Ацетоновые порошки

АЦЕТОНОВЫЕ ПОРОШКИ, ФЕРМЕНТЫ И КОФЕРМЕНТЫ [c.641]

Работу по выделению фермента начинают с разрушения клеточной оболочки тканей, в результате чего фермент переходит в экстрагирующий раствор. Мышечную ткань можно разрушить с помощью мясорубки, а также гомогенизатора. Клеточную оболочку в ткани печени удобно разрушать обработкой ацетоном. Для этого ее помещают в гомогенизатор, заливают несколькими объемами ацетона, предварительно охлажденного до —20° С, и гомогенизируют на холоде 1—2 мин. Полученный гомогенат быстро фильтруют на воронке с отсасыванием. Осадок еще раз аналогично обрабатывают ацетоном, затем измельчают вручную (в ступке) при комнатной температуре и помещают в вакуум-эксикатор. Ацетоновый порошок может храниться в холодильнике несколько месяцев и использоваться по мере надобности. Обработка ацетоном не только разрушает клеточную оболочку, но также обезвоживает тка нь и освобождает ее в значительной степени от липидов. Одним из наиболее часто применяемых способов разрушения клеточной оболочки дрожжей является автолиз. Дрожжи предварительно можно высушить, что позволяет хранить их, как и ацетоновые порошки животных тканей, длительное время в холодильнике (в герметической упаковке). От условий высушивания дрожжей часто зависят выход фермента и его удельная активность. [c.198]

Экстракция. 15 г препарата в виде ацетонового порошка заливают 150 мл 15 мМ раствора карбоната натрия и оставляют при перемешивании на 45 мин при комнатной температуре. Центрифугируют 10 мин в рефрижераторной центрифуге при 40 ООО д. Осадок отбрасывают, pH центрифугата доводят до 8,0. Полученный экстракт может храниться в холодильнике в течение суток без потери активности. [c.285]

Удобным объектом для определения активности аргиназы является гомогенат печени животных или экстракт из ацетонового порошка этой ткани. [c.46]

Экстракция фермента из ацетонового порошка печени. Препарат готовят в количестве, достаточном для работы всей группы. Для этого к 200 мг ацетонового порошка печени добавляют 15 мл глицинового буфера и оставляют в термостате при 37 °С на 20 мин для экстрагирования фермента. При этом колбу периодически встряхивают. Затем смесь фильтруют и экстракт используют для определения активности аргиназы. [c.47]

Материал исследования гомогенат печени или экстракт из ацетонового порошка печени. [c.59]

Материал исследования препарат аргиназы (гомогенат печени или экстракт ацетонового порошка печени). [c.61]

В некоторых случаях такое комплексообразование применяли для препаративного разделения низкомолекулярных соединений. Порат и др. [29] использовали тот факт, что в условиях экстракции из ацетонового порошка физиологически активные циклопептиды задней доли гипофиза (окситоцин и вазопрессин) прочно ассоциированы с сопутствующими белками (фиг. 25). Сначала эти гормоны элюируются на сефадексе [c.147]

Пероксидаза жирных кислот обнаружена в бесклеточных экстрактах, полученных из семядолей арахиса и сафлора. Были активны также экстракты ацетонового порошка прорастающего гороха. Никакая активность не выявлялась в люпине, сое, подсолнечнике, клещевине и в тканях животных. Когда дифференциальному центрифугированию подвергли бесклеточные экстракты семядолей арахиса, пероксидаза жирных кислот была найдена в митохондриальной и микросомной фракциях, а также в надосадочной жидкости. Фермент был выделен в частично очищенном виде при обработке экстракта ацетонового порошка семядолей арахиса сернокислым аммонием (СА-фермент). [c.310]

Показано, что митохондрии печени крысы окисляют до С Ю-линолевую и линоленовую кислоты, меченные по карбоксильной группе. Для окисления необходим НАД-Нг. Экстракты ацетонового порошка митохондрий печени крыс также окисляли линолевую и линоленовую кислоты. В этом случае, кроме НАД-Нг, требовались АТФ и КоА. Потребность в АТФ и КоА находится в соответствии с наличием р-окисления, но не доказывает участия этого процесса в окислении линолевой и линоленовой кислот. Потребность в НАД-Нг непонятна. [c.318]

Получение. Водная экстракция из ацетонового порошка поджелудочной железы, свиньи, очистка на алюминиевом геле,, осаждение сульфатом аммония,. диализ и лиофильная сушка. М. м. 25 000—30 000. , [c.205]

Гидроксилирование допамина катализируется экстрактами из различных тканей бананов (Смит и Киршнер [81]), а также ферментативной системой, экстрагируемой из ацетонового порошка банановой пульпы. Аскорбиновая кислота по-разному действует на растительный фермент в то время как активность гомогената стимулируется, растворимый фермент ингибируется. Смит и Киршнер [82] получили результаты, подтверждающие точку зрения, что гидроксилирование идет непосредственно по -углеродному атому боковой цепи. Образование конечного продукта могло бы произойти при дегидрогенизации боковой цепи исходного субстрата и последующем присоединении воды. Такой механизм предусматривает отрыв одного атома водорода от а-угле-родного атома, несущего аминогруппу. Однако было показано, что при гидроксилировании смеси а-С -допамина и а-Н -допамина (взятых в определенном отношении) растительным и животным ферментами отношение С № оставалось тем же. Этот результат полностью исключает механизм а- -дегидроге-низации и последующей гидратации. [c.329]

Результаты экспериментов с использованием различных ферментных препаратов [92], по-видимому, свидетельствуют в пользу предположения Лемберга. Фермент, присутствующий в водных экстрактах ацетонового порошка печени быка и других органов млекопитающих, катализирует образовапие желчного пигмента [c.456]

После завершения ферментативной реакции в микроэмульсии фермент можно регенерировать для повторного использования, например, путем добавления в систему избытка ацетона. Фермент при этом выпадает в осадок в виде так называемого ацетонового порошка, сохраняя каталитическую активность, тогда как основная доля ПАВ вместе с продуктом реакции остается в растворе. Последнее обстоятельство является одним из основных недостатков микроэмульсий как среды для проведения ферментативных реакций, поскольку отделение продукта от примеси ПАВ нередко представляет собой весьма трудную задачу. [c.75]

А. Растапливают в водяной бане фталатный агар из расчета 15 мл на каждую опытную чашку. Из ацетонового порошка убитой культуры тест-микроба готовят взвесь. На каждые 10 мл среды берут 150 мг высушенной микробной массы, вносят в маленькую фарфоровую ступку и, непрерывно растирая пестиком, приливают небольшими порциями 10 мл раствора бифталата калия pH 6,2. Микробную взвесь, приготовленную таким образом, приливают к расплавленному и остуженному до температуры 45 °С агару. Смесь хорошо перемешивают и разливают мерной пипеткой по 15 мл в чашки, предварительно установленные на строго горизонтальной поверхности стола для равномерного распределения в них слоя среды. [c.156]

Срезы помещают в ТСБ, содержащий 0,1% (по весу) препарата ацетонового порошка из мышиной печени, на 5 мин. [c.416]

Приготовление ацетоновых порошков Исследуемую биомассу заливали ацетоном (1 3), перемешивали. Огделяли жидкую фазу на центрифуге. Полученный порошок высушивали при комнатной температуре [c.85]

Неочишенные ферментные препараты получают путем высушивания в мягком режиме культуры микроорганизмов вместе с остатками питательной среды. Такие препараты получают и путем упаривания экстракта из культуры продуцента, выращенного поверхностным способом, или из фильтрата культуральной жидкости (в случае глубинного выращивания микроорганизмов). Распространен также метод ацетоновых порошков, состоящий в осаждении и быстром обезвоживании при температуре не вьппе -10 °С тканей или вытяжек из них, содержащих ферменты. Технические препараты ферментов представляют собой либо высушенные до порошкообразного состояния продукты, либо жидкие концентраты, обычно характеризующиеся 50 %-м содержанием сухой массы веществ. [c.79]

Энзим получают, выдерживая 0,050 г ацетонового порошка из препарата La toba illus с 5 мл буфера МакИлвайна при pH 4,8 Б течение 6 час. Клетки удаляют центрифугированием, а жидкость используют. [c.609]

В присутствии АТФ, КоА и Мп++ митохондрии, полученные из мезокарпия плодов авокадо, синтезировали из уксусной кислоты пальмитиновую, стеариновую и олеиновую кислоты. Углекислота увеличивала скорость синтеза, но не включалась в высокомолекулярные жирные кислоты. Не обнаружено никакого ясно выраженного источника восстанавливающих агентов [23, 25]. Однако при использовании экстракта ацетонового порошка, полученного из митохондрий авокадо, выявлена потребность в НАДФ-Нз-НАД-Нз оказался неэффективен. Когда же в качестве субстрата [c.327]

Обычно считалось, что флороглюцин не подвергается действию полифенолоксидазы, так как жета-расиоложение его оксигрупп исключает возможность окисления через хинонную форму. Однако Поповым (1952) было обнаружено, что препарат полифенолоксидазы из листьев чая окисляет флороглюцин с поглощением довольно значительного количества кислорода. Позднее тот же автор (Попов, 1960) установил, что оптимум окисления флороглюцина нерастворимым препаратом полифенолоксидазы из листьев чая находится при pH 8,0 (для пирокатехина и чайного таннина он равен 5,3) и что помимо чайного растения способностью к окислению флороглюцина обладают препараты полифенолоксидазы (ацетоновые порошки) из кожицы плодов банана, клубней картофеля, листьев капусты и корней редиса. [c.196]

Из ацетонового порошка стеблей ячменя выделена и частично очищена а-дезаминаза, катализирующая дезаминирование ь-фенилаланина с образованием транс-кощчшй кислоты. Реакция необратима, и первоначальным ее продуктом является скорее шраме-изомер коричной кислоты, чем г ис-изомер. Фермент обнаружен также у пяти других исследованных растений. [c.323]

Наибольший интерес представляет распределение тирозиндезаминазы среди высших растений. Присутствие фермента легко определяется в забуференных экстрактах из ацетонового порошка молодых сеянцев сорго, пшеницы, кукурузы, ячменя, овса и риса, а также в порошке, приготовленном из стеблей сахарного тростника (Нейш [45]). С другой стороны, фермент не удалось обнаружить в экстрактах из пекарских дрожжей или в ацетоновом порошке гороха, люпина и белого донника. Фермент отсутствует в семенах сорго, но появляется при прорастании. Как показывает количественное исследование, корешки рисовых сеянцев являются богатым источником фермента, но после очистки фермент оказался нестабильным. При исследовании изменения содержания тирозиндезаминазы в ячмене по мере развития растения было установлено, что наибольшее количество ее накапливается на стадии колошения, а стебель содержит в десять раз больше фермента, чем листья. [c.324]

Фальк и сотр. [31] обнаружили, что уропорфирин, копропорфирин и протопорфирин образуются из ПБГ гемолизированными эритроцитами цыпленка нри инкубации в аэробных условиях. Протопорфирин в анаэробных условиях не образуется. Было показано, что Оа — единственный эффективный окислитель в системах с окислительной копропорфирино-гендекарбоксилазой из митохондрий печени морской свинки [112] или сухими ацетоновыми порошками митохондрий печени быка [104] флавинмононуклеотид, 1,4-нафтохинон и Н2О2 оказались неэффективными с этими препаратами. [c.449]

Люцифераза светляка также была получена экстракцией сухого ацетонового порошка 10 М раствором ЕДТА при pH 7,8 на холоде. По своей химической природе она является глобулином, который не разделялся при электрофорезе, имел изоэлектрическую точку при pH = 6,2—6,3, а также был гомогенным Б аналитической ультрацентрифуге. Седиментацион-ная константа ее равнялась 5,6 при 25° и в 15 М Na l. Молекулярный вес люциферазы был найден округленно в 100 ООО. [c.345]

Кук И др. [26, 27 ] исследовали разрушение малатиона гомогена-тами печени крыс. С помощью хроматографии на бумаге они установили, что в условиях их метода (экстрагирование хлороформом в нейтральной среде) извлекается только один метаболит. В дальнейшем они показали, что единственный метаболит, образующийся под действием ацетонового порошка из печени крыс, оказался идеи- [c.156]

Мак-Каин и сотр. [2746], а также Дхаривал и сотр. [2729а] выделили ЛСФ высокой степени чистоты при экстракции ацетоновых порошков гипоталамуса овцы уксусной кислотой, последующем фильтровании через сефадекс G-25 и хроматографии на карбоксиметилцеллюлозе. Шэлли и Бауэрс [2767] обработали [c.328]

Определено с применением ацетонового порошка А. пгдег. Плесень экстрагируется холодным ацетоном перед внесением сульфида реакция продолжается 6 суток при 28— 30 С. [c.400]

Другим источником ферментных систем, осуществляющих фосфорилирование 5 -АМФ, могут служить пекарские дрожжи Sa haromy es erevisiae), взятые в виде гомогената или ацетонового порошка. Реакционная смесь содержит 5 -АМФ, глюкозу, фосфатный буфер (pH 7,0) и дрожжи, подготовленные, как сказано выше (рис. 17.1). Вслед за истощением глюкозы при минимальном количестве неорганического фосфата отмечается максимум накопления АТФ. После достижения максимума АТФ наблюдается его распад до АДФ и АМФ при одновременном повышении уровня неорганического фосфата. На выход продукта существенное влияние оказывает концентрация фосфата, присутствующего в виде фосфатного буфера. Отклонение от оптимальной величины может привести к ряду нежелательных реакций вызвать образование инозиновой кислоты, инозина и гипоксантина. Вероятно, вносимый извне аденозин необходим для осуществления затравочной реакции. В равной мере это относится и к 5 -АМФ. Отсюда очевидна необходимость иметь в сфере реакции высокую концентрацию глюкозы и сбалансированное количество фосфата. [c.354]

Техника приготовления ацетонового порошка убитой культуры М. lysodeikti us сводится к следующему. Суточную, а яри слабом микробном росте двухсуточную культуру микроба, выращенную в пробирках на 2% мясо-пептонном агаре (рец. 38, с. 352), смывают 5 мл изотонического раствора хлорида натрия. Полученной микробной взвесью засевают поверхность мясо-пептонного агара, разлитого в матрацы. На каждый матрац расходуется 2 мл микробной культуры. Затем матрацы помещают в термостат с температурой 37 °С в горизонтальном положении засеянной поверхностью кверху. [c.154]

A. 50 мг ацетонового порошка М. lysodeikti us взвешивают в 100 мл 0,007 М фосфатного буфера pH 6,2. [c.155]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология