Электрофорез на бумаге блоке

Электрофорез на бумаге можно рассматривать как частный случай электрофореза в блоке. Бее же имеются важные особенности, связанные с малой толщиной листа. Электрофорез на бумаге возник в конце-40-х—начале 50-х годов и сейчас является наиболее широко распространенным методом электрофореза. Он развивался параллельно с хроматографией на бумаге, успешно дополняя ее при исследовании низкомолекулярных веществ и пептидов по отношению к белкам вообще нет эквивалентного хроматографического метода. [c.93]

Различают свободный электрофорез и электрофорез в поддерживающих средах. При свободном электрофорезе изучаемую смесь белков помещают в буферный раствор, контактирующий с электродами. Установка для свободного электрофореза сложна она имеет фотооптическую систему для регистрации результатов разделения белковой смеси. Второй тип электрофореза предусматривает использование поддерживающих сред (специальной хроматографической бумаги, ацетатной целлюлозы, агарового или крахмального геля и т. п.), которые сначала пропитывают буферными растворами, а затем помещают на них исследуемую белковую смесь. Концы бумажных полос, агаровых или крахмальных блоков и т. п. контактируют обычно с буферным раствором, в который погружены электроды, соединенные с источником постоянного электрического тока (рис. 95 [c.218]

Получение нитрила фенилуксусной-1-С кислоты и фенетил-амина-а-С этим методом при проведении реакции с количествами веществ порядка нескольких миллимолей описано Блоком [4]. Приведена схема прибора для микроперегонки и показано с помощью бумажной хроматографии и электрофореза на бумаге, что конечный продукт реакции (выход 15,4%) однороден. [c.597]

В настоящее время метод электрофореза на бумаге и в агаровых блоках особенно часто используется в. медицине для изучения фракционного состава белков сыворотки и плазмы крови. Подробнее этот вопрос рассматривается на стр. 477. Техника электрофореза белков плазмы крови излагается в практических руководствах по биохимии. [c.23]

Электрофорез на бумаге является аналитическим и микро-препаративным методом, пригодным для разделения лишь небольших количеств вещества. Без чрезмерного расширения пятна на бумагу обычно можно нанести несколько десятков микролитров раствора. Несколько увеличить это количество можно, если применить более толстую и широкую бумагу. В последнем случае зону наносят в виде длинной полосы, перпендикулярной направлению поля. Но при этом ухудшается разрешение из-за того, что невозможно обеспечить полную однородность условий по всей ширине листа, в результате чего зоны искривляются. Толстая бумага по той же причине дает худшие результаты, чем тонкая. Хотя таким способом можно разделять десятки миллиграммов вещества, все же начиная с таких количеств предпочтительнее использовать блок или колонку. [c.94]

Электрофорез используется для выделения и разделения ферментов на конечных стадиях очистки, а также для препаративных и аналитических целей. Для препаративного выделения и очистки ферментов проводят зонный электрофорез па бумаге и в блоках или на колонках с различными наполнителями (целлюлозным порошком, крахмалом и другими), а также электрофорез в гелях — агар-агаровом, крахмальном, полиакриламидном. Электрофорез в гелях отличается от электрофореза на порошкообразных или пористых носителях. Здесь сочетаются два метода разделения ферментов — электрофоретический и метод, основанный на гель-фильтрации. Фракционирование ферментов на основе различной электрофоретической подвижности оказывается одним из самых эффективных методов. [c.201]

После электрофореза поддерживающую среду часто приходит-ся разделять на фрагменты для определения в них ферментативной или антигенной активности, либо радиоактивности. Полоски бумаги или ацетата целлюлозы и пленки высушенного агара можно легко разрезать ножницами или бритвой. Разрезание крахмального геля на продольные блоки относится к обычным процедурам, применяемым при электрофорезе в этом геле. Чтобы выделить разделенные компоненты из крахмального или агарового геля, его чаще всего разрезают бритвой в поперечном направлении. Описан способ фракционирования разбавленного) (0,05—0,1%) агарозного геля путем его расплавления при 80 и последующего сбора капель с помощью коллектора фракций [546]. Что же касается полиакриламидного геля, обладающего [c.201]

На ранних этапах исследования гемоглобинов применяли электрофорез с подвижной границей, а также электрофорез на бумаге и в блоках крахмального геля. С помощью этих методов были выявлены первые мутантные гемоглобины. Б настоящее время в качестве носителей при электрофорезе используют ацетат целлюлозы, агаровый, крахмальный и полиакриламидный гели. Кроме того, все более широкое распространение получает изоэлектрическое фокусирование. [c.320]

НОЙ пластинке подходящего размера помещают в электрофоретическую камеру. Концы блока соединяют с электродными сосудами при помощи фитилей из фильтровальной бумаги. Для получения стартовой зоны на поверхности блока по линейке выдавливают булавкой ряд канавок. Необходимо следить за тем, чтобы случайно не проткнуть блок насквозь. Кончик булавки следует погружать не глубже чем на 2 мм при толщине блока 2,5 мм. Если разделяемые вещества бесцветны, то положение полученных фракций определяют при помощи реплики, которую делают, осторожно прижимая к поверхности блока пропитанную буфером и наполовину высушенную полоску тонкого целлогеля или ацетата целлюлозы. Затем полоску быстро окрашивают, пока электрофорез в блоке еще продолжается. Если положение фракций на ней можно выявить, электрофоретическое разделение прекращают и блок разрезают на сегменты в соответствии с обнаруженной картиной. Разделенные вещества можно получить, отжимая эти сегменты в пресс-шприце (фирма СЬете1гоп, Италия) или в обычном шприце. Согласно проспекту фирмы-изготовителя, в бло ке целлогеля толщиной 2,5 мм можно фракционировать 0,25—0,4 мл сыворотки крови или 0,1 мл 3%-ного гемолизата эритроцитов. [c.45]

Зонный электрофорез. Главное отличие зонного электрофореза от фронтального состоит в том, что при зонном э,лектрофорезе используется поддерживающая среда, в которой осуществляется движение вещества, тогда как при фронтальном электрофорезе ионы свободно перемещаются в растворе. Поддерживающей средой, или носителем, служат обычно бумага, целлюлоза, крахмальные гели или блоки, пористые по,лиуретаны. и полиакрил-алшдиые гели. На фиг. 24 приведена схема прибора для зонного электрофореза. [c.77]

Исс,ледуемый материал наносится в виде узкой полосы иа поддерживающую среду приблизительно посередине между сосудами с буферным раствором, в которых находятся электроды. Каждый из компонентов мигрирует с определенной скоростью, зависящей от его заряда, к катоду или к аноду. В результате все компоненты четко разделяются. После этого носитель можно разрезать на соответствующие части и элюировать каждый из компонентов смеси. Таким образом, зонный электрофорез можно с успехом использовать как для анализа многокомпонентных смесей, так и д.пя препаративного выделения чистых белков. Выбор носителя для зонного электрофореза зависит главным образом от задачи, которая стоит перед экспериментатором. Если основной целью является разделение компонентов, то в качестве носителей используются бумага, крахмал или лучше полиакриламидный гель. Если же целью яв.ляется препаративное получение чистого белка, то лучше всего использовать крахмальный блок, на который [c.77]

Разделение белков путем электрофореза (в аппаратах Тизе-лиуса, электрофореза в крахмальном блоке или на бумаге). [c.10]

При применении этого метода наносят очень небольшие количества концентрированного раствора исследуемого препарата на старт в виде узкой полосы. В результате электрофореза (может быть приложена весьма высокая разность потенциалов, поскольку в геле подавляются конвекционные токи) смесь будет разделяться на ряд зон, что позволяет получить более высокое разрешение, чем при работе по методу свободной границы. Более того, можно варьировать средний размер пор и распределение пор по размерам для некоторых поддерживаюш,их сред (крахмал, агар, полиакриламид) таким образом, что действие одного из факторов, влияюш их на электрофоретическую подвижность, а именно гидродинамического сопротивления, будет столь велико, что часть молекул будет практически неподвижной [30]. Электрофоретические подвижности в гелях или на бумаге нельзя непосредственно сравнивать с электрофоретическими подвижностями, измеренными методом свободной границы, кроме тех случаев, когда рассматриваемые молекулы малы по сравнению с размерами пор в поддерживающей среде. Компактные белки с молекулярным весом вплоть до 50 ООО легко диффундируют в 5%-ном полиакриламидном геле, и даже с веществами большего молекулярного веса можно получить хорошие результаты. Бумагу или гелевый блок нужно окрасить, чтобы показать положение различных компонентов можно также сделать перенос на подходящим образом вырезанный кусок фильтровальной бумаги, хотя эта методика часто малочувствительна. Обычные красители, применяемые для обнаружения белков (нигрозин, амидовый черный), дают удовлетворительные результаты для многих гликонротеинов, но некоторые эпителиальные вещества, которые могут представлять собой по существу углеводы (до 90%), окрашиваются довольно плохо. Было найдено, что для кислых гликонротеинов лучше применять толуидиновый голубой [32] или муцикармин [33], а алциановый голубой окрашивает как кислые, так и нейтральные гликопротеины [34]. Наиболее общей методикой окрашивания является, по опыту автора, методика Райдона и Смита [35] (хлорирование и обработка смесью крахмала и иодистого калия), но она неприменима на полиакриламидных гелях. [c.47]

Самый простой способ обеспечения стабильности электрофоретических зон заключается в том, что в среду для электрофореза вводят вещества, образующие капиллярную структуру. Ан-тиконвекционные свойства такой системы весьма высоки, если площадь поперечного сечения капилляров достаточно мала, так как в канале круглого сечения скорость потока снижается пропорционально четвертой степени радиуса. В качестве поддерживающей среды чаще всего используются фильтровальная бумага, пленки из ацетата целлюлозы, колонки или блоки целлюлозного порошка, гранулированный крахмал или гранулы поливиниловых полимеров, а также агаровый, агарозный, крахмальный или полиакриламидный гели. Зональный электрофорез в поддерживающей среде имеет ряд важных преимуществ. При его проведении можно использовать какой-либо простой и сравнительно недорогой прибор и анализировать одновременно несколько различных препаратов. Процедуры визуализации зон и выделения фракций осуществляются довольно легко. Вещества, обладающие биологической активностью, можно выявить непосредственно на электрофореграммах. Метод легко приспособить как для крупномасштабного разделения веществ, так и для микроразделения. Удается достигнуть очень высокой разрешающей силы, особенно в среде, характеризующейся одновременно антикон векционными свойствами и эффектом молекулярного сита. [c.34]

Прибор для проведения электрофореза такого типа устроен весьма просто. Он состоит из двух электродных сосудов и лотка для поддержания блока (рис. 15). Лоток можно изготовить из стеклянной или плекоигласовой пластины соответствующего размера и двух плексигласовых брусков, расположенных вдоль боковых сторон пластины параллельно направлению электрофоретической миграции. Пластину и бруски покрывают листом тонкой полиэтиленовой пленки (рис. 16). К двум другим сторонам пластины плотно прижимают стопки толстой фильтровальной бумаги [898]. Можно также воспользоваться лотком с уже готовыми продольными стенками. В этом случае в дне лотка с обеих его сторон, расположенных перпендикулярно направлению электрофореза, прорезают две щели, в кото- [c.47]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология