Тонкослойная хроматография ТСХ высокого разрешения

Тонкослойная хроматография высокого разрешения (ВЭТСХ) [c.156]

Особое значение для органической химии имело бурное развитие методов анализа и разделения вещества, базирующихся на принципах хроматографии, открытой выдающимся русским ученым М. С. Цветом. Совершенно исключительное значение этого открытия для развития экспериментальной техники во всех направлениях химической науки ныне признается научной общественностью всего мира. Развитые на его основе методы газожидкостной, тонкослойной и жидкостной хроматографии высокого разрешения внесли поистине революционные преобразования в мир химической лаборатории, позволяя в считанные часы решать такие исследовательские задачи, которые раньше требовали многих лет упорного труда. [c.5]

Хроматография производных аминокислот получила интенсивное развитие в связи с разработкой методов определения первичной структуры белков. Вероятно, трудно найти в органической химии и биохимии более удачный пример столь тесной взаимосвязи развития представлений о структуре и функциях большого класса веществ, каким являются белки, с хроматографическими методами анализа. Основное внимание было направлено на разработку методов определения N-концевых остатков аминокислот в белках, причем в идентификации соответствующих производных большое значение имели тонкослойная (ТСХ) и бумажная хроматография (БХ) (см. обзоры [1, 2]). Газожидкостная и жидкостная колоночная хроматографии находят в этой области ограниченное применение, однако интерес к последнему методу постепенно растет. Интерес к жидкостной хроматографий вызван вполне определенными причинами. Во-первых, постоянно появляются новые методы избирательной модификации остатков аминокислот в белках, а идентификация производных аминокислот требует развития хроматографических методов. Во-вторых, исследованию подвергают все более труднодоступные белки, что в свою очередь вызывает необходимость создания надежных методов количественного анализа. Интерес к колоночной хроматографии возрастает также в связи с выделением и получением необычных аминокислот, а также в связи с необходимостью предотвращения ошибок при определении аминокислотной последовательности. Понятия современный и классический метод используют здесь условно, поскольку новые методики обычно создают на базе стандартной аппаратуры примером может служить автоматический анализ ДНФ- и ДНС-аминокис-лот [3, 4]. Насколько известно, до сих пор не пытались использовать скоростную хроматографию высокого разрешения для разделения производных аминокислот, хотя некоторые соединения, например ДНС-аминокислоты, являются для этого метода довольно удобным объектом. Производные аминокислот использовали в структурном анализе белков крайне неравномерно. По-видимому, всеобщее увлечение ДНФ-аминокислотами проходит окончательно, уступая место повышенному интересу [c.360]

Хроматографические методы уже давно применяли в химии алкалоидов. Некоторые исследования, в которых для очистки алкалоидов использовали ионный обмен, остались незамеченными. Что касается хроматографии на окиси алюминия, то этот сорбент впервые использовали в 1937 г. для очистки настоек белладонны, хинина, ипекакуаны и стрихнина [1]. Хроматографические методы были впервые использованы при очистке отдельных или целых групп алкалоидов для отделения от сопутствующих веществ с последующим выделением и определением классическими методами анализа. Введение таких хроматогра,-фических методов, как хроматография на бумаге и тонкослойная хроматография, произвело переворот в анализе алкалоидов, особенно в идентификации близких в структурном отношении алкалоидов (например, алкалоидов спорыньи, опиума и раувольфии и др.). Из колоночных методов подобный успех имела газовая хроматография, впервые примененная в этой области в 1960 г. Следует ожидать, что в ближайшее время широкое применение получит хроматография высокого разрешения. [c.100]

Во многих случаях комбинацию адсорбент—растворитель, обеспечившую удовлетворительное разделение методом тонкослойной хроматографии, можно использовать для разделения на колонке. При этом становится возможным осуществление более быстрого разделения, с более высоким разрешением и с более точным определением количественного состава. [c.30]

Любые способы очистки всегда сопряжены с неизбежными потерями материала, поэтому число стадий очистки нужно сводить до минимума. Следовательно, необходимо стремиться применять те методы, которые способны давать самую высокую степень разрешения с небольшим количеством материала. К ним относятся в первую очередь тонкослойная хроматография, тонкослойный электрофорез, газожидкостная хроматография, электрофорез на ацетате целлюло- зы, диск-электрофорез, ионообменная и аффинная хроматография. Из них наиболее предпочтительной является, по-видимому, газожидкостная хроматография (в тех случаях, где она применима), так как этот метод обладает высокой разрешаюш ей способностью и чувствительностью и может быть использован как для качественного, так и для количественного анализа. В данном случае особые преимущества дает применение детекторов азота, что позволяет ограничиться минимальной предварительной очисткой. [c.139]

Фирма AMAG выпускает приспособление, позволяющее осуществить радиальное и круговое тонкослойное хроматографирование высокого разрешения (ВЭТСХ) (рис. 5.8). На рис. 5.9 показано это приспособление (U-образная камера) в разрезе. Растворитель подают на пластинку с постоянной скоростью с помощью шприца, снабженного ступенчатым электроприводом с электронной регулировкой. Пробы для радиальной хроматографии наносят на сухой слой в виде круглых пятен диаметром [c.139]

Рис. 10.4. Разделения полипропиленгликоля (укон 50НВ55) методом колоночной высокого разрешения хроматографии и тонкослойной хроматографии. а) Колонка 50 см, корасил II подвижная фаза н-гексан — 5% изопропанола скорость потока 0,9 мл/мин образец 0,8 мг в 20 мкл растворителя длительность полного разделения 9 мин б) (репродукция с тонкослойной пластинки) проявляющий растворитель н-гексан -20% этанола проявитель пары иода время 40 мин.

Судя по количеству публикаций, интерес к использованию ГЖРХ в исследованиях метаболизма лекарственных веществ растет [35, 38, 65—71]. Ньюмен и Шенк детально описали методики обработки экстрактов различных тканей перед проведением анализа методом ГЖРХ. Они вводили крысам лекарства, меченные Н, брали у них различные ткани и экстрагировали их. Для очистки экстрактов лимфы, жира и мозга применяли тонкослойную хроматографию и хроматографию на колонках с окисью алюминия. На рис. 7.19 представлены типичные хроматограммы, полученные методом ГЖРХ после такой очистки. Если использовать тритированные соединения с высокой удельной активностью (200 нКи/ /ммоль), то можно определять метаболиты лекарственного вещества в количестве порядка нескольких нанограмм. Использование немеченых носителей позволяет получить улучшенное разрешение и более резкие пики. [c.237]

Рис. 10.4. Разделения полипропиленгликоля (укон 50НВ55) методом колоночной высокого разрешения хроматографии и тонкослойной хроматографии.

Хайфлосуперцел нашел применение и в тонкослойной хроматографии. Смесь этого сорбента с оксидом магния и сульфатом кальция образует прочные слои, элюирование на которых можно проводить с высокой скоростью. Разделение неполярных каротинов на таких слоях протекает с хорошим разрешением [369]. На таких слоях можно, например, за один прием разделить все каротиноиды моркови. Хроматографический анализ пигментов хлоропластов перца apsi um включает две стадии сначала на пластинках с целлюлозой разделяют хлорофиллы и ксантофиллы, а затем смесь каротинов хроматографируют на тонком слое оксида магния и хайфлосуперцела [370]. На слоях из оксида магния элюирование можно вести легким петролейным эфиром. ТСХ на этом сорбенте в сочетании с УФ-детектиро-ванием составляет основу метода количественного определения а- и р-каротинов в биомассе [371]. Для обнаружения небольших количеств р-каротина предложен метод хроматографии в тонком слое, сформированном из смеси карбоната кальция, оксида магния и гидроксида кальция, в системе ацетон — легкий петролейный эфир — хлороформ (5 5 4) [372]. Проведен сравнительный анализ эффективности разделения главных пигментов на слоях из кукурузного крахмала, целлюлозы и микрокристаллической целлюлозы. В системе гептан — этилацетат — пропанол полное разделение было достигнуто на слоях из крахмала [373]. [c.251]

Для тонкослойной хроматографии порфиринкарбоновых кислот были использованы пластинки с целлюлозой, тальком и силикагелем. Целлюлоза и тальк включены в число рассматриваемых в данном разделе сорбентов в основном из-за их исторического значения, а не практической ценности. Судя по нашему опыту, хроматография на силикагеле занимает меньше времени и позволяет достичь более высокого разрешения. Применение ТСХ в клинической практике для определения порфиринов в биологических жидкостях, тканях и фекалиях больных различными формами порфирин произвело переворот в диагностике этих заболеваний [15]. [c.208]

ТСХ пептидов. Хорошие результаты были получены на пластиковых листах и стеклянных пластинках, покрытых тонким слоем порошкообразной целлюлозы, а также на пластинках и пластиковых листах с тонким слоем силикагеля. По сравнению с хроматографией на бумаге продолжительность процесса тонкослойной хроматографии весьма невелика (от 1 до 2 час), образующиеся пятна имеют четкие границы и небольшой размер, что обеспечивает высокое разрешение и чувствительность. Для ТСХ на порошкообразной целлюлозе можно использовать те же системы растворителей, что и для хроматографии на бумаге. Некоторые системы растворителей, рекомендуемые для этого вида ТСХ пептидов, а также для ТСХ на силикагеле, приведены в табл. 6. Системы С, Т, У и Ф предложены Нитецкнм. Систему С применяют для малоподвижных соединений система Т — наилучшая из всех систем и очень удобна для получения двумерных хроматограмм. Она примерно в 3 раза более устойчива, чем системы, содержащие бутанол-1. Система У — очень устойчивая полярная система, она пригодна только для ТСХ (не для хроматографии на бумаге). Система Ф обеспечивает ту же величину подвижности, что и система К, но дает лучшее разрешение и очень удобна для разделения диастереоизомеров. Для нейтральных незащищенных пептидов подвижности в этих системах (относительно обычно используемой системы К) таковы [91] С > Т > > У > К = Ф. Для очень кислых пептидов их относительные подвижности на бумаге и при ТСХ на силикагеле различны на бумаге Т>С>К = Ф У, на силикагеле С > Т > У = К. [c.140]

Тонкие слои. Тонкие слои окиси кремния, кизельгура, окиси алюминия или целлюлозы наносят на стеклянные пластинки так же, как и при тонкослойной хроматографии (разд. 3.2.3). Пластины помещают горизонтально в аппарат для электрофореза, и тонкому слою дают возможность насьггиться буфером за счет диффузии раствора из буферной камеры через соединяющие фитили. Тонкослойный электрофорез (ТСЭ), подобно тонкослойной хроматографии (разд. 3.2.3), проходит быстро и дает хорошее разрешение при высокой чувствительности. [c.122]