (элюент) в том виде ионообменной хроматографии, который нас будет интересовать, всегда в основе своей водная. Главные ее физические параметры — pH, концентрация и природа растворенных солей. Определенную роль могут играть добавки органических растворителей, изменяющие полярность и диэлектрическую проницаемость элюента. Для подавления неспецифических взаилюдействий вещества с материалом матрицы в элюент могут быть внесены мочевина, детергенты и др. [c.249]

Довольно успешно ионообменную хроматографию применяют и для фракционирования белков рибосом. Большинство этих белков также имеет щелочной характер, но они крупнее гистонов, поэтому здесь предпочтение отдается СМ-целлюлозе. Белки рибосом весьма склонны к агрегации, что заставляет вести их хроматографическое фракционирование в присутствии 6 М мочевины. [c.311]

Хюбнер и др. [98] разделяли глютенины после восстановления и алкилирования (Я -глютенины) гель-фильтрацией на сефадексе G 200 (0,03М уксусная кислота, 4М мочевина) на три фракции (А, В, С) равной величины, из которых первая (А) обнаружена в агрегированной форме. Две неагрегированные фракции (В, С) были повторно фракционированы ионообменной хроматографией на сульфоэтилцеллюлозе. В таких условиях фракция В разделяется на 7 фракций, из которых некоторые, хотя состоят из нескольких субъединиц с разными молекулярными массами, при электрофорезе в кислом pH ведут себя как гомогенные. Аналогичные результаты получены [89] при фракционировании на сефадексе G 100. Данно и др. [58] добивались аналогичного разделения путем. избирательного осаждения субъединиц этанолом. Для фракционирования субъединиц глютенинов используются также гель-фильтрация и ионообменная хроматография после избирательного растворения в уксусной кислоте [127]. [c.200]

Для выяснения аминокислотной последовательности полипептидных цепей денатурированный мочевиной глобин подвергали частичному расщеплению трипсином [49]. Полученные таким образом пептиды разделяли ионообменной хроматографией [50, 51]. Было выделено двадцать семь триптических пептидов — тринадцать пз а-депи и четырнадцать из р- цепи. [c.129]

Гиддингс [264] предложил применять высокое давление элюента ДЛЯ сорбента с малыми размерами частиц (диаметр порядка микрона). Гамильтон [268] успешно применил набивку с частицами малых размеров для ионообменной хроматографии. В 1969 г. Киркланд [270] за несколько минут разделил гербициды, группы мочевины на колонке, заполненной носителем с диаметром частиц 30 мкм, давление на входе в колонку составляло 219 атм, а при скорости потока—1,14см /мин. [c.169]

Важное значение, по-видимому, имеет степень чистоты выделенного полипептида, поскольку примеси могут препятствовать процессу ренатурации. В этом плане целесообразно выделить нерастворимые включения, так как в данном случае возможна очистка полипептидов в присутствии некоторых растворителей до их ренатурации. Ионообменную хроматографию можно проводить в присутствии мочевины, даже при еб концентрации 8 М. Гуанидинхлорид несет электрический заряд и мешает процессу ионообменной хроматографии, но не препятствует гель-фильтра-ции., Методы ЖХВД и высокоскоростной жидкостной хроматографии (ЖХВС, р.1.с) могут быть использованы для очистки полипептидов в присутствии ряда растворяющих агентов, приведенных в табл. 4.13 в частности, ЖХВД можно использовать для систем, содержащих органические растворители. Другие методы, использовавшиеся для очистки полипептидов перед их ренатурацией, — это высокоскоростное центрифугирование [30] и экстракция органическими растворителями [31]. [c.120]

Для отделения ДСН можно также использовать ионообменную хроматографию в 6М мочевине (Weber, Kuter, 1971). В раствор, содержащий комплекс белка с ДСН, добавляют сухую мочевину до концентрации 6М или проводят диализ против 50 мМ трис-ацетатного буфера с pH 7,8, содержащего 10 мМ 2-меркаптоэтанол и 6М мочевину. Затем раствор наносят на небольшую колонку с Дауэкс 1-Х2, уравновешенную тем же буфером. Один миллиметр смолы может связать до 100 мг ДСН. Мочевина удерживает белок в растворенном состоянии и ослабляет взаимо- действие между белком и детергентом. Полноту удаления ДСН из раствора определяют качественной реакцией с концентриро- [c.116]

В настоящее время хроматографические методы в значительной степени вытеснили все другие методы фракционирования липидов в аналитическом и микропрепаративном масштабе. Для разделения сложных смесей липидов на отдельные классы соединений использовали адсорбционную и распределительную хроматографию на колонках с силикагелем, на целлюлозных фильтрах, импрегнированных силикагелем, и на бумаге из стекловолокна. Распределительная хроматография с обращенными фазами использовалась для разделения членов винилогомологического ряда на гидрофобизованной колонке или на гидрофобизованной бумаге. Газовую хроматографию использовали в виде распределительно-хроматографического варианта в первую очередь для разделения метиловых эфиров жирных кислот. Разделение смеси липидов по степени ненасыщенности можно осуществить путем хроматографического разделения на силикагеле комплексных ртутноацетатных соединений ненасыщенных липидов. Для выделения кислот и для фракционирования сильно полярных липидов была использована ионообменная колоночная и ионообменная бумажная хроматография. Методом хроматографии на колонках с мочевиной или на бумаге, пропитанной мочевиной, можно отделить жирные кислоты с прямой цепью от кислот с разветвленной цепью. Эффект разделения основан на образовании соединений включения неразветвлеиных жирных кислот с мочевиной. Разли шые хроматографические методы разделения липидов описаны в многочисленных обзорах [23, 86, 96, 100]. [c.144]

ХТС липидов на ионообменниках еще пока не описана. Можно полагать, что ионообменная ХТС может оказаться весьма полезной при фракционировании сильно полярных липидов. Для осуществления подобных разделений, вероятно, пригоден ионофорез в тонких слоях и хроматография и ионофорез в тонких слоях (см. стр. 32). Перспективна также хроматография на Т01ШИХ слоях мочевины или других веществ, способных образовать соединения включения. Вероятно, на слоях мочевины можно отделить неразвет- [c.180]