Носители для ТСХ и электрофореза в тонком слое

Большое распространение получил электрофорез в тонких слоях для разделения высокомолекулярных веществ на различных носителях, особенно на агаровом, крахмальном и полиакриламидном гелях. Благодаря замечательной разделительной способности этот метод нашел применение прежде всего в клинической биохимии. Напомним, что в подавляющем большинстве случаев разделение с помощью этого метода осуществляется на носителях, приготовленных в форме геля. Опыт, накопленный в области хроматографии в тонких слоях, показал, однако, что для разделения некоторых групп веществ, в первую очередь низкомолекулярных, можно с успехом применять и суспензии некоторых сорбентов. [c.160]

Фракционированием в ПААГ и агарозе не исчерпываются, современные методы электрофореза. В качестве носителей жидкой фазы широко используют также пленки из ацетата целлюлозы, фильтровальную бумагу, тонкие слои силикагеля, целлюлозы, сефадекса и др. В некоторых случаях, например для разделения низкомолекулярных веществ, эти системы имеют свои преимущества, однако для фракционирования белков, нуклеиновых кислот и их фрагментов в настоящее время используют почти исключительно гель-электрофорез, поэтому только он и будет подробно описан. [c.6]

Существует много различных типов носителей листы хроматографической бумаги или ацетата целлюлозы, тонкие слои окиси кремния или алюминия, крахмальные, агаровые и полиакриламид-лые гели всех их насыщают соответствующим буфером. Выбор носителя определяется конкретными условиями анализа. Общая для всех носителей особенность состоит в том, что разделяемые вещества движутся в виде отчетливых зон, которые затем легко обнаружить соответствующим аналитическим методом (табл. 4.1). Этот метод, который получил название зональный электрофорез, широко применяется как в препаративных, так и в аналитических целях. [c.115]

Насыщенный буфером носитель, на который нанесен образец, обычно располагают горизонтально горизонтальный электрофорез) на плоской поверхности изолирующего материала, например плексигласа (рис. 4.1), При горизонтальном Электрофорезе разделение можно проводить на бумаге, ацетате целлюлозы, в гелевых пластинах и в тонком слое, хотя работа с тонкими слоями при более высоких напряжениях требует применения металлических охлаждающих пластин, как при высоковольтном электрофорезе (разд. 4.4.1), Иногда гели и тонкие слои прикрывают пластиной из изолирующего материала, чтобы предотвратить испарение. Для работы с низким напряжением имеется простое оборудование для вертикального электрофореза (рис, 4.2) можно использовать пластины крахмального геля, помещая их вертикально в специальные камеры. [c.120]

В зональном электрофорезе пятно или тонкий слой раствора, нанесенного на полутвердый или гелеобразный материал, помещают в электрическое поле, в результате чего молекулы перемещаются по или через материал носителя. Поскольку образец наносится в виде зоны, для полноты разделения приходится использовать небольшие количества вещества. В первую очередь функцией носителя является предотвращение механических воздействий и конвекции, которая происходит в результате как температурных изменений, так и высокой плотности концентрированных растворов макромолекул. Однако носитель иногда может адсорбировать молекулы различного типа или действовать в качестве молекулярного сита, приводя тем самым к хроматографическим эффектам (гл. 8), что может или помогать разделению или ухудшать его. Методы использования различных материалов в качестве носителей описаны в следующих разделах. [c.225]

В качестве преимуществ метода ХТС по сравнению с хроматографией, на бумаге следует специально отметить следующее а) небольшая диффузия приводит к меньшим пятнам, благодаря чему достигается более высокая чувствительность б) меньшее время разделения в) возможность применять самые агрессивные реагенты для обнаружения разделяемых веществ. Последа нее справедливо также для ионофореза в тонких слоях, а пункт б), уменьшение времени разделения, имеет силу в первую очередь для низковольтного электрофореза. Применение свободных неохлаждаемых стеклянных пластинок в качестве носителей адсорбционного слоя имеет известные недостатки. Вследствие сравнительно большой толщины стеклянных пластинок (3,5 мм) затрудняется эффективное охлаждение, совершенно необходимое-для разделения при высоком напряжении (выше 500 в). При использовании более тонких стеклянных пластинок этот недостаток в некоторой степени устраняется. Из-за опасности повреждения слоя труднее осуществить охлаждение с верхней стороны, которое, в противоположность Пастуска и Тринксу [195], мы считаем необходимым уже при напряжении 400—500 в. [c.430]

В основу этого метода положен зонный электрофорез в электролите, который движется перпендикулярно направленик> электрического поля. Первоначальный вариант метода предназначен для разделения на бумаге. Позднее [2] он был применен в отсутствие носителя, при этом стабилизация зон осуществлялась ламинарным потоком достаточно тонкого слоя электролита. Электрофоретическая ячейка имела форму плоской квадратной или прямоугольной рамки, длина ее стороны составляла несколько десятков сайтиметров, а толщина слоя равнялась 0,25—0,60 мм. Вначале этот прибор использовался для разделения высоко- и низкомолекулярных пептидных соединений, нсь позднее выяснилось, что таким способом можно эффективно разделять не только растворимые электрофоретические соединения, но и коллоидные частицы, включая субклеточные частицы и клетки, если конструкция аппарата не допускает быстрого осаждения макрочастиц на стенках электрофоретической ячейки. Движение частиц в условиях непрерывного электрофореза описывается следующим простым соотношением [39] [c.285]

Фильтровальная бумага из-за ее пригодности для многих разделений и доступности остается наиболее популярной в качестве стабилизирующей среды, особенно для систем, в которых не требуется анализа большого количества компонентов. Если разрешающая сила является чрезвычайно важным фактором разделения смеси,то вместо бумаги используют полоски ацетилцеллюлозы, которая обладает большей проницаемостью для продвижения крупных молекул, например,протеинов. В качестве других пористых носителей буферного электролита были предложены картон, стеклянный порошок, кварцевый песок, ряд дающих лучшее разделение, чем бумага гелей (крахмал, агар-агар, акриламад, поливинилхлорид и др). Помимо этого для разделения небольших количеств смесей использовали тонкие пленки кизельгура, а также специальную асбестированную бумагу для электрохроматографии в расплавленных солях. Если объемы образца больше, чем те.которые могут быть нанесены на фильтровальную бумагу или тонкий слой другого носителя, можно применять колонки, заполненные тем или иным пористым материалом. Для препаративных разделений существуют различные мод икации установок непрерывного электрофореза,в которых используется ряд рассмотренных выше носителей. [c.163]

Практически более доступным и удобным является метод зонного электрофореза на пористом носителе, заключающийся в том, что на пористый носитель (фильтровальная бумага или тонкий слой любого порошка, не проводящего электричества) наносят смесь разделяемых веществ в виде небольшого пятна., и меаду концами создается электрическое поле. При этом заряженные частицы (ионы) будут шгрировать к соответствующему электроду, и если подвижности этих частиц неодинаковы при данных условиях, то смесь будет разделяться на зоны, соответствующие каждому сорту частиц. Полнота разделения, то есть расстояние между зонами индивидуальных веществ, зависит от различия подвижностей, длительности процесса и величины приложенного напряжения. Кроме того, на четкость разделения в большой мере влияет размытие зон раэ(рляемых ионов. Это размытие обусловлено диффузией, вызываемой градиентом концентрации в зоне данного иона и в объеме раствора, движением электролита вследствие конвективных потоков, электроосмоса, испарения жидкости за счет выделения джоулева тепла, вибрахдаи, толчков и т.д., а также адсорбцией разделяемых веществ на пористом наполнителе. [c.152]

Зонный электрофорез предполагает использование неподвижного носителя, по поверхности или через объем которого осуществляется миграция ионов. Носители могут применяться в виде полос (например, бумаги), колонок, дисков, тонких слоев и т. д. Для зонного электрофореза чаще всего используют фильтровальные бумаги (Ватман № 1 и № ЗММ), а также ацетат целлюлозы, гели агара, крахмала и полиакриламида 24, 25]. Электрофорез осуществляется под действием электрических полей низкого (<1000 В) и высокого (от 1000 до 10000 В) напряжения. При непрерывном электрофорезе (препаративный метод с использованием низкого напряжении) образец непрерывно подается на носитель (чаще всего бумага Ватман № ЗММ или Шлейхер-Шюлль 2230). Электрофорез с высоким напряжением электрического поля проводят, как правило, на бумаге этот метод дает хорошие результаты при анализе аминокислот и других небольших молекул и непригоден для анализа больших молекул. [c.403]

Было бы утомительно проводить серию электрофоретических опытов при различных близких друг к другу значениях pH. Разумной альтернативой такой постановки опыта служит электрофорез в градиенте pH. Этот вариант метода, называемый изоэлектриче-ским фокусированием, является прямым аналогом равновесного центрифугирования в градиенте плотности. Молекулы, несущие и положительные и отрицательные заряды, называют амфолитами к ним относятся, например, полимеры, содержащие многочисленные амино- и карбоксильные группы. Смесь амфолитов с широким спектром изоэлек-трических точек вводят в колонку и ожидают, пока она не распределится по колонке под действием электрического поля. Таким способом достигается стабилизация градиента pH, в котором каждый конкретный амфолит оказывается около своей изоэлектрической точки. Для того чтобы избежать потерь биологического материала на аноде или катоде, на обоих концах градиента устанавливают такие значения pH, при которых у биологических материалов не может быть изоэлектрических точек. Чтобы подавить конвекцию, градиент pH создают в твердотельном носителе. В эту систему добавляют небольшое количество белка. Он мигрирует, пока не достигнет pH, соответствующего его изоэлектрической точке. Там он и концентрируется, образуя узкую зону. Чтобы проанализировать результаты такого опыта, можно просканировать гель и измерить поглощение белка можно также окрасить белок либо нарезать гель на тонкие слои и измерить в каждом слое pH, содержание белка, ферментативную активность или радиоактивность. [c.302]

Первое упоминание о тонких пластиковых листах как о носителях адсорбента в ТСХ относится к 1964 г. [44]. Вскоре после этого готовые для использования хроматографические материалы такого типа начали в большом количестве производиться многими фирмами. Эти листы удобны тем, что легко режутся ножницами, и поэтому из них можно вырезать пластинку любого размера. Однако емкость слоя адсорбента на таком листе обычно несколько меньше, чем на стекле. Такие листы (20X500 см) выпускаются в виде рулонов [45]. Халпаап и Бауш [46] получали на них хроматограммы длиной до 1 м. Рёсслер и сотр. [47] запатентовали метод покрытия пластиковых листов диоксидом титана или циркония перед нанесением адсорбента. Такая обработка препятствует диффузии пластификаторов и других веществ из пластика в адсорбент. Тонкие пластиковые листы рекомендованы в качестве подложки для геля в тонкослойном электрофорезе, позволяющей устранить искажение профиля зоны, происходящее в толстых слоях, и избежать необходимости делать срезы геля. Для этой цели использовалась также покрытая тефлоном стеклянная бумага [40]. [c.41]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология