Состав подвижной фазы и удерживание

Пусть требуется разделить трехкомпонентную смесь веществ Х , Хо, Хз. Исходя из априорных соображений (например, схемы на рис. 2.3) мы выбрали неподвижную фазу, но необходимо также выбрать состав подвижной фазы. Испытав растворитель Аь получили хроматограмму без признаков элюирования компонентов (рис. 3.1,а). Можно применить какой-либо другой растворитель Аг и получить хроматограмму, приведенную на рис. 3.1,6. При этом обнаруживаем, хотя и слишком медленное, элюирование компонентов Х1 и Х2, в то время как сорбируется по-прежнему необратимо. Относительно обоих испытанных растворителей можно заключить, что они обладают явно недостаточной элюирующей силой. При использовании третьего растворителя Б1 обнаруживаем, что компоненты смеси почти не удерживаются (рис. 3.1,в) Аналогичный результат получаем с растворителем Б2 (рис. 3.1,г). В обоих последних случаях разделение Х , Х2, - з неудовлетворительно, растворителям присуща слишком большая элюирующая сила. Возможно, что при дальнейшем переборе растворителей найдем, наконец, растворитель Бi, в котором удерживание и разделение приемлемы (рис. 3.1,5), т. е. сила растворителя Бг [c.40]

СОСТАВ ПОДВИЖНОЙ ФАЗЫ И УДЕРЖИВАНИЕ [c.133]

Другой возможностью выбора состава подвижной фазы для изократического элюирования является проведение пробного разделения в градиентном режиме. Исходя из того, при каких концентрациях элюируются компоненты разделяемой смеси, можно рассчитать состав подвижной фазы, которая обеспечит приемлемое удерживание в изократических условиях [226, с. 173]. Наконец, для решения этой задачи могут использо- [c.274]

Большое влияние на энантиоселективность оказывает состав подвижной фазы. В обшем случае и и а уменьшаются с увеличением содержания органического модификатора в элюенте. В большинстве случаев метанол как модификатор приводит к меньшему снижению значения а, чем ацетонитрил. Удерживание на колонках с ЦД заметно зависит и от температуры, быстро снижаясь до нуля в пределах от 60 до 80°С. [c.113]

Как и при разделении на ранее описанных полимерных ХНФ, механизм хирального распознавания в данной системе является сложным и до конца не выяснен. Однако основные причины удерживания сорбата были выявлены в ходе систематических исследований влияния его структуры и состава подвижной фазы на коэффициент емкости. Во многих отношениях альбумин-силикагелевый сорбент ведет себя подобно обращенно-фазовым материалам на основе алкилированного силикагеля. Спирты, преимущественно пропанол-1, помогают регулировать время удерживания, поскольку вызывают его быстрое уменьшение вследствие ослабления гидрофобных взаимодействий с сорбентом. Оптимизировать состав подвижной фазы можно, варьируя тремя основными параметрами, а именно pH, ионной силой и органическим растворителем-модификатором [90]. Вероятно, в любой хроматографической системе одновременно наблюдается влияние диполь-ионных и гидрофобных взаимодействий. Кроме того, возможно образование водородных связей и комплексов с переносом заряда. Большое влияние свойств подвижной фазы на значения к разделяемых энантиомеров можно объяснить зависимостью свойств белков от распределения заряда и его конформации. БСА состоит как минимум из 581 остатка аминокислот, связанных в единую цепь (мол. масса 6,6-10 ), и его надмолекулярная структура в значительной мере определяется присутствием в молекуле 17 дисульфидных мостиков. При рН7,0 полный заряд молекулы равен - 18, а изоэлектрическая точка равна 4,7. Как это хорошо известно из химии ферментов, смена растворителя способна вызывать изменения в структуре связывающего центра белка в результате изменения его заряда и конформации. [c.133]

УДЕРЖИВАНИЕ И СОСТАВ ПОДВИЖНОЙ ФАЗЫ [c.90]

Как следует из рис. 5.18, выигрыш в величине Яв довольно значителен при увеличении к приблизительно до трех. Дальнейшее увеличение к сопровождается очень медленным улучшением разделения. Следовательно, с точки зрения компромисса между достигаемым качеством разделения и его продолжительностью оптимальное значение к равно примерно трем. Можно уверенно заявить, что если при таких величинах удерживания разделение неудовлетворительно, то следуюш,им шагом по оптимизации должно быть либо радикальное увеличение эффективности колонки, либо изменение селективности за счет изменения состава подвижной фазы. Несколько иначе следует выбирать величину к при разработке методик определения примесей. В этом случае избранный режим помимо отделения примесей от основного веш,ества должен обеспечивать О обзор максимального диапазона полярности сорбатов. Поэтому желателен такой состав подвижной фазы, чтобы к основного вещества был около ] 0. С другой стороны, в начальной части хроматограммы, вблизи /о, часто наблюдаются ложные пики различной природы поэтому при выборе состава элюента необходимо строго соблюдать следующее правило ни один интерпретируемый пик не должен иметь к <0,2. [c.222]

Изменение температуры не очень сильно влияет на удерживание и селективность. Понятно, что значительно в большей степени на удерживание влияет состав подвижной фазы (содержание воды). Однако все, что справедливо для газовой хроматографии (см. разд. 3.1), распространяется и на жидкостную хроматографию. Поскольку те.мпература и состав не могут быть независимыми переменными, то различным температурам соответствует свой оптимальный состав подвижной фазы (см. разд. 5.5.1). [c.88]

Состав подвижной фазы. Как пентан, так и диоксид углерода отличаются низкой полярностью. Полярность подвижной фазы можно увеличить, добавляя в нее подходящие модификаторы. Такие модификаторы оказывают весьма заметное влияние на удерживание. Уменьщение удерживания, вызванное добавлением модификаторов, по-видимому, сходно с наблюдаемым в условиях жидко-твердофазной хроматографии (см. разд. 3.2.3). Полярные модификаторы влияют не только на удерживание, но и на форму пика. Добавление модификаторов в подвижную фазу, особенно при разделении полярных компонентов, становится весьма распространенным. Природа и концентрация органического модификатора являются теми параметрами, которые можно использовать для оптимизации разделения методом сверхкритической флюидной хроматографии. Информация об исследованиях, проводимых в этом направлении, дана в статье Рендалла [92]. [c.133]

В табл. 3.106 приведены параметры оптимизации, которые можно применить в жидко-жидкостной хроматографии. Очевидно, полярность обеих фаз в значительной степени определяет удерживание и селективность. Для того чтобы оптимизировать разделение, можно изменить (преимущественно) состав подвижной фазы (т. е. изменить состав и концентрацию компонентов подвижной фазы без существенного изменения ее полярности). При разделении по методу жидко-жидкостной хроматографии требуется надлежащий контроль температуры, даже если температура не является основным параметром оптимизации. Поэтому, возможно, имеет смысл просто выбрать температуру в качестве дополнительного параметра оптимизации. [c.139]

Методика поиска. В гл. 1 (разд. 1.5) мы видели, что в оптимальных условиях элюирования коэффициент емкости компонента должен попадать в ограниченный диапазон значений. Следовательно, даже если на основании наших хроматографических знаний (гл. 3) или серии тщательно отобранных экспериментов (разд. 5.4.1) мы выбрали наиболее важные параметры, тем не менее большая часть параметрического пространства может оказаться бесполезной для оптимизационных целей, так как значения коэффициентов емкости в них могут оказаться либо слишком большими, либо слишком малыми. Особенно мал допуск у тех параметров, которые сильно влияю г на удерживание, например температура в газовой хроматографии или состав подвижной фазы в жидкостной. В гл. 3 такие параметры были названы основными (табл. 3.10). В целях повышения эффективности оптимизации чрезвычайно полезно как можно раньше установить реалистические пределы для основных параметров. [c.238]

Например, на колонке с о = 1,5 мин в течение 20 мин состав подвижной фазы меняется от 100% воды до 100% метанола. Следовательно, можно ожидать, что компонент, элюируемый со временем удерживания =15 мин (/ -—время удерживания в условиях градиентного элюирования), будет иметь й = 3 в условиях изократического элюирования составом, соответствующим моменту времени =15—2-1,5 = 12 мин, т. е. подвижной фазой, содержащей 60% метанола и 40% воды. Если пренебречь задержкой, обусловленной конструкцией прибора, то такой состав в момент =12 мин будет иметь фаза, поступающая в колонку, а не выходящая из нее. Через полторы минуты ( о) фаза такого состава достигнет выхода колонки. [c.242]

На рнс. 6.7, г представлен график зависимости удерживания от состава подвижной фазы для некоторых высокомолекулярных соединений при разделении их методом обращенно-фазовой хроматографии. В данном случае состав подвижной фазы чрезвычайно сильно влияет иа удерживание хроматографируемых веществ (показательно 10-кратное увеличение масштаба на горизонтальной оси). Для низкомолекулярных соединений тан- [c.322]

В работе [90] методом ВЭЖХ изучено поведение ряда биологически важных производных фенилэтиламина и аминокислот и найдены инкременты удерживания, отвечающие окси-, мето-кси- и метильной группам в различных положениях. Показано, что данные, полученные на одном сорбенте, могут быть перенесены на другой, если состав подвижной фазы в обоих случаях одинаков. [c.71]

Самый простой вариант элюирования — изократический, при котором состав элюента не меняется. Его используют при разделении соединений с близким сродством к неподвижной фазе. В некоторых случаях, используют градиентное элюирование, при котором состав элюента в процессе разделения компонентов изменяют по заданному закону. В этом случае элюирующая сила подвижной фазы возрастает, в результате чего сокращается время удерживания сильно сорбируемых веществ и улучшается разделение смеси. [c.269]

Наиболее рационально подвижную фазу можно было бы выбирать на основании действующего механизма разделенил. Однако часто механизмы удерживания перекрываются или они не могут быть заново изучены для каждой хроматографической задачи. Поэтому состав подвижной фазы часто выбирают путем испытаний различных смесей растворителей, взятых на основе имеющегося у оператора опыта, или путем систематической т оцедуры согласно принципам мяогопараметрической оптимизации (см. разд. 12.4). [c.279]

Установление характеристик удерживания, т. е., например к разделяемых соединений, автоматически не обеспечивает реального разделения, которое опред елэдтси коэффициентом селективности а. Смена разделяюп й колонки часто означает значительное изменение коэффициесгга селективности. Далее, для улучшения коэффициента селективности и вообще селективности может также быть оптимизирован состав подвижной фазы. [c.279]

Давление в системе нужно точно контролировать, поскольку плотность сверхкритического флюида зависит от давления и изменения давления приводят к изменению коэффициентов емкости. Более высокое давление обеспечивает ббльшую плотность. Это позволяет повышать элюирующую силу подвижной фазы и получать меньшие времена удерживания. Например, увеличение давления диоксида углерода с 7 до 9 МПа приводит к уменьшению времен удерживания с 25 до 5 мин. Значит, в СФХ можно использовать программи-рованпе давленьл в форме градиента, аналогично тому, как программируется температура в ГХ и состав подвижной фазы в ЖХ. [c.299]

Меняя состав подвижной фазы в ОФЖХ, можно изменять удерживание в очень широких пределах. Почти для всех анализируемых соединений удерживание в некоторых чистых растворителях (метанол, тетрагидрофуран) пренебрежимо мало, а в чистой воде чрезвычайно велико. Поэтому, чтобы добиться приемлемого времени удерживания, обычно необходимо использовать смеси воды с органическим растворителем — так называемым модификатором. [c.78]

В адсорбционной хроматографии на полярных сорбентах (например на силикагеле) в качестве основы подвижной фазы используют, как правило, неполярный алифатический углеводород, чаще всего н-гексан или н-гептан. Для получения требуемой полярности подвижной фазы добавляют более полярный растворитель, например метиленхлорид или хлороформ. В качестве другого компонента, имеющего влияние на удерживание разделяемых веществ, в подвижную фазу добавляют некоторые из алифатических спиртов (метанол, этанол, изопропанол),причем добавляют сравнительно малое количество — не более 1%. Аналогичное спиртам влияние имеют следовые количества воды (до 0,1%). В этом случае, однако, возникают затруднения, связанные с приготовлением подвижной фазы с определенным количеством такой добавки и поддержанием в ней постоянного состава (система должна быть совершенно уравновешена, ина-le вода может сорбироваться на стационарной фазе, и состав подвижной фазы в поцессе разделения будет изменяться). Некоторые авторы отдают предпочтение применению в качестве модификатора подвижной фазы простых эфиров, в частности метил-трег-бутилэфира, который имеет преимущество перед диэтиловым эфиром с точки зрения техники безопасности. [c.248]

Более всего на измеряемые абсолютные и относительные параметры удерживания в ВЭЖХ влияют природа и состав подвижной фазы. В изократическом режиме это влияние может проявляться особенно сильно, если компоненты подвижной фазы накачиваются автономными насосами из разных емкостей. Для обеспечения погрешности измерения 1% необходимо поддерживать состав подвижной фазы, подаваемой в колонку, с точностью не хуже 0,1%. Как отмечается в [34, с. 529-562], современные приборы позволяют выполнить это требование, поэтому проблема здесь не столько приборная, сколько методическая. Так, даже при подаче в колонку заранее составленной смеси растворителей из одной емкости и одним насосом важно, наряду со строгим соблюдением пропорций в составе элюента, обеспечить близкую к абсолютной химическую индивидуальность смешиваемых жидкостей. Наличие в намеченных к использованию растворителях тех или иных нежелательных примесей может кардинальным образом повлиять на измеряемые параметры удерживания. [c.260]

Отмеченные трудности в обеспечении стабильности важнейших параметров эксперимента в ВЭЖХ (температура колонки, расход и состав подвижной фазы), не говоря уже о невозможности абсолютной стандартизации самих разделительных колонок, обусловливают низкую межлабораторную воспроизводимость не только абсолютных, но и относительных параметров удерживания, в частности факторов удерживания (коэффициентов емкости). [c.261]

В газовой хроматографии природа и состав подвижной фазы (чаще всего — индивидуального газа-носителя, иногда — содержащего небольшие количества модифицирующих добавок) в гораздо меньшей степени влияют на удерживание компонентов анализируемого образца, нежели в жидкостной. Ломиниру-ющее влияние здесь принадлежит природе, составу и количеству неподвижной фазы в колонке, которое в газо-жидкостном варианте, да и при работе с некоторыми полимерными сорбентами подвержено более или менее выраженному естественному уменьшению. Интенсивность истощения газо-жидкостных хроматографических колонок зависит от упругости паров используемых неподвижных жидких фаз (в том числе и некоторых синтетических адсорбентов) при рабочей температуре и от жесткости задаваемого температурного режима. Если принять допустимым улетучивание 50% общей массы неподвижной фазы за 2000 ч работы колонки (т.е. примерно за год эксплуатации), то унос неподвижной фазы за один день составит около 0,2% от первоначального количества. При этом высоты пиков будут последовательно увеличиваться также примерно на 0,2% в [c.344]

Подвижные фазы в ЖКХ различают по их элюирующей способности. В адсорбционной хроматографии на полярных. сорбентах элюирующая сила тем больше, чем полярнее растворитель. Экспериментально уста ювленную последовательность растворителей с возрастающей элюирующей силой называют элюот-ропным рядом. Элюирующая сила е, как правило, возрастает с увеличением диэлектрической проницаемости растворителя. Чаще всего используют насыщенные углеводороды (гексан, гептан), тетрахлорид углерода, хлороформ, этанол, метанол, воду (растворители расположены в порядке возрастания элюирующей силы). Элюирующую силу можно изменять в необходимых пределах добавлением к растворителю с низкой элюирующей силой более активного растворителя. Элюирующая способность смеси резко возрастает при небольших добавлениях полярного растворителя к неполярному (рис. 28.8). Если различие в элюирующей силе растворителей незначительно, то зависимость близка к линейной. В том случае, если к неполярному элюенту добавляют полярный, способный к образованию водородных связей (спирты, эфиры и др.), удерживание и селективность определяются специфическими взаимодействиями вещество— адсорбент, вещество — элюент и элюент — адсорбент. Эту систему применяют для разделения полярных, сильноудерживаемых соединений. Водородные связи образуются как между сорбентом и веществом, так и между веществом и элюентом, что резко сказывается на хроматографическом поведении соединений. Так, фенол и анилин в элюен-те, не способном к образованию Н-связи, выходят в указанной последовательности, а в подвижной фазе, содержащей спирты, порядок противоположный. Это объясняется тем, что анилин, в состав молекулы которого входит аминогруппа —NH2, обладает большей способностью к образованию водородных связей с молекулами спирта, чем фенол. [c.600]

В-четвертых, это химическое загрязнение колонки. Его избежать полностью не удается, так как даже высокочистые растворители для ВЭЖХ, не говоря о технических видах, содержат некоторое количество примесей, продуктов фотохимической я окислительной деструкции растворителей, их стабилизаторов, примесей, тары и др. Пробы также содержат примеси, состав которых часто установлен не полностью. Эти примеси, если они не элюируются в условиях анализа, постепенно накапливаются на сорбенте в начале колонки и, играя роль нанесенной активной фазы, начинают избирательно удерживать некоторые компоненты пробы вплоть до их необратимой сорбции. Если эти примеси элюируются с большим временем удерживания, они приводят к нестабильности положения нулевой линии в виде дрейфа в ту или другую сторону, широких горбов в самые неожиданные моменты и т.д. К такому же химическому загрязнению, изменяющему параметры удерживания, приводит использование силикагеля, а в качестве подвижной фазы — влажного гексана или гептана, постепенно загрязняющих безводный силикагель водой. [c.124]

Надежная раббта насоса также сильно зависит от летучести используемых растворителей. При резком всасывании в камере насоса даже предварительно дегазированные растворители иногда образуют паровые пузыри, препятствующие работе клапанов. Этот эффект наиболее выражен у таких летучих растворителей, как пентан, ацетон, метиленхло )ид и диэтиловый эфир. Кроме того, подвижные фазы, содержащие эти вещества, могут изменить свой состав в ходе работы из-за испарения, что приводит к невоспроизводимости величин удерживания. Поэтому следует избегать использования растворителей, кипящих при температуре ниже 60 °С. С другой стороны, для менее летучих растворителей характерна более высокая вязкость, что отрицательно сказывается на эффективности разделения и вынуждает использовать большие давления для достижения желаемой скорости разделения. Предельно допустимая вязкость подвижной фазы зависит от размера частиц сорбента и качества упаковки колонки. В качестве ориентира можно указать величину 1,5 сП. При такой вязкости и линейной скорости подвижной фазы около 0,4 см/с давление на выходе качественной колонки не должно превышать 200 атм. Если все же обстоятельства вынуждают пользоваться более вязкими подвижными фазами, колонку следует термоста-тировать при повышенной температуре, например около 60 °С. [c.293]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология