Хроматографирование двухмерное

Для разделения аминокислот, образовавшихся в результате гидролиза полипептида, еще Э. Фишер предложил использовать фракционную вакуумную перегонку их эфиров. Этот метод требует сравнительно большого количества вещества. В самое последнее время он, однако, вновь становится очень актуальным, так как газовая хроматография позволяет разделить ничтожные количества смеси эфиров аминокислот. Широкое применение для разделения смесей аминокислот нашла за последние годы бумажная хроматография. Если требуется определить качественный состав смеси аминокислот, то проводят двухмерное хроматографирование на листе бумаги и проявляют хроматограмму нингидрином, причем каждая аминокислота дает окрашенное пятно. [c.384]

По приведенным ниже значениям Rf для двух растворителей построить двухмерную хроматограмму. Какие из указанных веществ не разделяются при одномерном хроматографировании с использованием двух растворителей Какие вещества пе разделяются методом двухмерной хроматографии [c.221]

Восходящая Нисходящая Радиальная Двухмерная Вертикальное в сосуде То же Горизонтальное Вертикальное в сосуде Снизу вверх Сверху вниз От центра к периферии Сначала в одном направлении после высушивания повторное хроматографирование в направлении, перпендикулярном первоначальному [c.112]

Для лучшего разделения соединений с близкими значениями R , а также для увеличения часто проводят хроматографирование в нескольких (обычно двух) системах растворителей, пропуская второй растворитель в том же направлении, что и первый. Это приводит к уплощению пятен разделяемых соединений в направлении, перпендикулярном пропускаемому растворителю, и способствует их лучшему разделению. Более полное разделение аминокислот и пептидов достигается при двухмерной хроматографии (второй растворитель пропускают в направлении, перпендикулярном первому) или при сочетании хроматографии (одно направление) и электрофореза (второе взаимно перпендикулярное направление). Последний метод носит название метода пептидных карт или отпечатка пальцев . [c.126]

При необходимости достигнуть лучшего разделения анализируемых смесей веществ методами хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента можно применять специальные приемы хроматографирования — повторное и двухмерное. [c.105]

При двухмерном хроматографировании повторное пропускание той же или иной подвижной фазы осуществляют в направлении, перпендикулярном направлению первоначального движения. Двухмерное хроматографирование целесообразно осуществлять на квадратных пластинках или листах бумаги. Анализируемая проба при этом наносится на диагональ квадрата вблизи одного из его углов. [c.105]

Двухмерную хроматографию с использованием одной и той же подвижной фазы часто применяют для проверки устойчивости веществ в условиях хроматографирования. Устойчивые вещества образуют пятна, лежащие только на диагонали пластинки или листа бумаги. [c.105]

Рис. 194. Справочная схема расположения пятен аминокислот и родственных соединений при двухмерном хроматографировании на бумаге и проявлении, водным фенолом и смесью бутанола, уксусной кислоты и воды

Оказалось вполне достаточным, чтобы фронт растворителя продвинулся по бумаге на расстояние 20—25 см, для чего требовалось около полутора часов. Уже через 20 мин. хроматографирования картина вполне определялась. Двухмерные хроматограммы белков могут быть получены за 5 час. В качестве второго растворителя также использовались различные буферные растворы. Например, в первом измерении производится хроматографирование с буферным раствором цитрат-КаОН, а во втором измерении — с буферным раствором фталат-КаОН, или тартрат-КаОН, или ацетат-НС1. Для второго измерения люгут применяться 1—5%-ные растворы солей или органических кислот. [c.160]

Для идентификации простых пептидов применяются те же методы получения хроматограмм, что и для аминокислот. Простые пептиды наиболее целесообразно вымывать из хроматограмм, затем дезаминировать их, подвергать гидролизу и, наконец, идентифицировать полученные продукты повторным хроматографированием. Для этого готовят параллельно две двухмерные хроматограммы, из которых одну обрабатывают нингидрином обычным путем, а вторую тем же нингидрином, разбавленным 1 10. При этом на второй хроматограмме проявляется положение только наиболее интенсивных пятен, остальные же пятна, полученные на первой хроматограмме, можно интерполировать по положению более интенсивных. [c.158]

Важно иметь в виду, что при изготовлении фильтровальной бумаги, включая и бумагу для хроматографии, волокна бумаги располагаются, главным образом, в одном направлении, что приводит к большей скорости движения жидкости в этом направлении, чем в перпендикулярном. Поэтому для получения хорошо воспроизводимых и сравнимых результатов нужно всегда брать бумагу, нарезанную в одном и том же направлении. В случае двухмерной хроматографии (см. ниже) следует всегда соблюдать одинаковую последовательность в выборе первого и второго направления хроматографирования. [c.287]

При количественных определениях исследуемый раствор наносят на бумагу калиброванной капиллярной пипеткой. Разделение происходит путем переноса компонентов растворителем на разные расстояния, после чего их присутствие устанавливают при помощи соответствующих реактивов в виде отдельных пятен. При двухмерном способе, непосредственно после первого хроматографирования, прямоугольный лист бумаги поворачивают на 90° и повторяют хроматографирование с другим растворителем в направлении, перпендикулярном к обработке первым растворителем. При таком способе эффект разделения значительно повышается. Для этого простого и изящного метода анализа были предложены самые разнообразные способы выполнения. [c.895]

В сочетании с хроматографией ТСЭ очень удобен для двухмерных разделений, когда после электрофореза в перпендикулярном ему направлении проводят хроматографирование. Такой метод, известный под названием метода отпечатков пальцев , дает неоценимую возможность охарактеризовать гидролизаты белков и нуклеиновых кислот. Тонкослойные носители, подобные тем, которые описаны выше, используются и для разделения при высоких напряжениях. [c.122]

Методы разделения с применением тонкослойной хроматографии иногда могут быть усовершенствованы путем многократного хроматографирования (хроматограмме дают высохнуть и вновь хроматографируют в той же системе), непрерывного хроматографирования (подвижная фаза непрерывно испаряется с верхнего края поверхности адсорбента) или двухмерного хроматографирования (хроматограмме дают высохнуть, повопачивают под прямым углом и затем вновь хроматографиоуют, часто в иной системе растворителей, чем та, что была использована первоначально). Юднако интерпретировать результаты хроматографии, если используются такие процессы промежуточного высушивания, надо с осторожностью, так как во время хроматографирования на пластинке может происходить разрушение вещества, например вследствие окисления. Методика двухмерной хроматографии имеет особую ценность для заключения о химических изменениях, происходящих в процессе хроматографирования. Если смесь вначале хроматографируют в одном направлении, а затем под прямым углом в той же системе растворителя, пятна, соответствующие разделенным веществам, будут лежать на пластинке по диагонали при условии, что не возникнет никаких артефактов. [c.95]

Повторное хроматографирование заключается в том, что после завершения первого хроматографирования пластинку или бумагу высушивают и подвергают повторному пропусканию той же или иной подвижной фазы в том же направлении. При двухмерном хроматографировании повторное пропускание той же или иной подвижной фазы осуществляют в направлении, перпендикулярном направлению первоначального движения. Двухмерное хроматографирование целесообразно осуществлять на квадратных пластинках или листах бумаги. Анализируемая проба при этом навосится на диагональ квадрата вблизи одного из его углов. [c.215]

Двухмерная хроматограмма показывает разделение смеси десяти различных аминокислот. При хроматографировании в первом направлении дифференцирующим растворителем была смесь бу-танола и уксусной кислоты (3 1), а для второго направления — смесь фенола с водой (3 1). Хроматограмма проявлена нингид-рином. [c.58]

Из табл. 1 видно, что некоторые пары или даже системы из трех аминокислот можно разделить на одномерной хроматограмме, выбирая соответствующий растворитель. Так, в первом растворителе легко разделить, например, смесь лизина, метионинсуль-фона и лейцина между тем во втором растворителе эта смесь будет плохо разделяться. Наоборот, смесь лизина и гистидина нельзя разделить первым растворителем, но можно разделить при длительном хроматографировании со вторым растворителем. Наконец, некоторые трехкомпонентные смеси нельзя разделить, пользуясь только одномерной хроматограммой. Так, нельзя разделить указанными растворителями смесь тирозина, метионина и лейцина. В первом растворителе будут подниматься вместе тирозин и метионин, а во втором растворителе — метионин и лейцин. Названную смесь трех компонентов можно разделить при двухмерной хроматограмме. Можно также применять и другие растворители. [c.66]

При работе с сульфидами и их производными целесообразно проверить устойчивость органического соединения серы в предполагаемых условиях хроматографии. Одним из методов, позволяющих во многих случаях получить на это ответ, является двухмерная ТСХ. На несколько стеклянных пластинок размером 13X13 см наносят слои адсорбента толщиной 0,5 мм. На один из углов каждой пластинки одновременно впитывают исследуемый образец органического соединения серы и также одновременно элюируют все пластины (в условиях движения образца). После этого одну из пластин тотчас же подвергают элюированию в направлении, перпендикулярном первому. Остальные пластины перед повторным (двухмерным) хроматографированием выдерживают в течение различных промежутков времени. Если изменений вещества за время контакта не произошло, то, после проявления хроматограммы, пятна находятся на диагонали при изменениях образца пятна сходят с диагонали (часто появляются стартовые пятна). [c.86]

Проявление тонкослойных или бумажных хроматограмм может осуществляться путем восходящего, нисходящего, горизонтального или радиального движения растворителя. При восходящей хроматографии ослол непия, связанные с образованием каналов при движении растворителя, сводятся к минимуму. При непрерывном проявлении растворитель продвигается до конца бумаги или тонкого слоя в одном опыте. При многократном проявлении после того, как фронт растворителя достигает края листа, растворителю дают испариться и повторяют проявление при том же направлении движения растворителя. Ступенчатое проявление включает проявление на пластинке в неполярном растворителе, испарение растворителя и второе проявление в более полярном растворителе. При двухмерном проявлении также последовательно применяют два растворителя сначала проводят хроматографирование в одном направлении, затем высушивают пластинку для испарения первого растворителя, поворачивают пластинку на 90° и проводят проявление вторым растворителем. При градиентном элюировании состав растворителя меняется в ходе проявления [94]. Эта методика, однако, сложна, в ней теряется простота тонкослойной или бумажной хроматографии. [c.553]

Если в полифосфорной кислоте необходимо определить наличие кислот кольцевого строения (тримета-, тетрамета-, гексаметафор-мы и т. д.), прибегают к двухмерной хроматографии. Этот способ хроматографирования отличается от описанного выше тем, что для получения хроматограммы применяют примерно квадратный лист бумаги, в одном углу которого на пересечении осей координат (рис. -5) аносят каплю исследуемого вещества. [c.211]

В 1951 г. Дата и Харрис [114] опубликовали сообщение, в котором говорится, что моча кошек и оцелотов содержит вещество, дающее нингидринную реакцию. Это вещество было изучено Весталлем [115]. Было установлено, что на двухмерных хроматограммах на бумаге в системах фенол — аммиак и коллидин — лутидин оно перекрывается лейцином и изолейцином. Одномерным хроматографированием с использованием грет-б-утилового спирта удается получить индивидуальное пятно, которое после обработки перекисью водорода уже нельзя обнаружить на прежнем месте. Казалось вероятным, что имеют дело с новой аминокислотой, содержащей серу в таком случае исчезнование пятна объяснялось бы окислением этой аминокислоты до сульфоксида или, что более вероятно, до сульфона. В соответствии с этим было изучено поведение в аналогичных условиях ряда аминокислот. [c.79]

Для разделения препарата используют двухмерную хроматографию. Сначала пластинку помещают горизонтально в камеру для хроматографирования, в-которую налита смесь ацетона и гексана (1 5). Когда фронт растворителя поднимется на всю высоту пластинки, ее вынимают из камеры и сушат на воздухе. После испарения растворителя с.тева от пятна пробы на расстоянии 0,5 см наносят стандартные растворы препарата. Пластинку помещают в круглую хроматографическую камеру со смесью растворителей гексана и этилацетата (3 1). После того как фронт растворителя поднимется на высоту 13 см, пластинку вынимают и сушат. Когда растворитель испарится, пластинку опрыскивают проявляющим реактивом и помещают на 5 мин в сушильный шкаф при температуре 30°С. Затем пластинку опрыскивают 5%-ньш раствором уксусной кислоты. Абат проявляется в виде синих пятен на светло-желтом фоне. Величина при использовании стеклянных пластинок с силикагелем КСК — 0,54, а при использовании пластинок Силуфол /1/254 —0,31. [c.78]

Когда еще не было приборов для двухмерного электрофореза (по Гроссу), удовлетворительные результаты получали сочетанием электрофореза с хроматографией. Диксон и др. [15] проводили электрофорез при pH 3,6 с последующим хроматографированием на бумаге в другом направлении с растворителем н-пропанол—пирофосфатный буфер. Лист бумаги ватман № 3 Т-образной формы с размерами, указанными на фиг. 23, свертывают до горизонтальной части т. Последнюю увлажняют с обоих концов буфером пиридин — уксусная кислота, pH 3,6, и проводят электрофорез при 1500 в в течение 20 мин. Диксон и др. применяли прибор Михля с жидким теплоносителем, но столь же успешно может быть использован прибор для электрофореза между горизонтальными пластинами. В последнем случае, прежде чем приступать к разделению, концы горизонтальной части Т, находившиеся в контакте с бумажными фитилями, следует отрезать. При pH 3,6 кислые аминокислоты (глутаминовая, аспарагиновая и цистеиновая) разделяются основные дают одно общее пятно, а нейтральные — другое. Если использовать для хроматографии систему П — Э — ФФ Хейнса и др. (см. [c.52]

По способу хроматографирования различают восходящую, нй xoдяп yю, круговую, градиентную и двухмерную хроматографии. [c.364]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология