Электрофорез блок лок-электрофорез

Различают свободный электрофорез и электрофорез в поддерживающих средах. При свободном электрофорезе изучаемую смесь белков помещают в буферный раствор, контактирующий с электродами. Установка для свободного электрофореза сложна она имеет фотооптическую систему для регистрации результатов разделения белковой смеси. Второй тип электрофореза предусматривает использование поддерживающих сред (специальной хроматографической бумаги, ацетатной целлюлозы, агарового или крахмального геля и т. п.), которые сначала пропитывают буферными растворами, а затем помещают на них исследуемую белковую смесь. Концы бумажных полос, агаровых или крахмальных блоков и т. п. контактируют обычно с буферным раствором, в который погружены электроды, соединенные с источником постоянного электрического тока (рис. 95 [c.218]

Электрофорез в блоке. В качестве носителя используют крахмал, который формируют в виде блока, помещают на лоток, соединенный с двумя электродными сосудами, заполненными буферным раствором. Раствор исследуемого препарата замешивают на сухом крахмале и вносят в узкую поперечную траншею, сделанную в середине блока. После прекращения электрофореза блок разрезают на поперечные доли, из каждой элюируют и количественно определяют исследуемое вещество. Метод применяется для разделения веществ с молекулярной массой выше 30 ООО, так как вещества с меньшей молекулярной массой проникают и адсорбируются внутри крахмальных зерен. [c.146]

Выделение фракций. Закончив электрофорез, блок извлекают из ванны и, слегка подсушив, разрезают на фрагменты шириной 1 см. Каждый фрагмент переносят в центрифужную пробирку соответствующего размера и размешивают с 3 мл буферного раствора. Осадок крахмала отделяют центрифугированием, а в надосадочной жидкости определяют содержание белка и на основании этих данных строят кривую фракционирования. В соответствии с этой кривой нужные фракции объединяют. [c.84]

После проведения электрофореза блок разрезают на части и, обрабатывая каждую часть небольшим количеством буфера, вымывают белок. Таким методом обычно достигается не очень хорошее разрешение, как об этом уже говорилось выше, и оно редко бывает лучше, чем при ионообменной хроматографии. Вместе с тем белки в данном случае все время остаются в растворе и потому в меньшей степени подвергаются вредным воздействиям. [c.218]

Суспензию гранул крахмала (или стеклянного порошка, силикагеля, целлюлозы, поливинилхлорида или агара) в буфере выливают в большой прямоугольный сосуд, в каждый конец которого вмонтированы электроды. Образец вводят в желобок, получаемый при удалении крахмала вблизи одного из электродов, смешивают раствор белка с крахмалом и закрывают желобок. После электрофореза блок вынимают и элюируют каждую секцию. [c.243]

Препаративный электрофорез в больших масштабах 243 Блок-электрофорез 243 [c.577]

Электрофорез в гелях- применяют гл.обр. для разделения высокомол. соед., напр, белков. Для этого обычно в виде блоков и колонок используют гели крахмала и полиакриламида. Адсорбция разделяемых в-в и электроосмос в этих материалах незначительны. [c.437]

Получение нитрила фенилуксусной-1-С кислоты и фенетил-амина-а-С этим методом при проведении реакции с количествами веществ порядка нескольких миллимолей описано Блоком [4]. Приведена схема прибора для микроперегонки и показано с помощью бумажной хроматографии и электрофореза на бумаге, что конечный продукт реакции (выход 15,4%) однороден. [c.597]

Электрофорез продолжается 6 ч при 140 В и 70 мА. Закончив электрофорез, крахмальный блок горизонтально разрезают на две половины, одну из которых окрашивают амидовым черным 10 В (см. стр. 87). [c.81]

Методика. Закончив электрофорез, крахмальный блок горизонтально разрезают на две половины. Одну половину окрашивают обычным образом, другую переносят на стеклянную пластинку и располагают колонки крахмала так, как показано на фиг. 9. Затем вокруг них наливают горячий раствор агара (приготовление см. на стр. 127), при застывании которого образуется слой толщиной [c.82]

Препаративный электрофорез в крахмальном блоке. Принцип метода. Под влиянием электрического поля происходит миграция белков в крахмальном блоке, в результате которой белки разделяются, а после разделения их можно элюировать из крахмала. [c.83]

Аппарат для электрофореза в крахмальном блоке. В продаже имеется ряд специальных аппаратов для электрофореза в крахмальном блоке. Вместе с тем некоторые изменения конструкции позволяют приспособить для этой цели почти любой лабораторный прибор для электрофореза. Аппарат для электрофореза в крахмальном блоке имеет а) резервуары для буферного раствора и электродов (см. стр. 46), б) ванну для крахмального блока, которую можно сделать самостоятельно следующим образом. Вырезают две одинаковые пластинки из плексигласа (например, размером 50 х 13 х Х0,5 см). По кромке одной из них наклеивают плексигласовый бортик высотой 0,5 см. Вторая пластинка служит крышкой для этой ванны. По краям пластинок на расстоянии примерно 10 см одно от другого высверливают отверстия для того, чтобы крышку и ванну можно было скрепить винтами. [c.83]

Электрофорез. Смоченные фитили обеспечивают контакт в электрической цепи крахмального блока с буферным раствором в резервуарах аппарата. Систему на 15 мин оставляют для уравновешивания и затем проводят электрофорез при напряжении 300 В и силе тока 30 мА в течение 24—30 ч, желательно с охлаждением. [c.84]

Электрофорез. При толщине блока полиакриламидного геля 6 мм электрофорез продолжается 36 ч при напряжении 100 В и силе тока 25—30 мА. За это время белки успевают мигрировать на расстояние до 23 см. После окончания электрофореза сосуд, содержащий гель, вынимают из прибора, осторожно снимают крышку [c.87]

Сочетание электрофореза и электрофокусирования в геле оказалось в ряде случаев удобным методом двумерного анализа белка. Множество компонентов, присутствующих в сыворотке крови, не могут быть однозначно идентифицированы каким-либо одним методом. Их вначале разделяют электрофокусированием в столбике геля, а затем электрофорезом в перпендикулярном направлении в блоке геля [86, 88, 91]. Полученная таким путем двумерная карта (рис. 17) используется при диагностике заболеваний. Этот метод, называемый также методом белковых [c.337]

В настоящее время метод электрофореза на бумаге и в агаровых блоках особенно часто используется в. медицине для изучения фракционного состава белков сыворотки и плазмы крови. Подробнее этот вопрос рассматривается на стр. 477. Техника электрофореза белков плазмы крови излагается в практических руководствах по биохимии. [c.23]

Электрофорез. Как указывалось выше, зонный электрофорез белковых смесей с использованием емкого носителя, обычно крахмальных блоков, обладает исключительно высокой разрешающей способностью и позволяет почти количественно выделить нужный белок. Эта особенность метода зонного электрофореза делает его исключительно эффективным при решении проблемы очистки белков. [c.80]

Электрофорез в пористой среде можно вести как в горизонтальном, так и в вертикальном направлении. В первом случае часто говорят об электрофорезе в блоке , а во втором случае — в колонке . Нам кажется более оправданной классификация, при которой различие проводится в зависимости от способа извлечения зон если после опыта зоны вытесняются новыми порциями растворителя вдоль направления движения, прибор называется колонкой . Блоком же следует называть прибор, в котором предусмотрено механическое разделение пористого носителя на слои, каждый из которых промывается отдельно. [c.80]

Виды носителей. К пористому носителю предъявляются довольно жесткие требования. Материал должен иметь однородные поры подходящего размера, быть нерастворимым и химически устойчивым в широком диапазоне pH, обладать механическими свойствами, допускающими однородную упаковку (если применяется порошок), легкое разделение на слои (если речь идет об электрофорезе в блоке) и т. д. [c.80]

Структура крахмального наполнителя такова, что после окончания опыта можно вынуть из прибора целиком весь столбик крахмала, разрезать его на слои и элюировать каждый из них отдельно. Целлюлоза и другие пористые материалы мало пригодны для этой цели. Электрофорез в крахмальном блоке был введен Кункелем и Слэтером в 1952 г. [31]. [c.91]

Блок во время электрофореза можно устанавливать как горизонтально, так и вертикально. Последний способ предпочтительнее, так как разрешение получается несколько лучшее. На рис. 17 показано расположение частей прибора при электрофорезе в вертикальном блоке. Устанавливая разность уровней в электродных сосудах, можно скомпенсировать электроосмос. Если блок расположен горизонтально, уровень жидкости в сосудах должен быть одинаковым и на несколько сантиметров ниже поверхности блока. [c.92]

Подробное описание всех операций по электрофорезу в блоке можно найти во многих работах [21, 32, 33, 34]. [c.92]

Рис. 17. Схема прибора для электрофореза в вертикальном блоке [44].

Электрофорез на бумаге можно рассматривать как частный случай электрофореза в блоке. Бее же имеются важные особенности, связанные с малой толщиной листа. Электрофорез на бумаге возник в конце-40-х—начале 50-х годов и сейчас является наиболее широко распространенным методом электрофореза. Он развивался параллельно с хроматографией на бумаге, успешно дополняя ее при исследовании низкомолекулярных веществ и пептидов по отношению к белкам вообще нет эквивалентного хроматографического метода. [c.93]

Электрофорез на бумаге является аналитическим и микро-препаративным методом, пригодным для разделения лишь небольших количеств вещества. Без чрезмерного расширения пятна на бумагу обычно можно нанести несколько десятков микролитров раствора. Несколько увеличить это количество можно, если применить более толстую и широкую бумагу. В последнем случае зону наносят в виде длинной полосы, перпендикулярной направлению поля. Но при этом ухудшается разрешение из-за того, что невозможно обеспечить полную однородность условий по всей ширине листа, в результате чего зоны искривляются. Толстая бумага по той же причине дает худшие результаты, чем тонкая. Хотя таким способом можно разделять десятки миллиграммов вещества, все же начиная с таких количеств предпочтительнее использовать блок или колонку. [c.94]

Заслуживающие внимания методы газовой хроматографии и бумажного электрофореза (Блок и сотр. [12]) применяют только к одному или двум классам фенольных соединений. Электрофорез обычно проводят в присутствии молибденовых и боратных буферов. В работе Придхама [18] иллюстрируются, возможности метода. [c.51]

Специальное оборудование. Серийный прибор для диск -электрофореза, или электрофореза в блоке ( slab ), или устройство, эквивалентное этому и выполненное из прозрачного пластика, источник питания. Дальнейшие указания даны для [c.227]

Пленки из ацетата целлюлозы сами по себе не пригодны в качестве поддерживающей силы для препаративного электрофореза, так как при увеличении количества нанесенного материала резко снижается разрешающая способность метода. Однако целлогель производится и в такой форме, которая удобна для препаративного разделения небольших количеств материала. Например, имеется целлогель в блоках размером 6X17 ом и толщиной 2,5 или 5 мм. Их хранят в 30%-ном метаноле. Нело-средственно перед электрофорезом блок вымачивают в течение по крайней мере 2 ч в соответствующем буфере и на стеклян- [c.44]

Как и в других видах горизонтального зонального электрофореза, положение стартовой линии следует выбирать, принимая во внимание свойства подлежащих разделению макромолекул и уровень электроосмоса при данных условиях. Этот уровень, разумеется, зависит от свойств поддерживающего материала (в крахмале он заметно выше, чем в певиконе), а также от pH и состава буфера. Если производится разделение бесцветных веществ, то за их перемещением можно следить, добавляя в пробу краситель, например бромфеноловый синий. Для предотвращения испарения с поверхности блока края полиэтиленовой пленки осторожно загибают вверх и укладывают на блок (лоток первого типа) или накрывают поверхность блока куском оберточного материала фирмы Saran (лоток второго типа). Электрофорез обычно проводят в холодной комнате. Перед включением напряжения блоку нужно дать остыть до температуры окружающего воздуха. При ионной силе буфера 0,05 целесообразно применять градиенты напряжения в 3,5—5 В/см. [c.49]

Еще большее число белковых фракций (свыше 30) можно получить методом иммуноэлектрофореза (рис. 17.1). Этот метод представляет собой своеобразную комбинацию электрофоретического и иммунологического методов анализа белков. Иными словами, термин иммуноэлектрофорез подразумевает проведение электрофореза и реакции преципитации в одной среде, т.е. непосредственно на гелевом блоке. При данном методе с помощью серологической реакции преципитации достигается значительное повышение аналитической чувстительности электрофоретического метода. [c.569]

Зонный электрофорез. Главное отличие зонного электрофореза от фронтального состоит в том, что при зонном э,лектрофорезе используется поддерживающая среда, в которой осуществляется движение вещества, тогда как при фронтальном электрофорезе ионы свободно перемещаются в растворе. Поддерживающей средой, или носителем, служат обычно бумага, целлюлоза, крахмальные гели или блоки, пористые по,лиуретаны. и полиакрил-алшдиые гели. На фиг. 24 приведена схема прибора для зонного электрофореза. [c.77]

Исс,ледуемый материал наносится в виде узкой полосы иа поддерживающую среду приблизительно посередине между сосудами с буферным раствором, в которых находятся электроды. Каждый из компонентов мигрирует с определенной скоростью, зависящей от его заряда, к катоду или к аноду. В результате все компоненты четко разделяются. После этого носитель можно разрезать на соответствующие части и элюировать каждый из компонентов смеси. Таким образом, зонный электрофорез можно с успехом использовать как для анализа многокомпонентных смесей, так и д.пя препаративного выделения чистых белков. Выбор носителя для зонного электрофореза зависит главным образом от задачи, которая стоит перед экспериментатором. Если основной целью является разделение компонентов, то в качестве носителей используются бумага, крахмал или лучше полиакриламидный гель. Если же целью яв.ляется препаративное получение чистого белка, то лучше всего использовать крахмальный блок, на который [c.77]

Обзор по электрофорезу в крахмальном блоке был сделан в 1960 г. Бломендалем [32]. [c.93]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология