Хроматограммы двухмерные

Для разделения аминокислот, образовавшихся в результате гидролиза полипептида, еще Э. Фишер предложил использовать фракционную вакуумную перегонку их эфиров. Этот метод требует сравнительно большого количества вещества. В самое последнее время он, однако, вновь становится очень актуальным, так как газовая хроматография позволяет разделить ничтожные количества смеси эфиров аминокислот. Широкое применение для разделения смесей аминокислот нашла за последние годы бумажная хроматография. Если требуется определить качественный состав смеси аминокислот, то проводят двухмерное хроматографирование на листе бумаги и проявляют хроматограмму нингидрином, причем каждая аминокислота дает окрашенное пятно. [c.384]

По приведенным ниже значениям Rf для двух растворителей построить двухмерную хроматограмму. Какие из указанных веществ не разделяются при одномерном хроматографировании с использованием двух растворителей Какие вещества пе разделяются методом двухмерной хроматографии [c.221]

Так как в разных растворителях коэффициенты Rf различны, то это обстоятельство используется для получения двухмерных хроматограмм сложных смесей неорганических соединений. Г. Д. Елисеева [71 ] при анализе смеси катионов третьей аналитической группы последовательно применяла в качестве подвижных фаз в одном направлении— ацетон, содержащий 5% воды и 8% соляной кислоты (пл. 1,19), а в перпендикулярном направлении — пиридин, содержащий 40% воды. [c.178]

ЛЮ в центр пятна. Двухмерная хроматограмма (табл. 5.5) позволяет проводить идентификацию даже сложных смесей с близкими значениями Я/. [c.113]

Рис. 8.38. Камера для получения восходящих одномерной (а) и двухмерной (б) хроматограмм

Рис. 16. Двухмерная хроматограмма смеси аминокислот после проявления нингидрином.

Построение двухмерного спектра с отображением на оси ординат, кроме жидкостной хроматограммы, полученной с помощью УФ детектора, химических сдвигов, полученных методом ЯМР, позволяет определить степень олигомеризации каждого компонента эпоксидной смолы в процессе ее отверждения. [c.267]

На рис. 26 и 27 показаны примеры обычной и двухмерной хроматограммы. На обычной хроматограмме показан результат четырехчасового разделения смеси лантана, неодима и празеодима в качестве растворителя применяли смесь ацетона и эфира (1 1), содержащую роданистоводородную кислоту. Проявление выполнялось пульверизацией ализарином или ксиленоловым оранжевым. [c.58]

Еще лучшего разделения компонентов сложных смесей удается достичь при помощи двухмерной хроматографии. В этом случае также применяют не полоски фильтровальной бумаги, а прямоугольники с длиной стороны примерно 300—500 мм. Исследуемый раствор наносят вблизи одного из углов прямоугольника и хроматограмму проявляют дважды сперва одним растворителем, а затем, после высушивания и поворота на 90°,—другим. [c.302]

Разделение сложных смесей лучше всего осуществлять способом двухмерной хроматограммы. В этом случае сначала при помощи растворителя А развивают хроматограмму в одном направлении, затем бумагу высушивают и обеспечивают движение растворителя В в перпендикулярном к первому направлению. [c.522]

Примеры обычной и двухмерной хроматограммы показаны на рис. 46. [c.166]

Рис. 2. Поперечный разрез ванночки с держателями для двухмерной хроматограммы.

Рис. 11.74. Двухмерная хроматограмма, полученная с применением опгико-акустического детектора (л), и хроматограмма той же смеси, полученная с гфн-менением пламенно-ионизационного детектора (б) Состав смеси

Рис. 5. Диагра.мма двухмерной хроматограммы, показывающая ожидаемое положение аминокислот в растворителях 2) фенол + О,3 /0 КНз, 2) 5-коллидин.

Выполнение двухмерной хроматограммы. На лист фильтровальной бумаги, размером 45 X 55 с.м, наносят каплю гидролизата объемом 10—25. мл, содержащую не. меньше 0,2—0,3 мг белка. Каплю по.мещают вблизи одного угла бумаги, на расстоянии 5—б см от обеих сторон. Бу.магу помещают в ванночку, укрепляют в ней тонкой стеклянной пластинкой, которая немного длиннее бумаги, и устанавливают в камере (рис. 2) в ванночку заливают первый растворитель, и камеры плотно закрывают. Когда растворитель пройдет нужное расстояние (35—45 см за 20—30 час.), бумагу вынимают из камеры широкими щипцами (нельзя прикасаться к бумаге пальцами, так как они оставят след, который обнаружится после проявления бу.маги нингидрином) и высушивают в сушильном шкафу при 110° до полного удаления растворителя. Сухая бумага поворачивается через правый угол на 90°, и теперь уже другая ее сторона, по которой распределены аминокислоты, погружается во второй растворитель. За время сушки бумаги от первого растворителя камера должна быть подготовлена для второго растворителя, если не имеется целого ряда камер, используе.мых только для одного растворителя. [c.396]

После того как и второй растворитель продвинется на нужное расстояние (через 24—72 час.), бумагу вынимают из камеры, вторично высушивают и проявляют 0,1% раствором нингидрина в водонасыщенном -бутилово.м спирте. На полученной двухмерной хроматограмме каждая аминокислота занимает положение, определяемое ее структурой (характером функциональных групп, длиной углеродной цепи, формой цепи и Др.). Ниже приводится фотография (рис. 7) двухмерной хроматограммы гидролизата шерсти. [c.396]

Если положение какой-либо аминокислоты на двухмерной хроматограмме вызывает сомнение, то для ее идентификации к гидролизату добавляют предполагаемую аминокислоту. В случае идентичности обеих аминокислот получают усиление сомнительного пятна. Проявление хроматограммы реактивами, специфическими для отдельных аминокислот, также дает возможность идентифицировать нх более точно. [c.396]

Хроматограммы проявляют в системе бутиловый спирт — пропионовая кислота — вода (2 1 1,4) в одном направлении и в системе фенол, насыщенный водой, в другом направлении. Другие методы одно- и двухмерного хроматографического разделения органических кислот описаны Лаггом [2]. Расщепление янтарной кислоты описано Вудом [3], а также Бенсоном и Фаре-сом (см. синтез С -этилендиамина). [c.126]

Методы разделения с применением тонкослойной хроматографии иногда могут быть усовершенствованы путем многократного хроматографирования (хроматограмме дают высохнуть и вновь хроматографируют в той же системе), непрерывного хроматографирования (подвижная фаза непрерывно испаряется с верхнего края поверхности адсорбента) или двухмерного хроматографирования (хроматограмме дают высохнуть, повопачивают под прямым углом и затем вновь хроматографиоуют, часто в иной системе растворителей, чем та, что была использована первоначально). Юднако интерпретировать результаты хроматографии, если используются такие процессы промежуточного высушивания, надо с осторожностью, так как во время хроматографирования на пластинке может происходить разрушение вещества, например вследствие окисления. Методика двухмерной хроматографии имеет особую ценность для заключения о химических изменениях, происходящих в процессе хроматографирования. Если смесь вначале хроматографируют в одном направлении, а затем под прямым углом в той же системе растворителя, пятна, соответствующие разделенным веществам, будут лежать на пластинке по диагонали при условии, что не возникнет никаких артефактов. [c.95]

Еще более точные результаты получаются при помощи так называемой двухмерной хроматографии на бумаге. Для этого варианта применяют не полоски фильтровальной бумаги, а прямоугольники размером примерно 400x500 мм. Каплю исследуемого раствора наносят вблизи одной из вершин прямоугольника, а хроматограмму проявляют дважды различными растворителями, например фенолом и коллидином, сперва одним растворителем, а затем, после поворота на 90°,—другим. [c.234]

Рнс. 102. Конкретный пример двухмерной хроматограммы. Зарегистрирована прн использовании системы, показанной на рис. 98. 99 прп соответствии поло-жеипю, указанному на рис. 98. Образец элюировали первоначально в направлении I, а затем - в направлении II (слой силикагеля) в обоих случаях поток обеспечивался принудительно. Данные заимствованы из публикаиии [276]. [c.281]

Однако эти методы не всегда достаточно селективны, особенно при определении многоатомных соединений. Весьма эффективным в этом случае оказывается применение высокочувствительных ОА-детекторов в газовой хроматографии. На рис. 11.74, а приведена двухмерная хроматограмма, полученная с использованием перестраиваемого O -лазера (880—1080 см ) и Не— Ne лазера (2948 см" ). На рис. 11.74, б для сравнения приведена хроматограмма, полученная с использованием пламен-но-ионизащюнного детектора. Видно, что при 2948 см наблюдаются весьма интенсивные ОА-сигналы предельных углеводородов (пики 2, 3, 4, [c.327]

Двухмерная хроматограмма показывает разделение смеси десяти различных аминокислот. При хроматографировании в первом направлении дифференцирующим растворителем была смесь бу-танола и уксусной кислоты (3 1), а для второго направления — смесь фенола с водой (3 1). Хроматограмма проявлена нингид-рином. [c.58]

Метод хроматографии на бумаге впервые был применен для анализа смеси аминокислот (Мартин, Кондсен, Гордон, 1944 г.). В настоящее время известно большое количество методов, которые позволяют анализировать сложные смеси аминокислот. При этом используют различные растворители, различные методы проявления, одномерные и двухмерные хроматограммы и др. В данной работе предлагается один из наиболее простых методов разделения и определения смеси двух или трех аминокислот. [c.65]

Из табл. 1 видно, что некоторые пары или даже системы из трех аминокислот можно разделить на одномерной хроматограмме, выбирая соответствующий растворитель. Так, в первом растворителе легко разделить, например, смесь лизина, метионинсуль-фона и лейцина между тем во втором растворителе эта смесь будет плохо разделяться. Наоборот, смесь лизина и гистидина нельзя разделить первым растворителем, но можно разделить при длительном хроматографировании со вторым растворителем. Наконец, некоторые трехкомпонентные смеси нельзя разделить, пользуясь только одномерной хроматограммой. Так, нельзя разделить указанными растворителями смесь тирозина, метионина и лейцина. В первом растворителе будут подниматься вместе тирозин и метионин, а во втором растворителе — метионин и лейцин. Названную смесь трех компонентов можно разделить при двухмерной хроматограмме. Можно также применять и другие растворители. [c.66]

Рпс. 28. Двухмерная хроматограмма смеси аминокислот, полученной при гидролизе шерсти. 1 — осаждение гидролизата 2 — цистин 3 — аспарагиновая кислота 4 — глутаминовая кислота в — серип 6 — глицин 7 — треонин 8 — аланин Я — тирозин 10—валин 11—лизин 12—фенилаланин —аргинин 14—пролин 15—лейцин 16—изолейцин 17— метионин. [c.420]

Были проведены некоторые разделения белковых молекул с помощью хроматографии на бумаге, хотя, как правило, разделение происходит плохо, с перекрывающимися полосами. Франклин и Квостел [43], используя для проявления хроматограмм буферные водные растворы солей, разделили смесь папаина и казеина с помощью двухмерного метода. Эти исследователи в качестве индикатора использовали гемин. Присутствие комплекса белок — гемин на бумаге легко можно обнаружить с помощью-реактива бензидин — перекись водорода. Было показано, что сыворотка человека содержит от 6 до 10 фракций белка. [c.332]

Были использованы и другие экспериментальные приемы. Вильямс и Кирлей 2 упростили метод, предложив способ восходящей хроматограммы, когда растворитель перемещается снизу вверх иод действием капиллярных сил. Важный метод двухмерной хроматограммы был описан Консденом, Гордоном н Мартином . После получения хроматограммы в одном направлении бумагу высушивали и обеспечивали перемещение другого растворителя в перпендикулярном к первому направлении. Таким способом, использующим преимущества двух последовательных разделений с двумя растворителями, удалось разделить смесь из 20 аминокислот. Раттер предложил способ круговой хроматограммы, в котором растворитель подается в центр круглого диска из фильтровальной бумаги. [c.562]

Использовались пластинки 13X18 см и 4X18 см для одномерной и ]ЗХ 13 СЛ1 для двухмерной ТСХ. Расстояние от старта до фронта 10—12 см. Индивидуальное вещество наносилось обычно в виде 1 Sonoro раствора в гексане (только сульфоксиды — в виде растворов в хлороформе). Смеси веществ наносились в соответственно большей концентрации. Время проявления хроматограмм от нескольких минут до получаса. Полученные данные см. в табл. 1. [c.84]

При работе с сульфидами и их производными целесообразно проверить устойчивость органического соединения серы в предполагаемых условиях хроматографии. Одним из методов, позволяющих во многих случаях получить на это ответ, является двухмерная ТСХ. На несколько стеклянных пластинок размером 13X13 см наносят слои адсорбента толщиной 0,5 мм. На один из углов каждой пластинки одновременно впитывают исследуемый образец органического соединения серы и также одновременно элюируют все пластины (в условиях движения образца). После этого одну из пластин тотчас же подвергают элюированию в направлении, перпендикулярном первому. Остальные пластины перед повторным (двухмерным) хроматографированием выдерживают в течение различных промежутков времени. Если изменений вещества за время контакта не произошло, то, после проявления хроматограммы, пятна находятся на диагонали при изменениях образца пятна сходят с диагонали (часто появляются стартовые пятна). [c.86]

Двухмерная хроматография. Если имеется гидролизат белка, содержащий полный набор аминокислот, то на одномерной хроматограм.ме нельзя получить пятен, соответствующих всем присутствующим аминокислотам. Это объясняется тем, что еще не на 1ден растворитель, в котором все ам нокислоты имели бы различную скорость движения Яр ). При различных скоростях -Движения аминокислот в различных растзор телях применяются двухмерн.ые хроматограммы,. ча которых М0 к1 0 об1 арун ить почти все аминокислоты, присутствующие в п дролизате. Приступая к выполнению двухмерно хроматогра.ммы, выбирают [c.394]

Рис. 7. Двухмерная хроматограмма гидролизата шерсти (180 микрограмм) иа ватманской фильтровальной бумаге №1. Капля гидролизата помеи1ена в кружочек наверху. Движение в коллидине в направлении А/1 в течение 3 дне "1, затем движение в феноле в направлении АС в течение 27 час. в атмосфере 0,3% КН (. Взято 0,3 мг белка. Желтое пятно пролгта ие видно на фотографии.

Авторы дают таблицу величин, которые оказываются немного ниже соответствующих нисходящих Яр. Стеклянный цилиндр пригоден также н для выполнения двухмерной хроматограммы. В этом случае употребляется квадратный лист бу.маги (30 см- или больше). Исследуемый раствор помещают в углу листа на расстояни 3 см от обоих краев бумаги. Лист свертывают в трубку, скрепляют проволокой и опускают в цилиндр или кувшин подходящего размера, где налит первый растворитель. После высушивания лист свертывают в другом направлении погружают в новый цилиндр, с другим растворителем, после чего следуют обычная обработка бумаги и проявление. Как указывают авторы, восходящая хроматограмма значительно чище нисходящей . Однако эта модификация ни в какой мере не снижает значения основного метода [9]. В частности, недостатком метода является невозможность насыщения атмосферы кислотами Л 1 основаниям . ЧТО очень важно для лучшего разгона аминокислот. [c.400]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология