Распределительная хроматография проявление хроматограммы

После заполнения колонки в нее осторожно приливают раствор анализируемого вещества (или смеси веществ) в подобранном растворителе. При адсорбционной и распределительной хроматографии исследуемый раствор должен занимать в колонке небольшой объем, покрывая поверхность носителя или адсорбента. При ионообменной хроматографии можно добавлять растворителя больше. После внесения хроматографируемой смеси приступают к проявлению хроматограммы, пропуская через слой адсорбента (нли [c.157]

Разновидностью распределительной хроматографии является хроматография на бумаге, широко используемая в биохимических лабораториях, в том числе клинических, для разделения пептидов, аминокислот и других веществ (рис. 1.4). В качестве стационарной фазы при этом служит вода, адсорбированная целлюлозными цепями фильтровальной бумаги. Образец помещают на одном конце бумажной полосы, этим же концом бумагу погружают в подходящую смесь органических растворителей (например, бутанол-уксусная кислота-вода в определенных соотношениях). При движении растворителя по бумаге благодаря силе капиллярности происходит разделение компонентов смеси. Проявленную хроматограмму высушивают, а местоположение каждого из разделяемых веществ определяют химическими или физико-химическими методами. [c.28]

В качестве носителя при распределительной хроматографии обычно применяют силикагель, реже крахмал или целлюлозу, т. е. адсорбенты полярного характера. Ясно, что в этих условиях неподвижной фазой должен быть растворитель более полярный, чем применяемый в качестве подвижной фазы в противном случае произойдет вытеснение растворителя из пор адсорбента. К сожалению, воду, являющуюся одним из наиболее полярных растворителей, далеко не всегда можно применять в качестве неподвижной фазы, так как в большинстве случаев органические вещества лучше растворимы в органических растворителях, чем в воде. Между тем желательно, чтобы коэффициент распределения адсорбируемого вещества между неподвижной и подвижной фазами был больше единицы, так как в этом случае при проявлении хроматограммы достигается лучшее разделение зон. [c.298]

Растворитель или растворители, служившие для проявления хроматограммы. В случае распределительной хроматографии указывается название подвижного растворителя. [c.228]

К бумажной хроматографии красителей обычно применимы закономерности распределительной хроматографии [1, 5]. Для проведения эксперимента необходимы подходящая хроматографическая бумага, система растворителей, камера для проявления хроматограмм, микропипетка и пульверизатор для опрыскивания реактивами с целью обнаружения бесцветных соединений. [c.70]

Одно из преимуществ метода пропитки адсорбента жидкостью после нанесения слоя адсорбента реализуется при двумерной хроматографии. В этом случае пропитку адсорбента проводят по окончании первого проявления хроматограммы. При этом адсорбент можно модифицировать таким образом, что он при втором элюировании приобретет новые адсорбционные характеристики и в результате улучшится разделение. Так, например, Кауфман и сотр. [451] вначале проводили обычное адсорбционное хроматографическое разделение в одном направлении, после этого пропитывали адсорбент на пластинке парафиновым маслом или ундеканом [452] и проводили в перпендикулярном направлении разделение методом распределительной хроматографии с обращенной фазой. Урбах [423] сначала проводил разделение на оксиде алюминия в одном направлении, далее пропитывал адсорбент 2-феноксиэтанолом и хроматографировал в перпендикулярном направлении. Бергельсон и сотр. [445] при разделении мононенасыщенных жирных кислот первое элюирование проводили на силикагеле, пропитанном додеканом, затем наносили на пластинку комплексообразователь (нитрат серебра) и элюировали еще раз в поперечном направлении. [c.99]

Как известно, первым листовым вариантом хроматографии явилась распределительная хроматография на бумаге, предложенная в 40-х годах для разделения смесей аминокислот [19]. В этом варианте, в котором, как и обычно, разделение является результатом различий в скоростях перемещения компонентов по сорбенту, разделяемые компоненты четко локализуются на хроматограмме после проявления ее специально подобранными реагентами. Природа компонента характеризуется при этом расположением зоны (часто уточняемым по положению зоны стандарта), а количество — размером пятна. Количество устанавливают более точно обычными химическими методами после десорбции компонентов с хроматограмм. В неорганическом анализе хроматография на бумаге оказалась полезной для определения состава смесей предельно близких по свойствам редкоземельных элементов, актинидов и металлов платиновой группы. Во всех этих системах эффективное хроматографическое разделение, как было показано, обусловлено процессом комплексообразования. [c.233]

Рис. 7. Камера (в разрезе) для бумажной распределительной хроматографии (а) и проявленная бумажная хроматограмма (б)

Хроматографическое разделение аминокислот на листах фильтровальной бумаги [78] и на колонках с картофельным крахмалом [2] происходит главным образом благодаря различиям в их распределительных и адсорбционных характеристиках. Эти различия вызывают вариации в распределении аминокислот между стационарной и подвижной фазами, что в свою очередь приводит к разным скоростям миграции вдоль хроматограммы. Применение для хроматографии аминокислот синтетических ионообменных смол расширило возможности разделения за счет использования их ионообменных свойств в дополнение к распределительным и адсорбционным эффектам. Все аминокислоты, найденные в белках, проявляют амфотерные свойства прежде всего за счет карбоксила и аминогруппы, присоединенных к а-углеродному атому. Присутствие дополнительных кислотных или основных групп в боковой цепи аминокислоты значительно меняет ионизационные характеристики и общий заряд молекулы нри данном pH. В результате изменения pH раствора, используемого для проявления хроматограммы, происходят характерные изменения суммарного заряда всех аминокислот. Это можно использовать в качестве эффективного и чувствительного способа контроля их относительных скоростей миграции. [c.136]

Как и при адсорбционной хроматографии, для проявления распределительных хроматограмм подбирают смесь растворителей, в которой и малоподвижные зоны тоже приходят в движение. Например, органические кислоты разделяют смесью бутилового спирта и хлороформа, непрерывно увеличивая содержание бутилового спирта в смеси. [c.77]

Проиускание раствора и проявление хроматограммы. В подготовленную воронку осторожно вносят раствор исследуемого вещества в подходящем растворителе. При адсорбционной и распределительной хроматографии раствор должен быть возможно более концентрированным и занимать объем, не превы- [c.73]

Разделение красителей методом распределительной хроматографии основано на использовании различной величины их коэффициентов распределения между двумя йесмешивающимися жидкостями. При проявлении хроматограммы образуются ярко окрашенные пятна составных компонентов, и состав красителя определяют по сопоставлению этих пятен со свидетелями . [c.303]

Разделение продуктов гидролиза проводят методом распределительной хроматографии со смесью бутанола, ацетона и воды (40 50 10). Для этого в стеклянный сосуд наливают растворитель так, чтобы закрыть дно. После того как желоб, закрепленный в верхней части сосуда, заполнится наполовину, закрытый сосуд оставляют на несколько часов для насыщения воздуха внутри сосуда парами растворителя. Только после этого лист бумаги помещают в сосуд, погрузив верхний край листа в желоб и придерживая его тяжелой стеклянной палочкой так, чтобы базисная линия находилась на 3—5 см ниже края желоба. Сосуд закрывают крышкой, и спустя 2—3 ч фронт растворителя должен пройти четверть бумажной полосы. (В зависимости от конструкции сосуда и желоба хроматограммы будут несколько различаться, поэтому оптимальное время распространения фронта растворителя можно установить, только повторяя опыт.) Бумагу вынимают и сушат на воздухе. Затем обрабатывают анилинфталатом и после сушки на воздухе в течение 10 мин ее помещают в сушильный шкаф при 100°С еще на 10 мин для проявления сахарида в виде фиолетово-коричневых пятен. [c.251]

Одним нз основных объектов хрОхматографии на бумаге явились с самого начала различные аминокислоты, пептиды и белки. На примере разделения аминокислот была разработана техника распределительной хроматографии отбор проб для анализа, получение и проявление хроматограммы, состав растворителей, и установлена определенная зависимость между структурой аминокислоты и их хроматографическими характеристиками при различном химическом составе и соотношении растворителей в их смеси. Было изучено разделение различных производственных аминокислот, комплексных соединений с катионами металлов, определение аминокислот в микробиологическом материале, после гидролиза, в растительном материале, в тканях животных, в крови, плазме, сыворотке крови, кровяных тельцах, моче, лимфе, эксудатах, спинномозговой жидкости, жидкости глазной камеры, желудочном соке, сперме, молоке, в органах, мускулах, в насекомых, животных, хромозомах, нуклеопротеинах, гисто-нах, протаминах, кератине, при различиях в группах крови и в других объектах. Хроматография помогла также при изучении энзиматических реакций и метаболизма аминокислот, галогени-рованных аминокислот и в других случаях. [c.202]

Пропускание раствора и проявление хроматограммы. В подготовленную воронку осторожно вносят раствор исследуемого вещества в подходящем растворителе. При адсорбционной и распределительной хроматографии раствор должен быть возможно более концентрированным и занимать объем, непревышающий 1/10 объема колонки. Если вещество плохо растворяется в подвижной фазе, его растворяют в другом подходящем растворителе, растирают с частью носителя и высушивают при разрежении. Пропитанный таким образом носитель суспендируют в небольшом количестве подвижной фазы и наносят слоем в верхнюю часть готовой колонки. [c.77]

В работе [51] описано онределение методом распределительной хроматографии на бумаге различных видов СПАВ алкил-арилсульфопатов, алкилсульфонатов, оксиэтилированных алкил-фенолов и моноэтаноламидов. В качестве подвижной фазы используют смеси изопропиловый спирт—вода—аммиак и бутиловый спирт—вода—аммиак. Для проявления хроматограмм используют нинокринтоновый желтый, бромкрезоловый зеленый, родамин В, иод, роданид кобальта. Разделение оксиэтилированных алкилфе-нолов по числу оксиэтильных групп выполняют методом колоночной хроматографии под давлением [52]. Содержание СПАВ в фракциях определяют по поглощению при 277 нм. Открываемый минимум 0,2 мгк в пробе при относительной ошибке 0,4%. [c.241]

Английские авторы при проявлении хроматограмм пропускают растворитель вниз по подвешенной бумаге. В последнее время предложена упрощенная модификация этого метода — так называемая восходящая хроматография [48]. Если в распределительной хроматографии используются радиоактивные производные аминокислот (например, л-иодфенилсульфонилпроизводные аминокислот, содержащие или то количество различных аминокислот можно определить по интенсивности излучения [149]. [c.30]

Подробно изучены хроматографические методы выделения 3-индолилуксусной кислоты и некоторых ее производных из растительных тканей [21—24, 38—54]. Чаще используется распределительная хроматография на бумаге, причем в качестве растворителя обычно берут смесь, содержащую изопропиловый спирт, 28%-ный водный раствор аммиака и воду в соотношениях 12 1 1 [21, 23, 45]. Для проявления хроматограмм предложены вышеупомянутые цветные реакции, применяемые при колориметрическом определении гетероаукснна. Образующиеся при этом пятна флуоресцируют и могут быть определены по их флуоресценции [50]. Вместо п-диметиламинобензальдегида, используемого при колориметрическом определении гетероауксина по Эрлиху, для проявления хроматограмм предложено применять также диметиламинокоричный альдегид [51]. С помощью хроматографии на бумаге можно количественно определять 3-индолилуксусную кислоту, для чего пятно смывают с хроматограммы метиловым спиртом и затем определяют количество 3-индолилуксусной кислоты колориметрически [53]. [c.579]

Большим преимуществом двухмерной распределительной хроматографии является возможность обнаружения больших количеств компонентов в исследуемой смеси. Например, на двухмерной хроматограмме, проявленной раствором нингидрина, отмечается положение шестидесяти различных веществ. Метод одномерной распределительной хроматографии был использован Г. А. Критским для обнаружения нуклеиновых оснований ами-лофосфазы (фосфорилазы), а также инозина. Т. А. Федорова и А. С. Коникова использовали этот метод для определения свободных аминокислот в различных органах и тканях. [c.163]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология