Сэнджер

Инсулин, получивший свое название от наименования панкреатических островков (лат. insula—островок), был первым белком, первичная структура которого была раскрыта в 1954 г. Ф. Сэнджером (см. главу 1). В чистом виде инсулин был получен в 1922 г. после его обнаружения в экстрактах панкреатических островков Ф. Бантингом и Ч. Бестом. Молекула инсулина, содержащая 51 аминокислотный остаток, состоит из двух полипептидных цепей, соединенных между собой в двух точках дисульфидными мостиками. Строение инсулина и его предшественника проинсулина приведено в главе 1 (см. рис. 1.14). В настоящее время принято обозначать цепью А инсулина 21-членный пептид и цепью В—пептид, содержащий 30 остатков аминокислот. Во многих лабораториях осуществлен, кроме того, химический синтез инсулина. Наиболее близким по своей структуре к инсулину человека является инсулин свиньи, у которого в цепи В вместо треонина в положении 30 содержится аланин. [c.268]

К описанным модификациям метода двумерного фракционирования олигонуклеотидов, ведущего свое происхождение от метода Сэнджера, мы снова вернемся в конце раздела при сопоставлении методов секвенирования тРНК, а сейчас остановимся на совершенно другом варианте двумерного фракционпрования олигонуклеотидов — с помощью ТСХ в обоих направлениях, т. е. без использования электрофореза. [c.500]

Реагенты, подобные кф1цертрированным кислотам, которые неизбирательно атакуют все пептидные связи, имеют лишь ограниченное значение для расщепления полипептидов с длинной цепью, так как- состав гидролизата по мере удлинения цепи значительно усложняется. Общие вопросы гидролиза полипептидов подробно рассмотрены в обзоре Сэнджера [266]. Следует отметить, что до начала работы по разделению полученной в результате гидролиза смеси пептидов и аминокислот необходимо, чтобы продолжительность гидролиза исследуемого белка или полипептида была оптимальной. [c.177]

В настоящем разделе рассматриваются только те методы, которые обеспечивают ступенчатое отщепление аминокислотных остатков, так что пептидная цепь после отщепления концевого остатка остается незатронутой. Таким образом, из рассмотрения исключается 2,4-динитрофторбензольный метод, предложенный Сэнджером [262]. Этот метод, использовавшийся для получения большей части сведений о М-конце-вых группах пептидов и белков, подробно рассмотрен в ряде обзоров [114, 277, 320]. Не рассматривается также метод расщепления гидразином Ака бори и сотр. [3, 4, 230], позволяющий определять С-концевые аминокислоты. Этот метод в последнее время был усовершенствован [39], так что он стал пригоден для идентификации всех обычно встречающихся аминокислот. [c.238]

Очень успешный метод идентификации N-концевого остатка (разработанный в 1945 г. Ф. Сэнджером в Кембриджском университете) основан на исполь- [c.1048]

Таким путем были установлены структуры окситоцина и а-кортикотро-пина (стр. 1047). Одним из наиболее замечательных достижений в этой области было установление полной последовательности аминокислот в молекуле инсулина, выполненное в Кембриджском университете группой, руководимой Ф.Сэнджером, который за эту работу был удостоен Нобелевской премии в 1958 г. (см. задачу 12, стр. 1067). Число пептидов и белков, структуры которых полностью расшифрованы, постоянно увеличивается сюда относится гемоглобин, содержащий четыре цепи, в каждой из которых имеется более 140 аминокислотных остатков, и химотрипсиноген, цепь которого содержит 246 остатков. [c.1050]

Выдающимся достижением явился синтез пептидного гормона окситоцина, выполненный в Корнелльском медицинском колледже В. Дю Виньо, получившим в 1955 г. Нобелевскую премию за эту и другие работы. В 1963 г. был опубликован полный синтез инсулина, содержащего 51 аминокислоту в последовательности, расшифрованной ранее Сэнджером. [c.1052]

Структура инсулина была определена Сэнджером (разд. 27.9). на основании следующих данных. Используйте их для самостоятельного вывода последовательности аминокислотных остатков в белке. [c.1067]

Большое сходство в химических и физических свойствах между синтетическими полипептидами Фишера и некоторыми белками (протеинами) оказало дальнейшую поддержку предположению, ранее выдвинутому Фишером и независимо от него Хофмейстером в 1902 г. о пептидном строении белков (протеинов). Эта теория предполагала, что молекула белка (протеина) построена только из цепей а-аминокислот (и позже, конечно, были включены а-ими-нокислоты), связанных друг с другом пептидными (амидными) связями между а-амино- и а-карбоксильными группами [см. формулу (1)].Сам Фишер учел, что возможны и другие способы соединения между аминокислотами в молекуле белка (протеина) и добавил к имеющимся сомнениям вопросы о размере и сложности природных белков, что вызвало в период 1920—1940 гг. различные предположения [3] об альтернативных способах связи между остатками аминокислот. Сэнджер [4] писал в 1952 г., что самым убедительным доводом в поддержку пептидной теории строения белков (протеинов) в действительности было то, что с 1902 г.— со времени ее возникновения, не были найдены опровергающие ее факты сам Сэнджер привел одно из первых убедительных доказательств этой теории, установив полную структуру белкового гормона инсулина. [c.218]

Сэнджер с сотр, определили структуру инсулина — первого белка, последовательность которого была расшифрована до того, как [c.256]

Классическую метку — Л -2,4-динитрофенильиую (ДНФ), введение которой было разработано Сэнджером [15] во время исследо- [c.264]

При определении первичной структуры инсулина Сэнджер с сотр. столкнулись со значительными трудностями из-за склонности дисульфидов претерпевать обменные реакции как в кислой, так и в щелочной среде. В сильнокислой среде, используемой для частичного гидролиза, могут протекать реакции по схемам (31), (32). [c.279]

За разработку этого метода Ф. Сэнджер удостоен Нобелевской премии (1958). В 1980 г. он был удостоен второй раз Нобелевской премии вместе с У. Гилбертом и Н. Бергом за разработку метода определения первичной структуры нуклеиновых кислот. [c.53]

В настоящее время выяснение первичной структуры белков является вопросом времени и технического оснащения лабораторий. Полностью выяснена первичная структура многих природных белков и прежде всего инсулина, содержащего 51 аминокислотный остаток [Сэнджер Ф., 1954]. Более крупным белком с выясненной первичной структурой оказался иммуноглобулин, в четырех полипептидных цепях которого насчитывается 1300 аминокислотных остатков. За эту работу Дж. Эдельман и Р. Портер были удостоены Нобелевской премии (1972). [c.56]

Нуклеофильное замещение атома фтора в молекуле 2,4-ди-нитрофгорбензола (реактива Сэнджера) аминогруппой пептида, происходящее в присутствии щелочи, вводит в Ы-конце-вую аминою1слоту 2,4-динитрофенильный остаток 2,4-ДНФ-метку) [c.56]

См. также Бергман (№ 61), Сэнджер (№ 557), [c.496]

Химическая природа. Инсулин является белком (молекулярный вес 6000) Это первый белковый гормон, химическая природа которого расшифрована. Молекула инсулина построена из 2 полипептидных цепей — мономеров, из которых цепь А содержит 21 аминонислотный остаток, а цепь Б—30 аминокислотных остатков. Полипептидные цепи связаны между собой дисульфидными мостиками за счет сульфгид-рильных групп молекул цистеина. Расположение аминокислот в полипептидных цепях А и Б полностью расшифровано Сэнджером, а в 1963 г. другими авторами осуществлен синтез инсулина. [c.95]

По Сэнджеру, молекулярный вес инсулина равен 5733,5. [c.95]

При этом анализу подвергают отщепляющуюся аминокислоту или непосредственно ее фенилтиогидантоин. Указанный принцип положен в основу работы секвенсоров, автоматически определяюш их аминокислотную последовательность в пептидных фрагментах, получаемых ферментативным расщеплением исследуемых белков. По Сэнджеру концевую аминогруппу П. маркируют 1-фтор-2,4-динитробензолом, подвергают П. гидролизу и определяют динитрофенильные производные аминокислот. С-Концевую аминокислоту можно отщепить с помощью карбоксипептидазы. Используют также полный гидразиполиз пептида. При этом все аминокислоты, кроме С-концевой, выделяются в виде гидразидов. Применяют также масс-спектрометрич. определение аминокислотной последовательности в П. Сведения об оптич. чистоте П. могут быть получены исследованием их атакуемости природными ферментами. [c.15]

Для модификации аминогрупп могут применяться реагент Сэнджера [131—133], 1-фтор-2,4-динитробензол и другие алкили-рующие агенты, например моноиодуксусная кислота, ее эфир и амид. Помимо аминогрупп, эти реагенты могут алкилировать остатки цистеина, метионина и гистидина. Однако в обычных условиях проведения реакции они обладают слищком высокой реакционной способностью и не могут применяться для частичной модификации. Были сделаны попытки алкилировать рибо-нуклеазу бромуксусной кислотой в более мягких условиях [134— 136], при этом удалось ввести карбоксильную группировку преимущественно по остаткам гистидина. Хлорангидриды и ангидриды кислот позволяют ацилировать аминогруппы, оксигруппы серина и тирозина, модифицировать карбоксильные группы. Однако обычно они обладают слишком высокой реакционной способностью. Имеются сведения о том [136, 137], что при [c.363]

Одна из вал нейших задач, стоящих перед исследователями, работающими в области химии белков, — выяснение последовательности расположения аминокислотных остатков в белковой молекуле. Это очень сложная, кропотливая, но вместе с тем очень важная работа, так как она дает возможность вплотную подойти к вопросу о химическом синтезе белковой молекулы из составляющих ее аминокислот. Эта задача была впервые решена Сэнджером в 1956 г., когда он полностью раскрыл последовательность расположения аминокислот во всей молекуле белка инсулина—гормона поджелудочной железы. В процессе этого исследования Сэнджер разработал ряд новых методических приемов определения последовательности аминокислот в [c.209]

Над выяснением структурных формул обычных белков работают в настоящее время во многих лабораториях. Удалось, например, полностью установить структуру белка инсулина. Этот белок имеет молекулярный вес 5733, и его макромолекулы состоят из двух коротких цепей, соединенных друг с другом дисульфид-ными мостиками, как это показано на рис. 1. Одна из полипептидных цепей содержит 21, а другая 30 аминокислотных остатков (термин остаток относится к структурному звену —МН—СНН—СО—). Порядок чередования остатков был установлен Сэнджером [c.17]

Период с 1944 по 1954 г. был ознаменован развитием аналитических методов, современной техники разделения веществ, а также выяснением строения белков. Базой для дальнейшего развития и усовершенствования методики синтеза пептидов явилось введение в практику исследовательской работы хроматографии на бумаге, препаративной колоночной хроматографии, значительно более широкое применение электрофореза и противоточ-ного распределения и, наконец, выяснение структуры оксито-цина В. дю Винье и Г. Таппи и установление строения инсулина Ф. Сэнджером. После того как был успешно завершен синтез окситоцина, основные усилия исследователей были направлены на получение других биологически активных полипептидов. Это характерно для химии пептидов и на сегодняшний день. В течение всего лишь нескольких лет некоторые биологически активные полипептиды были синтезированы в таких количествах, что стало возможным проводить их фармакологическое и медицинское изучение. Эти соединения в настоящее время начинают находить терапевтическое при.менение. Синтез аналогов этих пептидов сыграл важную роль в понимании связи между строением и действием биологически активных полипептидов. [c.8]

Для разделения сложных смесей олигонуклеотидов Браунли и Сэнджером [11], а также Фьюком и Бущем [12] разработаны особые методики отпечатков пальцев , которые рассматриваются в конце этой главы. [c.135]

Применение ацетата целлюлозы для двумерного разделения меченых нуклеотидов описано в работах [И, 66]. Сэнджер с сотр. [66] разделял смеси компонентов нуклеиновых кислот из Es heri hia соИ. Сначала проводили высоковольтный электрофорез на 3-сантиметровых полосках ацетата целлюлозы, после чего разделенные компоненты промоканием переносили на ДЭАЭ-бумагу. Затем проводили электрофорез на бумаге. Полученную электрофоретограмму высушивали и авторадиографиро-вали. Таким образом достигалось разделение сложной смеси нуклеотидов. С некоторыми видоизменениями метод использовали и другие исследователи [12, 67]. [c.155]

При расшифровке стрз Ггуры инсулина Сэнджером были использованы оба вида гидролиза — химический и энзиматический. [c.41]

Выше мы уже рассмотрели основные химические методы определения Ы-концевых групп (динитрофторбензольный метод Сэнджера, фенилизотиоцианатный метод Эдмана и пипсилхло-ридный метод). Здесь же только заметим, что наиболее широко для этих целей используются методы Сэнджера и Эдмана. [c.75]

Знание последовательности аминокислотных остатков в пептидных цепях, а также числа и местоположения дисульфидных мостиков позволяют воспроизвести первичную структуру белковой молекулы в целом. Впервые подобного роДа расщифровка была завершена для молекулы инсулина Сэнджером к 1955 г. (рис. 15). [c.87]

Блестящие исследования Сэнджера и его сотрудников по выяснению структуры инсулина навсегда останутся крупной вехой в развитии современной белковой химии. Возможно, что при исследовании строения других белков не будет необходимости во всей совокупности методов, использованных Сэнджером однако можно надеяться, что принципиальная простота подходов, примененных при исследовании инсулина, будет в дальнейшем использована при разработке новых методов. [c.8]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология