Денситометрия, использование в количественной ТСХ

Количественная хроматография в тонком слое с использованием денситометрии [c.276]

КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ В ТОНКОМ СЛОЕ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДЕНСИТОМЕТРИИ [c.79]

Существенный недостаток количественных методов анализа тонкослойных хроматограмм, основанных на измерении пропускания света, был связан с нелинейной зависимостью сигнала оптического детектора от количества вещества в хроматографическом пятне. Эта нелинейность обусловлена специфическим законом прохождения света в рассеивающей среде, описываемым уравнением Кубелки — Мунка, и неоднородностью пластины по толщине слоя адсорбента. Последнюю можно учесть, измеряя оптические свойства подложки непосредственно в хроматографическом пятне. Использование двухволнового метода спектрофотометрического детектирования, когда излучение одной волны Л поглощается и веществом, и адсорбентом, а другой волны Лг — только адсорбентом, позволяет выделить сигнал, связанный с поглощением излучения только анализируемым веществом. Дальнейшая обработка сигнала детектора в соответствии с уравнением Кубелки — Мунка позволяет линеаризовать зависимость оптического сигнала от количества вещества в ТСХ. Поглощение света адсорбентом может быть учтено также при спектрофотометрическом сканировании пластины на просвет и отражение. Эти принципы реализованы в лучших современных зарубежных денситометрах — флуориметрах. Менее точным, но более простым решением является линеаризация зависимости сигнал — вещество с помощью двойного логарифмирования (с использованием ЭВМ). В результате этих усовершенствований воспроизводимость результатов в современной количественной ВЭТСХ приближается к 1%. Использование двухкоординатного сканирования в случае эллипсовидных пятен (двумерное размывание зон в ТСХ) и многошагового сканирования пятен неправильной формы (дву- [c.370]

Существуют два способа использования денситометра при количественном анализе. Согласно первому, [c.47]

Особенно эффективны электрофоретические методы исследования биополимеров с использованием количественной оценки состава электрофоретических спектров белков и их комплексов с помощью денситометров. В настоящее время существует достаточно обширный ассортимент денситометров, в состав которых [c.75]

В институте геохимии и аналитической химии им. В. И. Вернадского АН СССР проведен микрохимический анализ магнитной фракции космической пыли (масса 3— 10 мкг) с удачным использованием метода тонкослойной хроматографии для разделения компонентов и денситометрии для их количественного определения. Сорбентом служил очищенный надлежащим образом силикагель марки КСК в качестве подвижного растворителя использовали перегнанный ацетон или смесь 99 мл ацетона и 1 лсл 3 н. НС1. Средняя относительная ошибка при надежности 0,95 составляет для железа +22, никеля +15, кобальта +9%. Авторы этого исследования [1451 считают, что простота метода, быстрота выполнения, четкость разделения дают возможность рекомендовать его для проведения серийных анализов при изучении состава космической пыли. [c.187]

Метод измерения интенсивности окраски является значительно более точным, нежели все предыдущие способы. Сущность метода состоит в том, что между концентрацией вещества в растворе и интенсивностью окраски пятна в проявленной хроматограмме имеется пропорциональная зависимость, которая может быть использована в количественном анализе. Измерение интенсивности окраски проводят путем прямого фотометрирования интенсивности окраски всего пятна или только его максимально окрашенного участка с помощью специально приспособленного к измерению плотности окраски денситометра. Этот метод впервые был использован в работах Блока и Булла [c.135]

При фотографировании следует применять соответствующие светофильтры. Последующий количественный анализ выполняют или путем измерения площади пятен, или денситометрическим методом. При использовании денситометрии существенно, чтобы отпечатки имели достаточно низкую контрастность, или, другими словами, нужно работать в линейной области на кривой зависимости плотности от времени экспозиции, избегая область недодержек и передержек. [c.39]

Количественное определение анилина в воздухе производственных помещений методом тех с использованием денситометрии [ ] [c.291]

Хроматографические методы анализа применяют в основном к экстрактам полимеров. Для разделения экстрактов широко используют все виды жидкостной хроматографии. Доминирующим хроматографическим методом определения стабилизаторов до настоящего времени остается тонкослойная хроматография (ТСХ), благодаря малой продолжительности анализа, высокой чувствительности метода, несложности оборудования и возможности одновременного анализа многих компонентов, которые могут быть разделены в одном хроматографическом процессе. Распространению метода способствовал промышленный выпуск готовых пластинок. Хотя основную ценность этот метод имеет для идентификации добавок, он позволяет получать и количественные результаты, причем не с меньшей точностью, чем другие хроматографические методы. Количественное определение можно проводить после снятия пятен с пластинки и экстракции их полярным растворителем или непосредственно на пластинке с использованием сканирующих денситометров. [c.245]

По окончании хроматографического разделения возможны различные способы идентификации и определения концентрации компонентов анализируемой смеси от непосредственного визуального их обнаружения (как с использованием процедуры предварительной обработки соответствующим химическим реагентом, так и без нее), до точных количественных измерений с помощью сканирующих денситометров [363, 364, 382-384]. [c.390]

В современной сканирующей денситометрии с использованием ВЭТСХ-пластинок величина относительного стандартного отклонения за счет всех ошибок (воспроизводимость нанесения пробы, хроматографических условий, результатов измерений) может быть не выше 2%, что делает ее надежным методом количественного анализа. [c.397]

Автоматические денситометры используются при таксономическом исследовании микроорганизмов (с использованием электрофоретических методов анализа), которые характеризуются большим объемом информации, требующей быстрой и точной интерпретации. Достоверность количественной оценки электрофореграмм, получаемой с помощью автоматических денситометров, определяется интеллектуальными способностями вычислительной системы, сопряженной с анализатором. Роль вычислительных устройств в системах обработки могут играть различные варианты интеграторов, микропроцессоры и ЭВМ. [c.76]

Согласно второму способу использования денситометра, зону сканируют повторно, причем путь сканирующего луча каждый раз слегка смещают [6]. Повторное сканирование продолжают до тех пор, пока но максимальной высоте пика над линией фона не находят максимума оптической плотности зоны. Эта высота пика, как и площадь зоны, пронорцнональна логарифму концентрации вещества в зоне (рис. 7.), Однако для количественного анализа высота пика служит гораздо более точным параметром, который может быть использован для определения значительно меньших количеств вещества в зоне. Незначительное перекрывание зон на хроматограммах, не приводящее к изменению максимальной плотности в центре зоны, не влияет на высоту пика. Лучше всего использовать этот метод в сочетании с одномерными хроматографическими системами, где зоны соответствующих компонентов стандартных растворов и исследуемой пробы [c.48]

Количественные сравнения с разно11 степенью точности осуществляют многими способами. Во-первых, образцы могут быть просто рассортированы в порядке улели-чепия активности путем визуального сравнения. Этим методом можно осуществить и нолуколичественное определение, если серию источников известной активности экспонировать одновременно или если со всех образцов спять несколько радиоавтографов за различное время. Ранее уже было показано, что У 2 серий шкал времени экспозиции со стандартным отклонением между 3 и 5% получены визуальным подбором [6]. При помощи такой серии пленок было найдено, что денситометр дает стандартное отклонение 1%, т. е. такое значение, которое обычно получают при использовании счетчика. [c.249]

Сущность метода. Количественное определение с использованием ТСХ может быть выполнено аналитическим методом после количестйенного экстрагирования исследуемого вещества из снятого с пластины пятна, а также непосредстбенно на пластине при помощи денситометрии, спектрофотометрии или флуориметрии. Хотя по техническим причинам первый способ пока признан более точным, йесомнен-ным преимуществом второго является легкость и быстрота выполнения. [c.291]

Ниже описывается метод количественного определения анилина на тонком слое силикагеля с использованием денситометрии после проявления пятен диа-затпрованием. В качестве денситометра используется установка, созданная па базе микроскопа, снабженного точечным зондом. [c.291]

Сложные эфиры гидролизовали концентрированной серной кислотой до высших спиртов с последующей их дегидратацией в ненасыщенные соединения, которые с -днметиламинобензаль-дегидом образуют окрашенные продукты реакции. Для этого пластинку опрыскивали 0,5 %-ным раствором п-диметиламинобензальдегида в смеси концентрированной серной кислоты с диэтиловым эфиром (1 1) и снова выдерживали в сушильном шкафу при 130—150 °С 5—10 мин. На сероватом фоне появлялись красно-бурые пятна пластификаторов. Количественное определение проводили по измерению площади пятен. При использовании денситометров погрешность определения снижается с 10 до 5%- Чувствительность такого проявителя по отношению к сложным эфирам 0,5—4 мкг. [c.257]

В сочетании с другими методами и при использовании прибо- / ров этот метод иногда позволяет быстро получить воспроизводимые результаты. Так, после проявления пятен на хроматограмме окрашенные зоны компонентов можно количественно охарактеризовать денситометрическим методом. С его помощью измеряется суммарная функция площади пятна и его интенсивность менее чем за 10 мин, однако в этом случае необходим прибор. Метод включает сканирование конечного пятна на хроматограмме пучком света. Отраженный или прошедший свет попадает на фотоумножитель, и разность в интенсивностях прошедшего и отраженного света измеряется по электрическому сигналу и записывается в виде хроматографических кривых, как при элюировании с колонки. Хроматограммы сканируют на двухлучевом саморегистрирующем и интегрирующем денситометре Хромоскон . Количество вещества определяют по градуировочным графикам, построенным в координатах высота пика — масса вещества в пятне. Массу вещества в пятне получают измерением площади под хроматографической кривой с использованием интегратора. Чтобы уменьшить ошибку, которая может составить 1,7— 2,8%, необходим тщательный подбор проявляющих реагентов интенсив- [c.125]

Описан метод количественного анализа зон непосредственно на тонкослойной хроматограмме путем использования теории рассеяния и поглощения света слоем сорбента [189]. Метод предусматривает применение монохроматического пучка света для двумерного облучения зоны вещества на хроматограмме, использование вычислительной машины для обработки данных. Для работы применен модифицированный денситометр Хромоскан . [c.111]

На основе указанного метода нами был сконструирован двухкоординатный микроабсорциометр — флюориметр с точечным световым зондом [27], который позволял на одномерных хроматограммах (где форма хроматографических пятен более правильная) проводить количественный анализ с использованием денситометрии (ДНФ-аминокислот) и флюоресценции (ДНС-аминокислот) с точностью 2% для количеств соответственно и моля [25]. Используя подобный прибор, Варшавский и Спи-вак [28] разработали количественный анализ полной смеси аминокислот в виде их ДНС-производных на основе двумерной микротонкослойной хроматографии. При этом айторы достигли чувствительности анализа моля при точности 5%. При денситометрии хроматографических пятен неправильной формы неплохие результаты могут быть получены с помощью многократного параллельного сканирования точечным свето- [c.144]

Полле и др. [682] описали метод микроанализа липидов мозга, основанный на двумерной ТСХ, с использованием многократного элюирования. Первичный экстракт липидов сначала подвергали тех в системе хлороформ — метанол — вода (35 15 2), что позволяло разделить липиды на фракции, содержащие соединения различных классов. Однако исключение составляли фосфатидилхолины, фосфатидилсеринь и фосфатидилинозиты, образующие одну фракцию. Это же относится и к смеси ганглиозидов и протеолипидов, которые также составляют одну фракцию. Последующая хроматография во втором направлении в двух элюирующих системах хлороформ — метанол (1 4), а затем хлороформ — метанол (2 1) и, наконец, повторная хроматография в первом направлении в системе хлороформ — метанол (2 1) позволяла разделить остальные компоненты. Разделенные зоны на хроматограмме окрашивали иодом и проводили количественную опенку с помощью химических методов. Такое определение можно проводить, не превращая фосфат в неорганический фосфор [683, 684]. Широко практикуется карбонизация липидов с последующей денситометрией [681, 685, 686], однако методы требуют стандартизации [687, 688]. [c.205]

Фотографии можно анализировать с помощью денситометрии. Фесслер и Бейли [379] показали, что существует прямая пропорциональная зависимость между количеством нанесенного белка и площадью соответствующего ему пика на денситограмме. И хотя этот метод во многих отношениях лучше непосредственной денситометрии, следует учитывать, что линейные отношения сохраняются лишь в ограниченном диапазоне концентраций и зависят от природы красителя и использованного метода окрашивания, а также от свойств фотоматериалов. Поэтому справедливость линейных отношений совершенно необходимо проверять при тщательно контролируемых условиях, используемых для количественных определений. [c.199]

Окрашивание белков быстрым зеленым F F (пищевой зеленый 3, .I. 42053), по-видимому, имеет преимущества при их количественной денситометрии в полиакриламидном геле [453]. Гели погружают на 2 ч в раствор, содержащий 1% (масса/ объем) быстрого зеленого в 7% -ной уксусной кислоте. Обесцвечивание фона проводят путем повторных промываний электрофореграмм 7%-ной уксусной кислотой. Для цилиндрических гелей диаметром 6 мм линейная зависимость между площадью пика на денситограмме и количеством нанесенного белка сохраняется вплоть до 150—200 мкг. Показано, что по своей чувствительности данный метод сравним с методами, основанными на использовании амидового черного. Он позволяет обнаруживать 1—3 мкг белка в одной полосе. Быстрый зеленый пригоден для количественного определения гистонов после их электрофореза в полиакриламидном геле [856]. [c.273]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология