Белок полосы

Характер расположения в мембране того или иного белка можно определить несколькими способами. Один из них основан на том, что меченные (флуоресцентными красителями или радиоактивными изотопами) водорастворимые реагенты не способны проникать через мембрану и поэтому ковалентно связываются со специфическими группами только на ее наружной стороне. После этого мембраны растворяют, белки разделяют методом электрофореза в полиакриламидном геле, а меченые белки идентифицируют либо по радиоактивности (радиоавтография гелей), либо по флуоресценции в ультрафиолетовом свете. Используя такое направленное мечение, можно определить, как конкретный белок (полоса в геле) ориентирован в мембране если он метится одновременно и на внешней стороне (вместе с нативными клетками и тенями без разрывов), и на цитоплазматической стороне (вместе с замкнутыми вывернутыми наизнанку пузырьками), то это, несомненно, трансмембранный белок. Альтернативный подход состоит в обработке либо наружной, либо внутренней поверхности мембраны не проникающими через нее протеолитическими ферментами если какой- [c.363]

Белок полосы 3 можно зарегистрировать в виде внутримембранных частиц с помощью электронной микроскопии в сочетании с замораживанием - скалыванием. В этом случае клетки замораживают в жидком азоте и полученный кусочек льда раскалывают острым ножом. Плоскость скола обычно проходит через гидрофобную сердцевину мембранного бислоя, разделяя его на два монослоя. Затем на образовавшиеся поверхности напыляют платину и рассматривают платиновые реплики [c.368]

Эритроцитарный N белок полосы 111 [c.136]

Эритроцитарный N белок полосы III [c.136]

Однако экспериментальные данные, полученные Шубертом с соавторами [30, 57] (см. также обзор [43]), показали, что белок полосы 3 способен к образованию ассоциатов большего размера, чем димер. Тип ассоциации белка полосы 3 пока не известен. В соответствии с представлениями о структуре интегральных мембрано-связанных белков, изложенными в предыдущей главе, мы полагаем, что ассоциация белка полосы 3 ведет к образованию замкнутых структур, а именно к образованию тримера димеров (то есть гексамера). [c.178]

РА8-3 — последний существенный мембранный компонент. Это гликопротеид с пептидной составляющей, имеющей мол. массу примерно 25000. Вероятно, РА8-3 — полу-интегральный белок, т.е. белок, легче экстрагируемый из мембраны, чем РА8-1 и белок полосы 3. [c.230]

Естественно, что любая клеточная мембрана благодаря протеканию разнообразных метаболических процессов, в частности, связанных с превращением липидов, отличается по структуре от идеальной искусственной бислойной мембраны. Помимо метаболитов фосфолипидов и жирных кислот поверхностные мембраны содержат интегральные белки, некоторые из которых, являясь селективными ионными порами, существенно снижают величину электрического сопротивления бислоя. В частности, высокая проницаемость для хлора свойственна эритроцитарной мембране. Это объясняется тем, что основной интегральный белок мембраны эритроцитов белок полосы III) выполняет функцию анионного канала. [c.36]

Белок полосы 3 -Ь актин Актин Актин [c.54]

Е. Белок полосы 3 эритроцитов человека, который служит переносчиком , осуществляет сопряжение транспорта ионов С1 [c.57]

В. Для того чтобы при помощи этого основного экспериментального подхода определить, какие из белков эритроцитов пронизывают мембрану, необходимо приготовить вывернутые наизнанку пузырьки. Это можно сделать путем гомогенизации теней эритроцитов. В среде определенного ионного состава образовавшиеся мембранные фрагменты замыкаются. Если вывернутые пузырьки обработать проназой, то подвижность белков полосы 3 и гликофорина меняется. Эти результаты вместе с другими, приведенными выше, указывают на то, что белок полосы 3 и гликофорин выступают на поверхность мембраны эритроцитов с обеих ее сторон, внутренней и наружной, следовательно, они должны быть трансмембранными белками. [c.317]

Белок полосы 3 = 9 х 10 молекул/клетку Гликофорин = 2,3 X 10 молекул/клетку [c.317]

Таким образом, белок полосы 3 занимает около четверти поверхности эритроцита. Этот до некоторой степени удивительный результат согласуется с данными электронной микроскопии, полу- [c.317]

Белок полосы III из мембраны эритроцитов человека представляет собой трансмембранный белок с молекулярной массой около 100 кДа (примерно 800 аминокислотных остатков). Это транспортный белок, две молекулы которого образуют анионный канал для ионов СГ и НСО3, пассивно перетекающих через мембрану в соответствии с градиентами их концентраций [242-244]. Полипептидная цепь белка в а-спиральной конформации несколько раз пронизывает бислой около трети его цепи с N-конца помещена в цитоплазму, а короткий С-концевой участок расположен во внеклеточном пространстве (рис. 1.6). Для того чтобы понять механизм функционирования транспортного белка полосы III, как и механизмы действия других мембранных белков, необходимо знать трехмерную структуру молекулы в условиях липидного бислоя. Для получения такой информации требуется, на первый взгляд, почти невозможное. Во-первых, необходимо отделить трансмембранный белок от липидов и других мембранных белков, не повредив его молекулярной трехмерной структуры, что очень трудно. Во-вторых, из выделенных белковых молекул следует получить, не нарушив их пластической, легко деформирующейся при изменении внешних условий структурной организации, высокоупорядоченный монокристалл требуе-мых размеров, что не всегда удается даже в случае водорастворимых [c.58]

В эритроцитах комплекс ферментов гликолиза формируется на внутренней поверхности плазматической мембраны [36]. Роль якорной площадки, обеспечивающей фиксацию метаболона на мембране эритроцитов, играет белок полосы 3 [49] — интегральный мембрано-связанный гликопротеин с молекулярной массой 93 кДа, основной функцией которого является транспорт анионов через мембрану эритроцитов [62]. (Белок полосы 3 способен осуществлять транспорт внутрь эритроцита и одного из интермедиатов гликолиза — фосфоенолпирувата [37].) Многие исследователи полагают, что белок полосы 3 существует в мембране преимущественно в димерной форме. [c.178]

Белок полосы 3 способен взаимодействовать с ионами Са + J59], Концентрация ионов Са + в эритроцитах составляет 10— 20 мкМ [38]. Внутриклеточная концентрация Са + может повышаться в ответ на связывание гормонов и нейромедиаторов соответствующими рецепторами, встроенными в мембрану эритроцитов. Например, Танг и соавторы [70] наблюдали увеличение внутриклеточной концентрации ионов Са + при связывании холинэргического агониста карбахола мускарин-чувствительными холинорецепторами мембраны эритроцитов человека (максимальный эффект, составляющий 250% от исходного уровня Са +, наблюдался между 25 и 30 с после добавления карбахола). [c.190]

На долю белка полосы 3 приходится около 25 % общего количества мембранных белков эритроцитов человека. Этот белок имеет два высокоспециализированных домена. С-концевой домен встроен в липидный бислой мембраны и отвечает за перенос хлорид-, бикарбонат-, фосфат-анионов, поэтому белок полосы 3 называют анионным обменником. Его цитоплазматический N-концевой участок представляет собой полипептид с молекулярной массой 43 кДа, который может быть отщеплен от мембраны протеолитическими ферментами. Эта область белка полосы 3 способна связывать анкирин, белки полос 4.1 и 4.2, гемоглобин, некоторые гликолитические ферменты. К нему могут присоединяться и другие внутриклеточные белки и ферменты, например, аденилатциклаза. [c.35]

Тени эритроцитов, полученные путем гипоосмотического гемолиза и отмытые от гемоглобина в изотоническом буфере, содержат около 50 % белков, 43 % липидов и 7 % углеводов. Белковые компоненты мембраны были идентифицированы методом электрофореза в ПААГ в присутствии додецилсульфата натрия. В соответствии с локализацией их подразделяют на периферические и интегральные (см. главу 1). Периферические белки расположены на поверхности мембраны и им соответствуют полипептидные полосы 1, 2, 4, 5 и 6. Интегральные белки погружены в липидный бислой и в некоторых случаях пронизывают его. Основным интегральным белком является белок полосы 3, осуществляющий транспорт анионов через мембрану. Его М-конец находится с цитоплазматической стороны, а С-конец погружен в бислой с наружной стороны мембраны. Периферические белки взаимодействуют друг с другом, образуя двумерный каркас, выстилающий внутреннюю поверхность эритроцитарной мембраны, который называют мембранным скелетом. Он содер- [c.230]

Известно, что при температурах, близких к физиологическим, обмен воды и анионов в клетке протекает за 100—200 мс и осуществляется через белок полосы III. При повышении осмотической активности среды вслед за выходом воды клетку покидают анноны С1" в обмен на НСО3- и ОН внешней среды, что ведет к защелачиванию цитоплазмы и изменению трансмембранного потенциала. [c.45]

Увеличение трансмембранного потенциала приводит к возрастанию переноса анионов через белок полосы III, реализуя феномен slippage — временного конформационного дефекта переносчика, при котором возможно движение ионов в одном направлении. Следовательно, уже на этапах уравновешивания клеток с криопротекторами создаются условия для формирования указанны. дефектов. [c.45]

Белки, примыкающие к мембране с цитоплазматической стороны, относятся к цитоскелету клетки (см. разд. 1.3). Строго говоря, они не являются компонентами мембраны. Но они могут прикрепляться к мембранным белкам. Так, белок полосы 3 эритроцитарных мембран объединяется в ансамбли с молекулами спектрина через специальный низкомолекулярный белок анкерин. Микротрубочки и микрофиламенты цитоскелета обеспечивают противодействие клетки изменению ее объема и создают эластичность. Основной белковый элемент цитоскелета — тубулин — способен агрегировать, образуя трубчатые структуры. Связь белков цитоске-дета с мембраной не постоянна. [c.23]

Функции ряда белков установлены. Наибольшая фракция — полоса 3 — представлена интегральным белком гликопротеином с молекулярной массой 90 кДа, который взаимодействует с мембраной и одновременно обеспечивает транспорт ионов через бислой, а также связывание ряда цитоплазматических ферментов. Белок полосы 3 через анкерин (полоса 2,1) взаимодействует со спект-рином — основным белком цитоскелета, составляющим двумерную сеть, к которой прикрепляется актин. При электрофорезе актин выявляется в полосе 5. Белки полос 8, 9 и 10 относятся к семейству гликофоринов (см. рис. 23). [c.56]

Белок полосы 5 — это актин или актиноподобный белок. Он имеет мол. массу 45000 и может образовывать гомополимеры. У многих исследователей сложилось впечатление, что спектриновые и актиновые компоненты связаны между собой и образуют фибриллярную сетку, выстилающую всю клеточную мембрану (что схематически показано на [c.229]

Белок полосы 6 — глицеральдегид-З-фосфат—дегидрогеназа. Этот белок изображен на рис. 4.20,А рядом с белком полосы 3 (интегральным), но некоторые недавно полученные данные позволяют считать, что на самом деле он связан только со спектрином. О полосах 4,1 и 4,2 почти ничего не известно. [c.230]

Белок полосы 3 и РА8-1 — это наиболее важные интегральные мембранные белки. Компонент 3 — гликопротеид, содержащий примерно от 5 до 8 % углеводов. Он изображен в виде димера, так как в относительно мягких условиях в нем образуются поперечные сшивки. На основании дану1ых по химической модификации можно полагать, что компонент 3 — трансмембранный белок. Он может играть роль в переносе анионов или глюкозы. [c.230]

Для определения того, с какой стороной плазматической мембраны связаны основные мембранные белки-спектрин, белок полосы 3 и гликофорин, первоначально применяли ферментативный гидролиз теней эритроцитов. В этих опытах использовали сиалидазу, которая отщепляет остатки сиаловой кислоты от белка, и прона-зу-для расщепления пептидных связей. Белки из нормальных теней и из теней, обработанных ферментом, разделяли с помощью электрофореза в ДСН-полиакриламидном геле, а затем окрашивали на белки либо на углеводы (рис. 6-6). [c.53]

Белок полосы 3 4- анкирин Анкирин Белок полосы 3 -Ь анкирин [c.54]

А. Отсутствие окраски на сиаловую кислоту после обработки сиалидазой указывает на то, что этот углевод экспонирован на поверхности. Он присоединен к гликофорину, следовательно, гликофорин также выступает на наружную поверхность. Этот вывод подтверждается результатами гидролиза полипептидной цепи про-назой, в результате которого окрашивания реактивом Шиффа не происходит. Результаты обработки проназой показывают, что и белок полосы 3 также выступает на поверхность клетки. В этом случае появление новой белковой полосы с молекулярной массой около 70000 дальтон позволяет сказать, что фрагмент белка полосы 3 с молекулярной массой около 30000 дальтон экспонирован на поверхности. Ни в том, ни в другом случае ферментативного гидролиза обе полосы спектрина не были затронуты, что свидетельствует об отсутствии спектрина на наружной поверхности мембраны. [c.316]

Присутствие обоих белков на дне пробирки, как указано для смесей 3, 4 и 6 в табл. 6-4, свидетельствует о взаимодействии между этими белками. Судя по результатам опытов с двойными смесями, четыре указанных белка, возможно, соединены в такой последовательности белок полосы 3-анкирин-спектрин-актин. В МБК (см. рис. 6-26) графически изображены связи этих молекул в образуемой ими сети цитоскелета на цитоплазматической стороне мембраны эритроцитов. В действительности взаимодействие между актином и спектрином слишком слабое, чтобы его можно было определить таким образом, если только не будет добавлен третий белок белок полосы 4,1. [c.318]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология