Аминокислоты обнаружение свободных

Обнаружение свободных аминокислот [c.169]

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

Ионообменная хроматография на колонках применяется в трех очень важных областях 1) для качественного и количественного аминокислотного анализа пептидов и белков, дающего ценную характеристику молекул его можно использовать Как средство обнаружения некоторых специфических различий среди белков 2) для определения аминокислотного состава биологических жидкостей, который дает не только существенную информацию о наличии свободных аминокислот, но и позволяет проследить за изменениями, происходящими в организме под воздействием многих факторов, таких, как окружающая среда, физиологическое состояние и генетическая конституция 3) для определения первичной структуры белков — чрезвычайно важной задачи биохимии сегодняшнего дня. Многие исследователи занимаются определением аминокислотной последовательности большого числа разнообразных белков. Это дает возможность установить их химическую структуру и изучить ее взаимосвязь с функцией. [c.8]

Для определения размеров полипептидных цепей белковой молекулы разработаны специальные химические методы. Эти методы основаны на использовании особого реагента (динитрофторбензола), который соединяется со свободной аминогруппой аминокислотного остатка на конце полипептидной цепи с образованием окрашенного комплекса этот комплекс можно выделить и идентифицировать после того, как белок подвергнется гидролизу и распадется на составляющие его аминокислоты (в том числе и на концевую аминокислоту с присоединенной к ней окрашенной группой). Так, было показано, что один из типов молекул гемоглобина, обнаруженный в красных кровяных тельцах большинства взрослых людей (называемый гемоглобином А), содержит четыре полипептидные [c.680]

Аминокислоты, пептиды, белки и ферменты образуют группу химически и биологически родственных соединений, которым принадлежит исключительная роль во многих жизненно важных процессах [1, 2]. Биогенная связь этих веществ подтверждается полным гидролизом белков и пептидов, которые распадаются на а-аминокарбоновые кислоты (HjN- HR- OOH). Все аминокислоты можно рассматривать как С-замещенные производные аминоуксусной кислоты. К настоящему времени из гидролизатов белков выделено более 20 аминокислот, которые по конфигурации асимметрического атома углерода принадлежат к 1-стерическому ряду, отличаясь друг от друга в основном остатками заместителей [3-5]. а-Аминокислоты, имеющие цвиттерионную природу, являются наиболее важными и многочисленными среди всех аминокислот, встречающихся в природе. Общее число а-аминокислот, идентифицированных в свободном или связанном виде из живых организмов, исчисляется сотнями, и число их увеличивается [1,2]. Все а-аминокислоты, обнаруженные в белках, за исключением глицина, хиральны [3, 6]. Больщинство других а-аминокислот, обнаруженных в природе, также имеют -конфигурацию а-углеродного атома, однако известны многие природные а-аминокислоты D-ряда [7]. D-ами-нокислоты выделены из микроорганизмов [8, 9], растений [7, 10, 11], грибов [12], насекомых [13] и морских беспозвоночных [14, 15]. Также эти кислоты найдены в белках животных [16] и в пептидах, выделенных из раковых новообразований [17]. Природные галогенированные а-аминокислоты и пептиды редко встречаются в природе, и их можно отнести к новой группе соединений [18-20]. [c.289]

Если необходимо дезаминировать пептид, то каплю исследуемого гидролизата, содержащую 6 н. соляную кислоту, обрабатывают парами азотистой кислоты на политеновой пластинке. С помощью этого метода было показано, например, что грамицидин представляет собой эквимолекулярную смесь пяти различных аминокислот валина, орнитина, лейцина, фенилаланина и про-лина. Было также установлено, что грамицидин 5 является циклопептидом, содержащим только одну свободную аминогруппу и ни одной свободной карбоксильной. Обнаруженная свободная аминогруппа грамицидина 5 находится в боковой цепи орнитина. В продуктах неполного гидролиза грамицидина 5 соляной кислотой были идентифицированы следующие дипептиды а-/-валил-/-орнитин, /-орнитил-/-лейцин, /-лейцил-б/-фенилаланин, -фенил-аланил-/-пролин и два тринептида а-валил-орнитил-лейцин и фенилаланил-пролил-валин. [c.159]

Вследствие рацемизации, происходящей при гидролизе (стр. 174), весьма трудно положительно решить вопрос о том, содержатся ли в белке неприродные изомеры. Прежде всего, обнаружение в гидролизате частично рацемизованной аминокислоты вовсе не является убедительным доказательством того, что в состав нативной молекулы белка входил d-нзомер. Однако более серьезным является то обстоятельство, что при етрочих равных условиях степень рацемизации различна в зависимости от того, находится ли данная аминокислота в свободном состоянии или же она связана пептидной связью. Поэтому тот факт, что какая-либо аминокислота в гидролизате окажется более ращвмизован- [c.110]

Методика анализа свободных аминокислот описана Шустером [79]. На колонке, заполненной лихросорбом ЫНг (размер-частиц 5 мкм), используя градиентное элюирование смесью ацетонитрил— фосфатный буферный раствор, он за 30 мин разделил около 20 аминокислот, входящих в состав растворов для внутривенного введения. Обнаружение свободных аминокислот проводилось по их поглощению при 200 нм, а их идентификация — по времени удерживания. Чтобы подтвердить отнесение пиков, спектры поглощения всех выделенных компонентов сравнивались со спектрами чистых препаратов аминокислот. В этой статье, как и в работах, посвященных анализу аминокислот в виде их производных, содержится утверждение, что картина разделения очень сильно зависит от температуры колонки, а также от условий ее эксплуатации. Согласно данным Шустера, снижение эффективности колонки может привести к тому, что аспарагину, глутамину и глицину на хроматограмме будет соответствовать один пик. Авторы работ [54, 80] исследовали влияние различных факторов на время удерживания компонентов смеси и на разрешающую способность колонки более детально. [c.51]

Существенным и новым по сравнению с эмиссионными хемилюминесцентными спектрами является то, что этот метод выявляет, благодаря первичному фотовозбуждению, те элементы, которые в первом случае как бы остаются в тени. Именно так обстояло дело, как мы знаем, с обнаружением свободных радикалов при ферментативных реакциях, не обладающих без подсвечивания достаточной для митогенетического излучения энергией. Как показывает большой экспериментальный материал, селективные спектры делятся на два основных типа аддитивные и интегральные. Совокупность полос в первых является как бы суммой спектров отдельных, входящих в данную молекулу и связанных с ней функциональных групп — гидроксильной группы, карбонильной группы, аминогруппы. Аддитивные спектры характерны для открытых цепей — спиртов, жирных кислот, аминокислот, пептидов, белков. Интегральные спектры характеризуют молеьсулу как целое, они типичны для цикличесьсих и гетероциклических соединений и для некоторых простых молеьсул (гид роке ил амина, гидразина, формальдегида, муравьиной кислоты). [c.24]

Чрезвычайный интерес вызвало обнаружение в нефти аминокислот или пептидных остатков, распадающихся на свободные аминокислоты при гидролизе выделяемых из нефти концентратов ванадилпорфириновых комплексов [389—391]. Подробнее эти соединения будут рассмотрены при обсуждении азотистых компонентов нефти. [c.104]

По реакции с люминолом определяют неметаллы и органические вещества с пределом обнаружения 10 —10 г/л неорганические и органические сульфиды, 8-гидроксихинолин, аминокислоты, аминофе-нолы и др. Люминол применяют как индикатор в ти-триметрии, например в комплексонометрии к раствору соли цинка или кадмия добавляют избыток титрованного раствора динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, который затем оттитро-вывается раствором соли меди известной концентрации в присутствии люминола и Н2О2 сначала медь связывается в прочный комплекс, а в точке эквивалентности свободные ионы меди катализируют хеми- [c.366]

К ряду основных аминокислот относится орнитин HjN- Hj- Hj- Hj-- H(NH2)- 00H (наличие его в белках спорно). Орнитин, как н цитруллин H2N- O-NH- H2- H2- Hj H(NH2)- OOH, — промежуточный продукт цикла мочевины он широко распространен как свободная аминокислота, а также входнт в состав различных антибиотиков. Как составная часть белка орнитин до сих пор был обнаружен только в гидролизатах некоторых морских водорослей. [c.23]

Исследования функциональной роли рибосом щли параллельно с их обнаружением и структурным описанием. Первой убедительной демонстрацией того, что именно рибонуклеопротеидные частицы микросом ответственны за включение аминокислот в новосинте-зированный белок, были эксперименты П. Замечника с сотрудниками (США), опубликованные в 1955 т. За этим последовали эксперименты из той же лаборатории, показавшие, что свободные рибосомы, не прикрепленные к мембранам эндоплазматического ретикулума, также включают аминокислоты и синтезируют белок, освобождающийся затем в растворимую фазу (1957). Функции бактериальных рибосом были предметом интенсивных исследований группы Р. Б. Робертса (США) К. Мак Киллен, Р. Б. Робертс и Р. Дж. Бриттен в 1959 г. окончательно установили, что белки синтезируются в рибосомах и затем распределяются по другим частям бактериальной клетки. [c.50]

Для обнаружения N-мeтилaминoки лoт (которые обычно дают очень слабую окраску с нингидрином) в присутствии свободных аминокислот используют специальный реагент. Смешивают равные объемы 0,33%-ного раствора нингидрина в трет-бутиноле и смеси ледяная уксусная кислота - вода - пиридин (1 5 5). Опрыскивают и нагревают 10-15 мин при 100-110°С. Первичные амины и Н-метиламинокислоты дают пурпурные пятна сравнимой интенсивности. При опрыскивании водным раствором нингидрина, приготовленным путем растворения нингидрина в н-бутаноле, насыщенном водой и содержащем 2% уксусной кислоты, N-мeтилaминoки лoты дают пятна слабой интенсивности. [c.390]

Исторический очерк. Первое производное пептида было получено синтетически в 1882 г. Т. Курциусом при обработке серебряной соли глицина бензоилхлоридом в продуктах ревкции наряду с другими соединениями был обнаружен кристаллический М-бензоилглицил-глицин. Одиако отцом пептидного синтеза считают Э. Фишера, впервые получившего в 1901 г. свободный глицилглицин при частичном гидролизе дикетопиперазинов (последние легко образуются из эфиров аминокислот). Э. Фишер первым понял значение пептидного синтеза как средства доказательства строения белка и необходимость разработки специфических методических приемов. [c.124]

При кипячении белков в присутствии сильных кислот и щелочей ковалентные связи между аминокислотами, из которых построены белковые цепи, разрываются. Образующиеся при этом свободные аминокислоты представляют собой сравнительно небольшие молекулы с известной структурой. Первая аминокислота, аспарагин, бьша открыта в 1806 г. Последним из 20 обнаруженных в белках аминокислот оказался треонин, который удалось идентифицировать лишь в 1938 г. Каждая аминокислота имеет тривиальное (традиционное) название, происходящее иногда от источника, из которого аминокислота бьша впервые вьщелена. Например, аспарагин, как нетрудно догадаться, Bnej bie обнаружили в аспарагусе, а глутаминовую кислоту—в клейковине (по-английски gluten ) пшеницы глицин бьш назван так за его сладкий вкус (от греч. glykos -сладкий). [c.108]

Около половины небелкового азота представлено аспарагином. В последнее время обнаружен такЖ е глютамин. Азот этих двух соединений составляет около 40% всего азота. Количество азотистых оснований находится в пределах 25% общего азота. В свободном состоянии, кроме аспарагина и глютамина, в клубнях в небольших количествах содержатся следующие аминокислоты и азотистые основания аргинин, лизин, лейцин, триптофан, гистидин, холин, ацетилхолин, тригонелин, аллантоин, ксантин, гипоксантин, гуанин, аденин, кадаверин, глютатион. [c.15]

Ацетат цинка и изатин растворяют в изопропаноле, нагревая смесь в водяной бане при 80° после этого реактив следует хранить на холоду. После опрыскивания хроматограммы одним из указанных реактивов бумагу прогревают при 80—85° в течение 30 мин. Избыток изатина можно быстро отмыть водой. Реактиве пиридином дает с аминокислотами разнообразное окрашивание (табл. 2), но с кислым реактивом окрашивание бывает более интенсивным (чувствительность для пролина — 3-15 молъ1см ). 0,2%-ный раствор изатина в н-пропаноле был использован для обнаружения пролинсодер-жащих пептидов, в которых остаток пролина несет свободную имино-группу (Монье и Ютис [33]). [c.25]

Для обнаружения пятен применяют восстановленный нингидриновый реагент Лонга и др. [80]. После опрыскивания реагентом бумагу нагревают при 110—115° в течение 1—3 мин и оставляют при комнатной температуре на ночь. Пятна дикарбоксиметиламинокис-лот окрашиваются в фиолетовый цвет, пятна монопроизводных — в ярко-розовый, а свободных аминокислот — в темный коричневоголубой. [c.179]

Обмен в связях N —Н дает Особенно наглядное подтверждение наших представлений. Он идет неизмеримо быстро в аммиаке 110], аминах, аминокислотах и иминах [И], где около атома азота имеется свободная пара. Наоборот, он сильно замедлен, если эта пара блокирована. Медленный обмен был обнаружен в группе —NH3 ряда аминокомплексов [121, а также в ионе NH4" солей аммония, как нашли Л. В. Сулима и автор [13]. В последней работе было показано, что он идет полностью или в основном не в этом ионе, а в находящемся с ним в гидролитическом равновесии свободном NH3. Каплан и Вильцбах [141 подтвердили и распространили наши результаты на соли замещенного аммония. Они нашли сильно замедленный обмен водорода на тритий между С2Н5ОТ и замещенными солями аммония, тогда как в связях N —Н нитрата [c.68]

Первое свидетельство в пользу этого предположения он представил уже в 1902 г. Докладывая немецкому обществу естествоиспытателей результаты проделанных совместно с П. Бергелем опытов, он сообщил, что среди продуктов обработки фиброина шелка дымящейся соляной кислотой, трипсином и баритовой водой был обнаружен глицил-аланин [185]. Несколько позднее, в 1906 г., это, первоначально оспариваемое многими учеными открытие, было вновь подтверждено. Тогда среди продуктов гидролиза фиброина шелка, кроме глицил-аланина, был открыт глицил-L-тиpoзин [181]. Из гидролизата эластина был выделен пептид гликоколла и лейцина. Тогда же Фишер и Абдергальден разработали первый метод, позволявший определять аминокислотные остатки, имеющие в своем составе свободную аминогруппу, т. е. N-концевые аминокислоты, по современной терминологии. Значение этого открытия трудно переоценить. Уже в 1907 г. Фишер дал принципиальное решение вопроса о последовательности аминокислотных остатков в полипептидной цепи. Для того чтобы определить положение аминокислоты в дипептиде, он предложил блокировать аминоконец пептида -нафталинсульфо-нильной группой (которая не отщеплялась при гидролизе пеп- [c.87]

Большим преимуществом двухмерной распределительной хроматографии является возможность обнаружения больших количеств компонентов в исследуемой смеси. Например, на двухмерной хроматограмме, проявленной раствором нингидрина, отмечается положение шестидесяти различных веществ. Метод одномерной распределительной хроматографии был использован Г. А. Критским для обнаружения нуклеиновых оснований ами-лофосфазы (фосфорилазы), а также инозина. Т. А. Федорова и А. С. Коникова использовали этот метод для определения свободных аминокислот в различных органах и тканях. [c.163]

Контроль (мониторинг) процесса брожения заключается в ежедневных замерах содержания сахаров и температуры. Кроме того, вина следует дегустировать на предмет выявления нежелательных вкусов и ароматов. В сусле с низким содержанием свободного аминного азота в ходе брожения из-за протеолитической активности дрожжей, которым для размножения необходим источник азота, может продуцироваться сероводород, и в результате происходит расщепление серосодержащих аминокислот [47]. В таких случаях обнаружения сероводорода рекомендуется внести в самом начале брожения 200 мг/л диаммонийфосфата и еще 100 мг/л — в ходе брожения. Добавки диаммонийфосфата эффективны только в ходе брожения. Если сероводород обнаруживается и в конце брожения, то перед помещением вина на хранение для утилизации сернокислой меди рекомендуются обработка его SOj и умеренное аэрирование. В вине без подобной обработки под действием сероводорода будут продуцироваться более стабильные этил- или диэтилмеркаптаны, которые характеризуются более низким ароматическим порогом и которые, следовательно, легче обнаружить (эти меркаптаны имеют луковый или чесночный запах). [c.137]

Дженкинсон и Тинслей [19] идентифицировали с помощью хроматографии на бумаге состав аминокислот, гидролизат которых был получен в ходе изучения аминокислот растительного происхождения, выделенных из компоста. Десять мл гидролизата, содержавшего приблизительно 1 мг связанного азота, запаривали досуха при пониженном давлении, растворяли в 5 мл воды и снова упаривали досуха. Остаток растворяли в 1,5 мл воды и центрифугировали. Осветвленную жидкость в количестве 0,04 мл наносили на бумагу Ватман № 1. Разделение проводили элюентом, предложенным Вольфом [20]. Хроматограмму проявляли, окуная лист в 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Были идентифицированы следующие аминокислоты цистеиновая, аспарагиновая, глутаминовая, лизин, аргинин, глицин, гистидин, серии, аланин, тирозин, пролин, валин, треонин, изолейцин, лейцин и фенилаланин. Метионин не поддавался определению, поскольку его трудно было отделить от глицина в описанных системах растворителей. Метио-нин-5-оксид тоже не отделялся от валина. Хроматограммы опускали в 0,1%-ный раствор изатина в ацетоне для обнаружения про-лина и подтверждения отсутствия оксипролина. Детектирование и определение содержания пептида с остатком лизина в середине цепи проводили с помощью 2,4-динитрофторбензола [21]. Эта реакция протекает, поскольку е-аминогруппа, в отличие от а-амино-группы лизина, свободна и может вступать в реакцию. [c.306]

Другие аминокислот,ы. Из К-пютиламинокислот в отдельных случаях в растениях был обнаружен саркозин. Наряду с ориитппом, в растениях содержится его N-ацотилпронзводное. Л[и[)око распространен цитруллин, который, нанример в ольхе, образует одну пз основных небелковых форм источника азота. Гомосерин был найден в свободном состоянии кроме того, он образуется в результате гидролиза азетидин-2-карбоновой кпслоты. [c.441]

Вышеописанный метод анализа свободных аминокислот экономит время и труд исследователя и является более строгим, чем методы, основанные на получении производных аминокислот или на их экстракции, однако чувствительность его явно недостаточна для обнаружения небольших количеств аминокислот в биологических препаратах. Именно поэтому аминокислоты чаще всего определяют в виде их метилтиогидантоиновых [81], фенилтиогидантоиновых (ФТГ) [82], диметиламинонафталин-сульфонильных (дансильных, или ДНС) [83], 2,4-динитрофе-нильных (ДНФ) [84], 2,4,6-тринитробензолсульфонильных [c.51]

Наличие дикетопиперазиновых колец в белковой молекуле, обнаруженное Зелински м, не сразу стало общепризнанным, так как дикетопиперазины могли образоваться из свободных аминокислот и таким образом не быть одним из продуктов гидролитического распада белковой молекулы, а могли оказаться вторичным образованием, возникающим после того, как молекула белка распалась на отдельные аминокислоты. Однако Зелинский и его сотрудники рядом тщательных исследований доказали, что дикетопиперазиновые кольца действительно являются участками белковой молекулы. [c.322]

Структура белков, как несомненно установлено, характеризуется двумя особенностями наличием составляющих их аминокислотных остатков и повторением пептидных связей. Белки, которые не содержали бы других типов ковалентных связей, должны были бы представлять собой гигантский полимер различно замещенных остатков глицина и иметь по одной а-аминогруппе и а-карбоксильной группе. Методы обнаружения этих двух групп должны быть в этом случае специфичными для конечных аминокжлот (заканчивающихся свободной аминогруппой) либо для конечных ашшокжлот (заканчивающихся свободной карбоксильной группой) и не для каких-либо других аминокислот. Такие простые полипептиды, однако, не соответствуют строению многих белков. [c.216]

Успехи в разработке методов изучения белков, в особенности хроматографического метода, позволили Сэнгеру установить строение инсулина. Этому способствовала также обнаруженная им реакция, о которой говорилось выше динитрофе-нильная группа (ДНФ) способна присоединяться к свободным аминогруппам с образованием желтого соединения. ДНФ-группа остается присоединенной к аминокислотному остатку даже после гидролиза, который проводят с целью расш епления пептидов это дает возможность идентифицировать концевой остаток аминокислоты. Применив ДНФ-ме-тод, Сэнгер первым показал, что молекула инсулина состоит из двух цепочек, которые удерживаются одна около другой дисульфидными (3 — 8) связями остатков цистина. Эти связи можно разрушить мягким окислением. Таким способом были получены обе ненарушенные цепочки было доказано, что в одной из них содержится 21 аминокислота, а в другой — 30. Каждая цепочка была подвергнута кислотному гидролизу с образованием небольших фрагментов, аминокислоты которых были определены хроматографичрски. Концевые аминокислоты каждого фрагмента были идентифицированы ДНФ-методом. Постепенно расщепляя цепочки на множество мелких пептидов и определяя содержащиеся в них аминокислоты и последовательность их расположения, Сэнгеру ну- [c.319]

АТФ-зависимая модификация белков-субстратов может осуществляться при участии белкового фактора протеолиза — уби-хитина. Этот фактор обнаружен в клетках самого разного происхождения. Предполагается, что в присутствии АТФ ковалентно связываются несколько молекул убихитина с молекулой белка-субстрата. Модифицированный белок становится чувствительным к внутриклеточным протеолитическим ферментам, которые расщепляют его до свободных аминокислот. У бихитин играет при этом каталитическую роль (А. Hershko et al., 1980). Возможно, что действие его зависит от низкомолекулярных эффекторов. [c.51]

Смотреть страницы где упоминается термин Аминокислоты обнаружение свободных: [c.311] [c.404] [c.408] [c.819] [c.525] [c.75] [c.203] [c.819] [c.107] [c.101] [c.143] [c.381] [c.83] [c.54] [c.211] [c.282] [c.393] [c.82] [c.451] [c.172] [c.91]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология