Изократическое элюирование

Выбрав подходящую колонку, проводят градиентное элюирование в таком режиме, чтобы концентрация сильного растворителя изменялась линейно от О до 1001%, а объем растворителя в 10—15 раз превышал Ут- Если все пики выходят в течение не более чем 25% продолжительности градиента, вполне вероятно, что для данной смеси можно подобрать условия изократического элюирования. В противном случае градиентное элюирование необходимо, и дальнейшее улучшение режима производят на основании анализа распределения пиков по хроматограмме [c.121]

Другой возможностью выбора состава подвижной фазы для изократического элюирования является проведение пробного разделения в градиентном режиме. Исходя из того, при каких концентрациях элюируются компоненты разделяемой смеси, можно рассчитать состав подвижной фазы, которая обеспечит приемлемое удерживание в изократических условиях [226, с. 173]. Наконец, для решения этой задачи могут использо- [c.274]

Эндорфины (13) Метод изократического элюирования. [136] [c.302]

Способ элюирования. В ходе разработки методики разделения многокомпонентной смеси необходимо решить вопрос о режиме элюирования. Анализ современных тенденций в жидкостной хроматографии показывает, что градиентное элюирование довольно редко применяют для анализа химических продуктов, но оно необходимо при разделении сложных смесей биологического происхождения. Существенным недостатком градиентного элюирования является то, что возврат к исходному режиму элюирования по окончании разделения требует довольно значительного времени (чаще всего 15—30 мин). При сравнении возможностей.градиентного и изократического элюирования продолжительность приведения колонки в исходное состояние следует суммировать с продолжительностью градиентного разделения. При таком подходе часто оказывается, что лучше провести длительное изократическое разделение, чем незначительно уступающее ему по продолжительности градиентное. [c.320]

Рис. 4.19. Хроматограммы сложной смеси, а — изократическое элюирование, подвижная фаза сильная, из колонки выходят все компоненты пробы, однако рано выходящие делятся плохо б — изократическое элюирование, сила подвижной фазы недостаточна, компоненты 8—11 из колонки не выходят в — градиентное элюирование. Пунктир изображает содержание компонента Б в подвижной фазе в ходе элюирования.

Изократическое элюирование — процедура элюирования при неизменном составе подвижной фазы. [c.181]

Простой путь оценки подходящих условий изократического элюирования по данным градиентной хроматографии предлагает теория линейного градиента силы элюента Снайдера (см. обзор [28] или [27]). По определению линейный градиент силы элюента подчиняется следующему соотношению [c.241]

Для оценки оптимальных условий изократического элюирования по данным градиентной хроматографии можно воспользоваться следующим очень удобным эмпирическим правилом [27]. [c.242]

Например, на колонке с о = 1,5 мин в течение 20 мин состав подвижной фазы меняется от 100% воды до 100% метанола. Следовательно, можно ожидать, что компонент, элюируемый со временем удерживания =15 мин (/ -—время удерживания в условиях градиентного элюирования), будет иметь й = 3 в условиях изократического элюирования составом, соответствующим моменту времени =15—2-1,5 = 12 мин, т. е. подвижной фазой, содержащей 60% метанола и 40% воды. Если пренебречь задержкой, обусловленной конструкцией прибора, то такой состав в момент =12 мин будет иметь фаза, поступающая в колонку, а не выходящая из нее. Через полторы минуты ( о) фаза такого состава достигнет выхода колонки. [c.242]

Следует еще раз подчеркнуть, что правило сформулированное выше, имеет эмпирический характер и не может служить для точной оценки поведения компонента при изократическом элюировании на основании данных по градиентной хроматографии. Обусловлено это тем обстоятельством, что параметр крутизны градиента Ь изменяется в зависимости от природы растворителя, так как различные растворители дают различные [c.242]

Общий недостаток симплекс-оптимизации, заключающийся в необходимости выполнения большого числа экспериментов, еще более усугубляется при оптимизации анализа с программированием, так как здесь длительность единичного эксперимента больше, чем в изократических условиях (см. разд. 6.1). Кроме того, поверхности отклика, получаемые при оптимизации селективности в ЖХ с программированием элюента, изогнуты не меньше, чем получаемые при оптимизации изократического элюирования [27], поэтому и в этом случае вероятность обнаружения локального (а не глобального) оптимума велика, если применяется симплекс-алгоритм. [c.357]

Рис. 21-7. Сравнение градиентного и изократического элюирования при разделении нуклеотидов. Наклонная линия на нижнем рисунке характеризует изменение концентрации элюента (шкала справа) во времени. Аббревиатура у пиков — стандартные обозначения различных нуклеотидов [1].

Рис. 4.20. Зависимость емкости хроматограммы Р от предельного времени удерживания вмакс для градиентного и изократического элюирования и различной эффективности колонок время удерживания несорбирующегося вещества 1 мин. Элюирование (теоретич. тарелки) 1 — градиентное, 1000 2 — изократичес кое, 1000 3 — градиентное, 10 000

В первь х работах по применению систем ЖХ низкого давления с изократическим элюированием фосфатными и боратными буферами на колонках с БСА, связанным с сефарозой, показали, что хиральное разделение заряженных сорбатов, подобных немодифицированным аминокислотам триптофану, кинуренину [3-(2-амино-бензоил)аланин], и их 5- и 3-оксипроизводным соответственно чрезвычайно сильно зависит от pH подвижной фазы [87]. В дальнейшем [c.132]

Рнс. 84. Программируемое многократное элюирование с использованием камеры AMD а - многократное элюирование с промежуточной просушкой слоя б - рекомендуемое градиентное изменение состава подвижной фазы для последовательных этапов п изократического элюирования в - программируемое многократное элюирование может обеспечить разделение веществ с различной полярностью (включая ионогенные вешества) на силикагеле г - фракция экстракта нз растений, полученная прн предварительном разделении на колонке с сорбентом Lobar (обращенная фаза) и впоследствии разделявшаяся методом ТСХ с использованием камеры AMD на пластинке с силикагелем (д). Данные заимствованы из публикации [159]. A N - ацетонитрил п - число этапов I - фронт 2 - беизанилид 3 - ацетанилид 4 - п-ннтрофенол 5 - тиомочевина 6 -роданид 7 - нитрат аммония 8 - нафталинсульфокислота 9 - бензойная кислота 10 -фталевая кислота 11 - старт 12 - начало сбора фракции 13 - окончание сбора фракции 14 [c.245]

ИЗОКРАТИЧЕСКИМ ЭЛЮИРОВАНИЕМ называется использование элюента постоянного состава в течение всего анализа. Почти все (кроме хроматограмм, в условиях которых есть термин "градиент") приведенные в монографии хроматограммы получены именно в этом режиме. Достоинством такого элюирования является техническая простота исполнения и высокая воспроизводимость времен удерживания, площадей и высот пиков. Для хроматографии на силикагельных колонках такой вид элюирования является единственно возможным из-за сложности регенерации колонки. [c.59]

В связи со сравнительно простой регенерацией, для проведения градиентного элюирования используются колонки, заполненные обращенно-фазовым адсорбентом. В этом случае увеличение элюирующей силы происходит за счет увеличения концентрации метанола или ацетонитрилз в элюенте в процессе одного анализа. Градиентное элюирование полезно в том случае, когда при использовании изократического элюирования невозможно добиться разделения всех компонентов, сильно различающихся по временам удерживания (рис. 5.9 и 5.10). [c.59]

При использовании флуориметрического детектора достаточно использовать колонки 80x2, заполненные Диасорбом С16 (16% углерода) и изократическое элюирование с использованием элюента ацетонитрил-вода в соотношении 75 25 по объему. [c.103]

Рис. 9.4. Хроматограмма экстракта копченой колбасы в режиме изократического элюирования с флуориметрическим детектированием. Длина волны возбуяздеини - 282 нм, эмиссионный фнльтр - от 380 им 1 - бенз(а)пирен

Если требуется более точное предсказание поведения при изократическом элюировании, то можно воспользоваться данными двух или более хроматографических разделений [29, 31, 32], выполненных в различном градиентном режиме. Помимо необходимости проведения дополнительных эксгериментов недостаток описанного подхода состоит также в том, что ошибки, вносимые используемыми приборами, могут оказаться довольно значительными, поэтому потребуется предельная осторожность в интерпретации данных [29, 30]. [c.243]

На рис. 5.13 дан график зависимости объемной доли сильного растворителя, необходимого для получения определенной величины коэффициента емкости для компонента, элюируемого в градиентных условиях с чистым временем удерживания tR. Проведенные линии соответствуют серии изократических коэффициентов емкости (й = 0,5 1 2 5 10 и 20). Диапазон оптимальных значений выделен штриховкой (1<й<10). Если известно удерживание данного компонента в градиентных условиях, то из рис. 5.13 можно установить серию составов подвижной фазы для различных величин к в изократическом режиме. Следовательно, рис. 5.13 позволяет оценить поведение компонента в условиях изократического элюирования по данным единичного эксперимента, выполненного в градиентных условиях. [c.245]

Предсказательные методы оптимизации. Предложенный Гляйхом и Киркландом метод часового, предусматривает измерение данных по удерживанию в градиентных условиях и прямую оптимизацию селективности, т. е. различия между временами удерживания для различных хроматографируемых компонентов. Яндера и др. [28] описали предсказанный метод оптимизации, в котором 1) с использованием нескольких модификаторов изучаются зависимости удерживания от состава в изократических условиях, 2) па основании данных по изократическому элюированию предсказываются данные по удерживанию с использованием тройных градиентов и 3) на основании предсказанных времен удерживания выбирается удовлетворительный тройной градиент. [c.353]

ДЛЯ другого (также произвольно выбранного) компонента. Для этого необходимо знать зависимость удерживания этих трех соединений от состава подвижной фазы. Необходимую информацию можно получить из экспериментов по градиентному элюированию, проводимых в рамках оптимизационной программы, или из отдельных опытов по изократическому элюированию. При этом выбор трех опорных компонентов смеси играет важную роль в получении хорошего результата, тогда как оптимизация разрешения по всей хроматограмме певозмолспа. [c.356]

С партисилом-10 РАС (полимерная аминоцианофаза) было проведено примерно за 40 мин при элюировании 65%-ным раствб-ром ацетонитрила в 0,0025 М натрий-ацетатном буфере (pH 6) со скоростью 1 мл/мин. Интересно также отметить высокую эффективность колонки с партисилом-10 РАС при разделениях Р-(1—>-4)-связанных олигомеров о-глюкозы (целлодекстринов) и соответствующих восстановленных олигосахаридов [33]. Изократическое элюирование смесью ацетонитрил — вода (71 29) со скоростью 1,5 мл/мин обеспечивает за 24 мин хорошее разделение смеси, содержащей как нормальные, так и восстановленные целлодекстрины с СП до 6. [c.14]

Многообещающие результаты были получены при использовании макропористого ионообменника ОЕАЕ-сферона (гликоль-метакрилатная матрица) при анионообменной хроматографии сахаров в форме боратных комплексов. Разделение смеси тре-галозы и шести обычных моносахаридов было проведено примерно за 2 ч при изократическом элюировании 0,15 М боратным буфером с pH 8,5 на колонке размером 500X6 мм при температуре 50 °С [82], тогда как для хроматографирования смеси 12 сахаров, включающей 4 олигосахарида, на аналогичной колонке при ступенчатом элюировании тремя буферами с концентрацией бората 0,03—0,25 М и pH 7,50—8,88 при температуре 60 °С потребовалось 4 ч [83] (в обоих случаях скорость элюирования поддерживали на уровне 50 мл/ч). [c.23]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология