Конъюгат АТР с антигеном

Получение конъюгатов антигенов (антител) с субстратами [c.196]

Ш Ферментный конъюгат Антиген из образца [c.150]

Последовательный анализ. Образец наносят на фильтр и затем добавляют избыток конъюгата [антиген—фермент]. [c.299]

Конкурентный анализ. Образец предварительно смешивают с конъюгатом [антиген—фермент]. Аликвоту такой смеси наносят на фильтр, покрытый антителами. [c.299]

Образование высокомолекулярных конъюгатов, содержащих много молекул белка и полимера-носителя, нежелательно, так как они могут быть токсичны, быстро поглощаются ретикуло-эндотелиальной системой, а белок (фермент) в них труднодоступен для высокомолекулярных субстратов. Возможно также появление у таких конъюгатов антигенной специфичности. Существующие методы позволяют в определенной мере контролировать процесс сшивания макромолекул полимера-носителя с белком и друг с другом путем изменения концентрации взаимодействующих групп, дезактивации непрореагировавших групп полимера-носителя после реакции с белком, использования для связывания белка таких его функциональных групп, которых [c.160]

АТ — иммобилизованные антитела АГ — определяемый антиген АТ—Е — конъюгат антител с ферментной меткой [c.319]

АГ — иммобилизованный антиген АТ — определяемые антитела АЛТ—Е — конъюгат антивидовых антител с ферментной меткой [c.320]

АГ — иммобилизованный антиген АТ—Е — конъюгат антител с ферментной меткой [c.322]

При анализе содержания в образце антител определенной специфичности можно использовать так называемый белок А из стафилококка, который обладает специфическим сродством к константной части антител в комплексе с их антигенами или гаптенами. Образование комплекса антиген — антитело регистрируется после удаления избытка антитела по взаимодействию конъюгата белка А с детектируемой меткой, например пероксидазой. [c.258]

Для того чтобы продемонстрировать принцип иммуноферментного анализа, приведем результаты анализа иммуноглобулина, специфичного к вирусу клещевого энцефалита (ВКЭ) в сыворотке крови пациентов. Этот показатель является очень важным как минимум по двум аспектам. Применительно к человеку, укушенному клещом, результат анализа показывает, достаточно ли устойчив человек к энцефалиту. А в случае использования крови здоровых доноров этот показатель свидетельствует о тйм, содержит ли кровь достаточное количество антивирусных антител, для того чтобы быть использованной для приготовления антивирусного иммуноглобулина. Последний может быть использован для введения человеку, укушенному клещом, для предотвращения развития инфекции. Известно, что поверхностный вирусный белок Е является основным антигеном ВКЭ. Этот белок можно достаточно прочно сорбировать на поверхности полистироль-ной пробирки. Если взять его в избытке, достаточном для количественного связывания антител к белку Е в образце, последние будут сорбированы практически полностью. После удаления образца добавляется конъюгат стафилококкового [c.258]

Конъюгат SB бычьего у-глобулина Антиген [c.288]

С другой стороны, анализ на1эснове меченых антигенов сопряжен с рядом сложностей. Разнообразие строения и физико-химических свойств антигенов препятствует созданию универсальных методов получения антигенферментных конъюгатов. Схема введения метки в один антиген часто оказывается неприемлемой при переходе к другому. По существу, синтез большинства конъюгатов антигенов с ферментами представляет собой самостоятельную задачу, сложность которой возрастает по мере уменьшения молекулярной массы и растворимости антигена. [c.100]

Конъюгаты антигенов (антител) с субстратами нашли широкое применение в хеми- и биолюминесцентных системах детекции. [c.196]

В люминесцентном иммунокофакторном анализе (ЛИКА) используются конъюгаты антигенов и антител с кофакторами АТР и NAD. Общая схема синтеза конъюгатов состоит в модификации кофактора введением СООН-группы с последующим ковалентным связыванием ее с молекулой антигена (или антитела). Ниже при- [c.198]

Принцип разделения компонентов в анализе с применением микрокапсулированных антител основан на том, что продиффун-дировавший внутрь капсулы и связавшийся с антителами меченый антиген теряет способность переходить обратно в раствор вследствие ограниченного размера пор. Как следует из принципа разделения, микрокапсулирование для целей анализа не является универсальным подходом. Эффективное применение таких препаратов антител возможно только при использовании в анализе низкомолекулярных антигенов, меченных небольшими по размерам метками (изотоп, кофактор), что обеспечивает свободную диффузию конъюгата антиген — маркер внутрь капсулы. [c.212]

В ИФА титрование активных центров антител часто проводят конъюгатом антиген — фермент, в котором часть детерминант может быть экранирована маркером. В этом случае следует учитывать, что из числа доступных активных центров определяется концентрация только тех, которые специфичны к неэкранировай-ным антигенным детерминантам конъюгата. [c.218]

Вполне успешно использовавшийся для определения гаптенов гомогенный иммуноферментный анализ значительно реже применяли для определения антител. Недавно описаны такие методики для определения антител к лекарственным препаратам [29]. Цель разработки заключалась в упрошении существующих методик определения антител при сохранении требуемой чувствительности. Метод основан на ингибировании ферментативной активности конъюгата антиген-фермент определяемыми антителами, а в качестве фермента применяли глюкозо-б-фосфатдегидрогеназу (СбРВ) [c.217]

Ферментативную активность измеряли амперометрическим определением скорости окисления NADH на платиновом электроде. Возможности методики были продемонстрированы на примере модельной системы лидокаин-антитела к лидокаину, калибровочная кривая которой получена вплоть до ианограммовых количеств антител. Абсолютная чувствительность анализа зависит от начального количества конъюгата антиген-фермент. Показано, что возможное загрязнение платинового электрода, обусловленное адсорбцией белков, и перекрестные реакции антител практически не влияют на результат анализа. [c.217]

И конъюгат [антиген—индикаторный фермент] смешивают перед нанесением на фильтр. Субстрат добавляют так же, как и при последовательном анализе, и оценивают активность фермента по развитию окраски в центре фильтра. Конкурентный вариант анализа удобен для определения высоких концентраций тестируемых компонентов, с которыми приходится сталкиваться, например при анализе терапевтических лекарственных препаратов. Кроме того, конкурентный режим анализа можно использовать при определении тироксина, для чего предварительно необходимо вытеснить его из комплекса с соответствующими тироксинсвязывающими белками. [c.299]

Антиген выполняет роль первого сигнала при активации деле ний лимфоцитов. Это действие антигена удается имитировать с пс мощью антител к 1 -рецепторам на В-клетке и к ТР на Т-клетк( Для активации лимфоцита нет необходимости в проникновени лиганда (антигена или антитела, специфичного к рецептору) ил комплекса лиганд — рецептор внутрь клетки, активация осуществ ляется на внешней клеточной мембране. Ее с успехом можно вы -звать с помощью лигандов, ковалентно присоединенных к твердой фазе. Примером могут служить конъюгаты антигенов или антител с шариками сефарозы, сефадекса или волокнами целлюлозы. [c.50]

Во многих случаях, особенно при бактериальных инфекциях, иммупогенная детерминанта имеет полисахаридный характер. Выделение или синтез повторяющихся фрагментов таких полисахаридов представляет собой сложную задачу. Для получения искусственных или синтетических антигенов с детерми-нантными группами олигосахаридного характера повторяющиеся фрагменты полисахаридов связывают (обычно через вставку ) с белком или синтетическим полимером, причем структура ни одного из сахарных остатков не должна быть нарушена. Показано, что конъюгаты антигенного олигосахарида сальмо-. неллы с белком вызывают образование антител и защиту против инфекции этими бактериями [227, 228]. Синтетические [c.147]

Были исследованы защитные свойства конъюгатов антигенов сальмонелл с синтетическими полиэлектролитами. Мышей однократно иммунизировали конъюгатами ПАК или С-АК-ВП с Н-антигеном и полисахаридом О-антигена Salmonella typhymurium в дозах 1—625 мкг. Спустя 2 недели всех животных заразили вирулентным штаммом этой же бактерии в дозе [c.217]

Рабочие титры антител определяют в реакции ИФА методом шахматного титрования с использованием сэндвич -метода ИФА. Суть метода заключается в использовании подложки , т. е. слоя неспецифически сорбированных иммуноглобулинов, с которыми затем взаимодействует специфический антиген. Этот антиген в дальнейшем выявляется с помощью конъюгатов антител с ферментной меткой. Схема сэндвич -метода представлена на рис. 38. 96-луночный микропланшет заполняют раствором антител в концентрации 10 мкг/мл по 100 мкл в лунку и оставляют на ночь при 4 С. На следующий день после 3-кратного отмывания фосфатным буфером с твином-20 (с. 321) титруют положительный антиген по короткому ряду микропланшета, так же титруют отрицательный антиген . После инкубации в течение 1 ч при 37° С и последующего 3-кратного отмывания в таких же условиях титруют конъюгат антител в буфере по длинному ряду микропланшета. [c.319]

Рабочим титром конъюгата считается такое его разведение, которое в случае АБТС дает ярко-зеленое окрашивание с положительным антигеном, тогда как с отрицательным антигеном окращива11ие должно быть сопоставимо с окраской субстратной смеси. При этом должно выявляться минимальное количество положительного антигена. При спектрофотометрическом анализе рабочим титром конъюгата бу дет разведение, дающее в положительном контроле 1,5—1,2 опт. ед., а в отрицательном — не более 0,05 опт. ед. Если в положительном контроле значение оптической плотности будет ниже 1,2 опт. ед., использование такого конъюгата в работе нежелательно. [c.320]

Определение константы связывания. Используют метод радиоиммунного анализа (РИА). Постановка метода сходна с постановкой ИФА (с. 320), с тем исключением, что вместо конъюгатов антител с ферментной меткой для выявления связывания антител с антигеном используют антимышиные антитела с радиоактивной меткой. В каждую лунку вносят по 50—100 мкл антимышиных антител (10—30 нг около 20 000 срт). Инкубируют при комнатной температуре около 2 ч. Затем микропланшеты тщательно отмывают (с. 321), разрезают и индивидуальные лунки просчитывают в Y-счетчике. [c.324]

Наиболее распространенным иммунологическим методом является ELISA. Вкратце он состоит в следующем 1) фиксация образца на твердой подложке 2) добавление первого антитела, специфичного к антигену-мишени, и его связывание с антигеном-мишенью 3) добавление конъюгата второе антитело—фермент, который присоединяется к первому антителу 4) добавление неокрашенного субстрата, который под действием фермента, входящего в состав конъюгата, превращается в окрашенное соединение. Изменение цвета реакционной смеси свидетельствует о присутствии в образце моле-кулы-мишени. [c.201]

При создании комбинаторных библиотек вместо фага X можно использовать нитевидные бактериофаги М13 или fd (рис. 10.14). В этих случаях соответствующий фрагмент антитела синтезируется как часть химерного белка, локализованного на поверхности фаговой частицы. Скрининг комбинаторной библиотеки фрагментов антител можно провести при помощи ферментного иммуносорбентного анализа (ELISA). Суть метода состоит в следующем образцы (аликвоты) из библиотеки помещают в ячейки планшеты, содержащие антиген-мишень. Ячейки промывают, чтобы удалить несвязанные фаговые частицы. В каждую ячейку вносят конъюгат, состоящий из антитела, связывающегося с белком фаговой оболочки, и фермента. Ячейки промывают для удаления несвязанного конъюгата и добавляют в каждую из них хромогенный субстрат, который расщепляется ферментом, связанным с фагом, и окраши- [c.219]

Чрезвычайно широкий спектр применений имеет иммуноанализ для определения как самого факта присутствия, так и измерения количества антигенов, в том числе гаптенов, т.е. низкомолекулярных соединений, к которым можно получить антитела, как правило, путем иммунизации животных конъюгатом гаптена с высокомолекулярным носителем, способным вызывать иммунный ответ. Иммуноанализ нашел широкое применение для анализа содержания различных гормонов, что имеет огромное значение для оценки состояния эндокринной системы человека и животных. Важное значение для оценки состояния окружающей среды, в первую очередь качества питьевой воды и пищевых продуктов, приобретает иммуноанализ содержания пестицидов. В связи с интенсивным развитием гибри-домной техники для анализа определенных антигенов всё более широкое применение находят моноклональные антитела. [c.257]

В настоящее время в микробиологии чаще всего используется твердофазная модификация ИФА. Ее суть заключается в том, что вначале на каком-либо твердом материале сорбируют АГ (или АТ) и лишь после этого добавляют остальные ингредиенты серологической реакции (рис. 1.28). Определение неизвестных антител включает в себя следующие этапы 1) связывание известного антигена с пластиком лунки планшета 2) внесение испытуемой сыворотки 3) внесение конъюгата (меченой ферментом антиглобулино-вой сыворотки) 4) внесение хромогенного субстрата. Определение неизвестных антигенов состоит из таких этапов 1) связывание антител, специфичных для искомого антигена, с пластиком лунки планшета 2) внесение антигенсодержащего материала 3) внесение 2-х антител той же специфичности 4) внесение конъюгата (меченой ферментом антиглобулиновой сыворотки) 5) вне- [c.77]

В настоящее время разработаны иммунологические методы определения КБА. В этих методах для иммзшологической регистрации КБА, образующихся при появлении в нем канцерогенных веществ, используются антитела, полученные с помощью азопротеинов, содержащих канцерогенное вещество, присоединенное ковалентной связью к носителю белковой природы. При помощи иммунологических методов КБА обнаруживаются в биологических жидкостях в период инициации экспериментального канцерогенеза у животных, у больных с опухолями и у рабочих с профессиональным онкологическим риском. Образование КБА коррелирует с канцерогенезом, и поэтому они могут служить эффективными маркерами рака и онкологического риска. Однако следует отметить, что при иммунизации животных конъюгатами канцерогенов с белковыми носителями неизбежно индуцируются побочные антитела против общевидовых антигенов, что затрудняет интерпретацию результатов определения канцерогенов в биологических материалах. Побочные антитела ограничивают специфичность антисывороток к гаптенам (веществам, к которым вырабатываются антитела в организме), особенно при необходимости их регистрации в крови человека. [c.184]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология