Неспецифические физические методы

НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ [c.78]

Неспецифические физические методы [c.79]

В интересах точности не следует утверждать, что биологическая активность определяется каким-либо одним типом функциональных групп (например, фенольными или аминными группами и т. п.) правильнее считать, что данная функциональная группа или определенная часть функциональных групп одного или, возможно, нескольких типов участвует в создании структуры, обусловливающей биологическую активность. Именно эти специфические структурные соотношения можно успешно исследовать при помощи физико-химических измерений. Во-первых, если нельзя показать, что при деблокировании первоначально экранированных функциональных групп биологическая активность восстанавливается, то следует при помощи физических методов установить, что денатурация не имела места. Во-вторых, следует выяснить степень молекулярной и электрохимической гетерогенности производных в ее связи с критерием гомогенности биологической активности. В-третьих, необходимо учесть возможные неспецифические влияния модификации белка на его физическую структуру. Если с одним молем белка вступает в реакцию только один моль реагента, в результате чего образуется совершенно неактивное соединение (как это наблюдается в случае ДФФ-химотрипсина), то можно утверждать, что активность белка обусловлена только одной, хотя и неизвестной до сих пор [141 в], функциональной группой или одним участком белковой молекулы. Однако если интенсивное замещение или блокировка только уменьшают активность, то этот эффект, повидимому, не является специфическим и объясняется общим изменением суммарного заряда или микроскопическим перераспределением. Следует принимать во внимание также и стерические эффекты. В настоящее время большое разнообразие относительно специфических химических реагентов позволяет производить исследование как электростатических, так и стерических эффектов. Это можно сделать, обрабатывая белок, например, такими двумя реагентами, как кетен и недокись углерода, один из которых образует новую нейтральную функциональную группу, а второй превращает основную функциональную группу в группу с кислотными свойствами. Подобным же образом для введения в одно и то же положение положительного или отрицательного заряда, а также для исследования стерических затруднений можно применять диазосоединения. Для такого рода исследований можно воспользоваться целым рядом аналогичных комбинаций. [c.352]

Неспецифические физические методы 81 [c.81]

Неспецифические физические методы 87 [c.87]

Хроматографический анализ — совокупность методов разделения однородных многокомпонентных смесей, основанных на использовании сорбции в динамических условиях. Это физический метод разделения, при котором разделяемые вещества распределяются между двумя фазами. Одна из фаз неподвижна, другая — подвижна и фильтруется через слой неподвижной фазы. Разделение основано на различиях коэффициентов распределения компонентов смеси между подвижной и неподвижной фазами, это в свою очередь вызывает различия в скорости переноса компонентов по длине неподвижной фазы. Поток подвижной фазы вызывает дифференцированную миграцию компонентов смеси из первоначальной зоны в пористую сорбционную среду неподвижной фазы. После хроматографического разделения вещества могут быть количественно определены многими, в том числе неспецифическими методами. Хроматографический анализ — это гибридный метод, сочетающий разделение и детектирование (определение). Разделение и количественное определение часто осуществляют в одном приборе — хроматографе. [c.92]

Известно, что растворитель может влиять на равновесия образования донорно-акцепторных молекулярных комплексов как путем неспецифического физического воздействия (зависящего от его полярности и молекулярной структуры), так и путем специфического воздействия эта проблема еще далека от полного разрешения. Дальнейшему развитию теории мешает спорность опубликованных термодинамических характеристик донорно-акцепторных равновесий в различных средах. Из-за того что обычно приводятся небольшие различия в значениях К, лучшими данными для сравнительного изучения таких равновесий являются данные, получаемые одним и тем же методом и в одной и той же лаборатории. [c.192]

Практически в силу различных причин всегда имеет место неоднородность участков поверхности в отнощении адсорбции. Изотерма адсорбции (когда она может быть измерена) отражает происходящие специфические взаимодействия. В случае физической адсорбции энергия адсорбции часто определяется путем расчета теплот адсорбции по изотермам, измеренным при разных температурах, или прямым калориметрическим методом. При хемосорбции же может оказаться невозможным найти теплоты адсорбции ни калориметрическим способом, ни по изотермам, измеренным при разных температурах. Это бывает в случае, когда равновесие в системах адсорбат — адсорбент устанавливается в течение очень длительного времени или когда равновесные давления очень малы. Кроме того, представляющие интерес катализаторы и другие твердые тела могут быть плохими проводниками тепла и, что более важно, обнаруживать неспецифическую адсорбцию, в частности при впуске газа, если температура опыта низка и имеются участки с высокой энергией. Главным образом этими экспериментальными трудностями объясняется отсутствие важных термодинамических данных для многих систем катализатор — адсорбат. Большинство трудностей преодолевается, если использовать метод измерения теплот погружения, за исключением случаев, когда тепловые эффекты наступают медленно или когда адсорбат может быть изучен только в виде жидкости. [c.293]

Возможность применения хроматографии в обоих названных областях объясняется тем, что цель ее применения состоит в разделении смесей . При очевидном препаративном значении метода, состоящем в получении чистых соединений, в аналитической химии предварительное количественное разделение смесей позволяет в последующем идентифицировать компоненты и определить их содержание простыми (даже неспецифическими) химическими, физико-химическими или физическими методами. Естественно, что использовать иногда сравнительно нродолн ительные хроматографические приемы целесообразно лишь в тех случаях, когда анализ смеси трудно или даже невозможно произвести обычными способами. Это касается прежде всего смесей элементов с очень близкими свойствами, в подавляющем бо,льшииство случаев находящихся в одной и той же группе периодической системы Д. И. Менделеева (щелочные и щелочноземельные элементы, редкоземельные элементы с иттрием и скандием, следующие за ними пары элементов, почти идентичные вследствие ланта-нидного сжатия — цирконий и гафний, ниобий и тантал, молибден и вольфрам галогены, платиновые металлы, элементы подгруппы >келеза и пр.). Поэтому представляется рациональным рассмотреть работы [c.135]

Методы выделения и идентификации мономеров дают информацию о молекулярной массе олигомера и его субъединиц, их количестве и свойствах, позволяют получать препараты для определения первичной структуры. Если удается получить белок в виде кристаллов, изучение первичной структуры удобно вести параллельно с помощью секвенирования и физических методов (например, рентгеноструктурного анализа), поскольку сопоставление получаемой информации существенно ускоряет ход анализа [158]. Однако такая возможность представляется редко. Часто именно получение достаточно чистых препаратов белка или субъединиц, пригодных для проведения аминокислотного анализа, и составляет одну из главных проблем, поскольку исследуемый белок может присутствовать лишь в незначительных количествах в сложной смеси сопутствующих белков и продуктов их деградации или же исходная смесь может содержать белки с очень близкими свойствами. Если белок плохо растворим и требует более жестких условий для солюбилизации, гетерогенные препараты могут быть получены уже на начальном этапе выделения. Причиной появления гетерогенности можег быть, по-видимому, изменение суммарного заряда из-за дезамидирования амидных групп аспарагина и глутамина, карбами-лирование е-аминогрупп некоторых остатков лизина ионом цианата, присутствующим в растворах мочевины [38], неспецифическая модификация остатков метионина и гистидина при алкилировании цистеина. [c.16]

Если из 5-образной кривой вычесть нижнюю кривую (см. рис. 3.3), то получится верхняя асимметричная кривая, которая соответствует неспецифическому, или физическому, взаимодействию компонентов смеси. Эта кривая сходна с кривой, которую дает теория ван Лаара — Хильдебранда — Скэт-чарда для бинарных жидких смесей в отсутствие водородных связей, например для смесей С Е бН с углеводородами. После того как нам удалось разделить полную энергию взаимодействия на неспецифический, или физический, вклад и химический вклад, можно оценить К. Из температурной зависимости К в интервале от —80 до +20 °С для образовайия водородной связи было найдено, что АН за = 2,5 0,5 ккал. В основе этой не простой, но вполне удовлетворительной теории находится предположение, что данные ЯМР для атома водорода, участвующего в водородной связи, не зависят от его окружения, т. е. от того, участвует ли данная молекула в образовании комплекса или нет, тогда как данные обычных физико-химических методов отражают взаимодействие атома водорода в водородной связи с непосредственным партнером в комплексе и с окружающими частицами вообще. [c.46]

Четвертую причину — влияние адсорбции газа-носителя — можно практически устранить, используя в качестве газа-носителя слабо адсорбирующиеся водород или гелий. Пятую причину — модифицирование поверхности прочной адсорбцией самого изучаемого адсорбата — устранить обычно нельзя. Поэтому молекулярную (физическую) адсорбцию хемосорбирующихся или претерпевающих каталитические превращения на данной поверхности адсорбатов исследовать газохроматографическим методом обычно невозможно. Однако исследовать такие системы адсорбат—адсорбент статическими методами также затруднительно. Шестая причина — различие температур газохроматографических и статических измерений — устраняется или проведением статических опытов при температурах хроматографических колонн, или измерениями теплоемкости адсорбционных систем, нужной для внесения соответствующих поправок. Седьмая причина — взаимная ассоциация молекул адсорбата — существенна только при адсорбции молекул, относящихся к группе (например, способных к образованию взаимных ассоциатов спиртов, первичных и вторичных аминов) на неспецифических адсорбентах при достаточно низких температурах, т. е. скорее в статических опытах. При адсорбции молекул группы Д на специфических адсорбентах ее влияние невелико. [c.12]

Наиболее простой способ снятия неспецифического фонового излучения состоит в использовании твердофазных вариантов метода. В качестве твердой фазы берут пблистирольные пробирки, микропланшеты, полиакриламидные шарики. Иммобилизация антител (моноклональных или поликлональных) на полистироле осуществляется методом нековалентной физической адсорбции, а в случае полиакриламидных частиц — ковалентным связыванием. Различие в способах иммобилизации обусловливает некоторые различия в свойствах иммобилизованных антител. Из. всех перечисленных носителей полиакриламидные шарики, как правило, обеспечивают. повышенную стабильность и иммунореактивность иммобилизованных антител, более быструю кинетику специфического взаимодействия, что улучшает точность анализа и его воспроизводимость. [c.142]

В идеале поверхность иммунореактивной индикаторной полоски должна быть однородной, не склонной к неспецифическим взаимодействиям и пригодной для контролируемой иммобилизации различных веществ с помощью удобных методов. В качестве матрицы для ковалентной иммобилизации реагентов мы выбрали листы хроматографической целлюлозы, так как они обладают подходящими химическими и физическими характеристиками. Целлюлоза гидрофильна, достаточно однородна, ей несвойственно неспецифическое связывание. Кроме того, она доступна в виде листов разной толщины и плотности. На целлюлозе с помощью целого ряда хорошо отработанных методов (Lilly, 1976) можно иммобилизовать большие количества ферментов и антител. Это позволяет получать индикаторные полоски, обладающие высокой стабильностью и иммунологической активностью. [c.132]