Обнаружение нуклеиновых кислот

Работа 53. Обнаружение нуклеиновых кислот [c.72]

Окрашивание белков обычно приводит к их денатурации и не позволяет получать точные количественные данные. В связи с этим были предприняты попытки выявлять белки и нуклеиновые кислоты по поглощению ими ультрафиолетового света. К тому же методы обнаружения нуклеиновых кислот в ультрафиолетовом свете, а белков по флуоресценции, как правило, более чувствительны, чем методы, основанные на связывании макромолекул с красителями. [c.181]

III.1.6. Обнаружение нуклеиновых кислот после электрофореза [c.383]

Описан быстрый метод окрашивания для обнаружения нуклеиновых кислот после их разделения в разбавленных полиакриламидных гелях [1209]. Гели погружают на 2 ч в смесь равных объемов 2%-ной уксусной кислоты и 90%-ного этанола, а затем переносят в 1%-ную уксусную кислоту, содержащую 0,3% толуидинового синего. Через 4 мин гели промывают 2%-ной уксусной кислотой, содержащей 10% глицерина. [c.385]

Чувствительность метода обнаружения нуклеиновых кислот в гелях с помощью бромистого этидия очень высока в гелях агарозы легко удается наблюдать полосы, содержащие 0,01 мкг ДНК, а в ПААГ — доли микрограмма. Рабочая концентрация водного раствора красителя при окрашивании нуклеиновых кислот в гелях составляет около 1 мкг/мл. В таком растворе гель вымачивают в течение 0,5—1 ч или же вводят бромистый этидий в рабочий буфер геля при его полимеризации. [c.150]

Ввиду сильного поглощения света растворами KI при Я.<280 нм для обнаружения нуклеиновых кислот обычно применяют бромистый этидий. Для качественного обнаружения полос нуклеиновых кислот можно использовать и экстинкцию при 285 нм (в этой области длин волн поглощение раствора KI резко падает). [c.269]

Пример 15-Ф. Флуоресцентная микроскопия. Многие флуоресцирующие хромофоры локализованы внутри клеток и могут быть обнаружены с помощью флуоресцентной микроскопии. Образец освещается светом с длиной волны возбуждения, и далее ведется наблюдение через фильтр, который задерживает возбуждающий свет и пропускает флуоресценцию. Акридиновый оранжевый связывается с нуклеиновыми кислотами и флуоресцирует в зеленой или оранжевой области в зависимости от того, связан он с ДНК или РНК соответственно. Это было использовано в случае эукариотов для обнаружения нуклеиновых кислот и хромосом и для обнаружения РНК в ядре в случае прокариотов — для локализации ДНК. (см. гл. 2 и рис. 2-19 и 2-21.) [c.446]

Нуклеиновые кислоты — высокомолекулярные биополимеры, обнаруженные во всех типах клеток. Структурными единицами нуклеиновых кислот являются мононуклеотиды, состоящие из гетероциклических азотистых оснований (пуриновых и пиримидиновых), пентоз и фосфорной кислоты. Нуклеиновые кислоты делятся на два типа рибонуклеиновые (РНК) и дезоксирибонуклеиновые (ДНК). РНК и ДНК различаются особенностями химического строения входящих в них пиримидиновых оснований и пентоз, локализацией в клетке и функциональным назначением в клеточном метаболизме. [c.161]

Необычайный интерес в последние годы вызвали РНК-содержащие онкогенные вирусы. Большинство исследователей, занимающиеся биохимической генетикой и функциями нуклеиновых кислот, считали, что ДНК образуется только за счет репликации других молекул ДНК- Если транскрибирование РНК с ДНК может протекать свободно, то обратный процесс, а именно образование ДНК на РНК-матрице, считался маловероятным. Большой неожиданностью поэтому оказалось обнаружение во многих онкогенных РНК-содержащих вирусах, и в том числе в вирусах, вызывающих у животных лейкоз, РНК-зави-симой ДНК-полимеразы (т.е. обратной транскриптазы). Этот фермент обнаруживается в зрелых вирусных частицах. Наиболее тщательно очищенный фермент вирусов миелобластоза птиц состоит из двух белковых субъединиц, имеющих мол. вес ПО ООО и 70 000, и содержит два атома связанного Zn +. Для функционирования фермента необходима короткая затравка и матричная цепь РНК. При этом сначала получается гибрид ДНК—РНК, из которого затем (вероятно, после гидролитического расщепления цепи РНК под действием РНКазы Н, разд. Д, 5, в) получается двухцепочечная ДНК. Таким образом, заражение РНК-содержащими вирусами сопровождается образованием [c.288]

Если хроматограмма предназначена для элюирования, то проведение хроматографирования зависит от способа обнаружения. В тех случаях, когда разделяемые вещества окрашены или имеют характеристическую флуоресценцию в ультрафиолетовом свете, пятна после определения их местонахождения на бумаге можно вымывать сразу. Так, компоненты нуклеиновых кислот, флавины и т. д. обнаруживают благодаря их отчетливой флуоресценции. Другие соединения, пятна которых при дневном освещении едва заметны, могут вызывать заметное тушение слабой флуорес- [c.476]

Сильное поглощение коротковолнового УФ-света неорганическим слоем уменьшает чувствительность обнаружения осколков нуклеиновых кислот.. Добавкой флуоресцирующего вещества к силикагелю Г или последующим опрыскиванием хроматограммы раствором флуоресцеина [98] (реактив №90в) можно несколько понизить нижнюю границу обнаружения этих соединений [73]. [c.444]

Молекулярно-биологическая диагностика — обнаружение в клиническом материале фрагментов нуклеиновых кислот вирусов-возбудителей с помощью зондов (гибридизация НК) или ПЦР. [c.259]

Современный уровень развития биотехнологии обусловлен общим прогрессом науки и техники, особенно — в течение последних 50 лет Достаточно отметить лишь такие события, как установление структуры и функций нуклеиновых кислот, обнаружение ферментов рестрикции ДНК и выявление их значения в жизни клеток с последующим использованием в генно-инженерных работах, создание гибридом и получение моноклональных антител, внедрение ЭВМ и компьютерной техники в биотехнологические процессы и т д [c.9]

Дезоксирибонуклеиновая кислота дает ряд цветных реакций, по которым ее можно отличить от рибонуклеиновой кислоты. Эти реакции обусловлены наличием в молекуле ядерной нуклеиновой кислоты дезоксирибозы. Для обнаружения дезоксирибонуклеиновой кислоты наиболее употребительна реакция с дифениламином С Нд—НН—СеНн. Дифениламиновый реактив дает с дезоксирибозой и [c.45]

Настоящая книга, издаваемая в серии научных трудов ВИР, освещает методы и методики по определению содержания нуклеиновых кислот в растительных тканях и препаратах. В ней также изложены — идентификация и количественный учет свободных нуклеотидов выделение нативных РНК и ДНК из растений фракционирование их на колонках определение нуклеотидного состава РНК и ДНК методами колоночной и бумажной хроматографии изучение свойств макромолекул нуклеиновых кислот, обнаружение их в клетке, цитофотометрия, определение состояния ДНК и РНК в клетке. [c.2]

Сердюк Л. С., Конарев В. Г. Обнаружение лабильной ДНК в хроматине клеточного ядра методом люминесцентного спектрального анализа. III научная конференция по нуклеиновым кислотам растений. Уфа, 1966. [c.24]

Обнаружение и количественное определение нуклеиновых кислот по пентозам [c.40]

Для гистохимического и цитохимического обнаружения нуклеиновых кислот в живых клетках (обзоры и монографии — см. ) используют обычно характерное УФ-поглощение нуклеиновых кислот и специфические цветные реакции, основанные на высвобождении восстанавливающих групп остатков 2-дезоксирибозы при мягком кислотном гидролизе (реакция Фельгена для ДНК) или на способности полинуклеотидов образовывать комплексы с основными красителями (реакция Браше для РНК люминесцентные методы, основанные на взаимодействии с акридиновым оранжевым). Весьма существенным признаком, который позволяет надел<но идентифицировать вещество, дающее упомянутые выше реакции на срезе ткани, как ДНК или РНК, является исчезновение характерного УФ-поглощения или цитохимической реакции после обработки среза препаратами нуклеаз — ферментов, катализирующих расщепле- [c.28]

В настоящее время метод остановленной струи широко приме-ляется для решения многих задач химической кинетики установление механизмов химической реакции, определение стадий, лимитирующих протекание реакции обнаружение промежуточных комплексов, определение кинетики ферментативных реакций, установление числа и концентрации активных центров фермента, изучение быстрых конформационны5( переходов в белках и нуклеиновых кислотах. Метод требует быстрой регистрации это единственное существенное ограничение его применимости. Особое внимание при применении метода остановленной струи необходимо уделять тер-мостатированию, так как разница в температурах в кювете наблюдения и растворе смеси реагентов может привести к большим оптическим ошибкам, затрудняющим установление механизма наблюдаемой реакции. Точность определения констант скоростей данным методом примерно такая, как и при обычных спектрофотометрических измерениях кинетики химических реакций. [c.28]

В Советском Союзе молекулярная биология имела свою предысторию с серьезными научными заделами и традициями. Первые конкретные идеи о матричном механизме воспроизведения макромолекулярных хромосомных структур как носителей наследственности были высказаны еще в 1928 г. Н. К. Кольцовым. В 1934 г. в Московском государственном университете им. М. В. Ломоносова на кафедре биохимии растений под руководством А. Р. Кизеля были начаты исследования нуклеиновых кислот. Эти работы затем возглавил его ученик А. Н Белозерский, трудами которого была доказана универсальность распространения ДНК в живом мире и связь количественного содержания нуклеиновых кислот в клетках с интенсивностью роста и размножения. К моменту официального рождения молекулярной биологии в 1953 г., когда Дж. Уотсоном и Ф. Криком был сформулирован принцип структуры и воспроизведения ДНК, у нас в стране существовала собственная школа специалистов по нуклеиновым кислотам, готовая воспринять тенденции развития этой новой науки. Поэтому уже в ранний период становления молекулярной биологии, несмотря на определенные трудности и недостаток кадров, советскими учеными был сделан ряд принципиальных научных вкладов, среди которых обнаружение специальной фракции РНК. в последующем названной информационной РНК (мРНК), открытие временной регуляции синтеза информационных РНК на ДНК, тонерские исследования информационных РНК эукариотических клеток, расшифровка полной первичной структуры одной из тРНК, демонстрация возможности самосборки рибосом и т. д. [c.4]

Весьма перспективны такие ферменты микроорганизмов, как холестеринок-сидаза, для определения холестерина в крови, алкогольоксидаза для обнаружения спирта и др. Ферменты используют также для изучения первичной структуры высокомолекулярных соединений нуклеиновых кислот, белков, полисахаридов. [c.63]

Обнаружение способности производных бензофуроксаиа "вмешиваться в синтез нуклеиновых кислот н белков стимулировало исследования по выявлению противораковой активности у этих соединений. Действительно, Белтон и соавторы обнаружили, что весьма значительной активностью против некоторых видов рака у мышей (в частности, лимфатической лейкемии) обладают 7-пиперазинил-4-ннтробеизофуроксаны с различными заместителями у второго атома азота пиперазинового кольца [463] (ср. [c.378]

Биуретовая реакция и проба с аргинином по Веберу [96] служат для обнаружения пептидов в препаратах нуклеиновых кислот. Две другие цветные реакции — предложенная Дпше проба на дезоксирибонуклеиновую кислоту и флороглюциновая проба по Эйлеру и Хану — позволяют определить рядом оба вида нуклеиновых кислот. [c.439]

Метод фотокопий [57] для локализации и регистрации производных нуклеиновых кислот непригоден в случае пластинок с нанесенными на них слоями [72]. Цветные реактивы, употребляемые в хроматографии на бумаге-продуктов гидролиза нуклеиновых кислот, до настоящего времени не применялись для тонкослойных хроматограмм. Все реактивы, служащие для обнаружения пентоз в нуклеозидах и 5-нуклеотидах, а также реактивы, реагирующие с эфирами фосфорной кислоты, являются весьма ценным дополнением к методу обнаружения в УФ-свете. Реактив тетраацетата свинца [9] должен быть пригоден для обнаружения нуклеозидов и нуклеотидов на тонкослойных хроматограммах для обнаружения нуклеотидов должна быть пригодна также реакция Хейнса и Ишервуда [37]. [c.444]

Удерживание микроорганизмов — это частный случай обнаруженного явления. Проведенные опыты показали, что таким образом можно отделять от жидкости (и не только водной) находящиеся в ней в коллоидном состоянии глинистые минералы и другие высокодисперсные частицы [48, 74, 89, 161, 237], а такжЬ многие вещества, образующие истинные растворы — белки [51, 52, 54], нуклеиновые кислоты [50], полисахариды, [c.227]

Распространение в природе. В свободном виде азот является главной составной частью во.здуха (78,1 % по объему). В связанном состоянии встречается в форме неорганических соединений, например селитры — натронной NaNOs и калийной KNO3, а также аммиака (продукта гниения). В виде органических соединений азот содержится во всех организмах белковые вещества (протеины и протеиды), нуклеиновые кислоты, конечные продукты обмена веществ — карбамид и мочевая кислота. Обнаружен азот в природных углях. [c.339]

Нуклеиновые кислоты. Исключительное биологическое значение нуклеиновых кислот предопределило интерес к изучению особенностей их радиационно-химического поведения. На первоначальном этапе исследований основным критерием изменений, происходящих в нуклеиновых кислотах при действии ионизирующего излучения, служило уменьшение структурной вязкости водных растворов, связанное с разрывом межнуклеотидных связей. В случае облучения в присутствии кислорода наблюдался эффект последействия — вязкость раствора продолжала уменьшаться в течение некоторого периода после прекращения действия излучения. В облученных растворах нуклеиноц,ых кислот был обнаружен неорганический фосфат. [c.216]

В основу книги Методы биохимии и цитохимии нуклеиновых кислот растений положены методы и схемы исследований нуклеиновых кислот, разра1ботавные или усовершенствованные в нашей ла боратории. Сюда следует отнести 1) схему анализа нуклеиновых кислот с одновременным определением других фосфорных соединений 2) количественный анализ нуклеиновых кислот по пуриновым основаниям 3) схему фракционного экстрагирования нуклеиновых кислот для выявления гетерогенности ДНК и РНК 4) обнаружение, получение и определение количественного соотношения фракций лабильной, стабильной [c.3]

Рассмотренные пуриновые и пиримидиновые основания, а также некоторые другие производные пурина и пиримидина, которые не входят в состав нуклеиновых кислот, часто содержатся в растениях в значительном количестве в свободном состоянии. Наиболее часто в свободном состоянии в растениях встречаются гипоксантин (6-оксипурин), который был выделен из семян горчицы и люпина, ксантин (2,6-диоксипурин), найденный в листьях растений, мочевая кислота (2,6,8-триоксипурин), впервые выделенная А. В. Благовещенским из семян кормовых бобов и позднее обнаруженная в других растениях, а также аллантоин (глиоксилдиуреид), очень широко распространенный в растениях. Ниже представлены схемы строения этих оснований [c.225]

Применение. В гистохимии в качестве реактива на органический фосфор нуклеиновых кислот [1], для обнаружения ионов РО " в хромосомах [Пирс, 175] ив со.четанци с бензидином для выявления фосфатов по методу Бантинга. В микроскопической технике как составная часть гематоксилиновых растворов ло Ганзену [2] и по Кларку [3] и как активатор пероксидазной реакции [4]. b э-лектронной микроскопии в качестве контрастируюидего вещества. [c.36]

Значение обнаруженных небольщих искривлений гетероциклических ядер нуклеозидов и нуклеотиАов в кристаллах остается пока неясным, однако эти данные должны, вероятно, учитываться при построении более точных моделей нуклеиновых кислот . [c.125]