Белок точка изоионная

Изоэлектрическая и изоионная точки белков [c.49]

Однако, как уже говорилось, функциональные группы белка могут связывать не только протоны, но и другие ионы, как положительные, так и отрицательные. В результате суммарный заряд, найденный по формуле (28), даже с учетом всех возможных поправок может значительно отличаться от найденного титрованием, причем эти отличия выходят за пределы ожидаемых ошибок расчета и измерения. В частности, изоэлектрическая точка, определяемая как pH раствора, в котором белок неподвижен в электрическом поле, отличается от изоионной точки, и это отличие тем больше, чем выше ионная сила раствора. Величина заряда и положение изоэлектрической точки зависит не только [c.60]

Три изоэлектрическом фокусировании в вертикальной колонке между анодом и катодом электрохимически создается градиент pH. Градиент pH стабилизируется градиентом плотности, чаще всего сахарозным вся система тщательно термостатируется. Белки в колонке движутся в направлении, соответствующем их изоэлектрической точке, где фокусируются в виде очень узкой полосы. Две соседние полосы могут быть разделены интервалом всего лишь в 0,01 единицы pH. Считается, что изоэлектрические точки белков в обычных экспериментальных условиях близки к их изоионным точкам, т. е. к тем значениям pH, при которых белки остаются изоэлектрическими в условиях полного отсутствия добавленного электролита [129]. [c.164]

В химии белков существует понятие изоионная точка белка . Раствор белка называется изоионным, если он не содержит никаких других ионов, кроме ионизированных остатков аминокислот белковой молекулы и ионов, образующихся при диссоциации воды. Для освобождения белка от посторонних ионов обычно его раствор пропускают через колонку, наполненную смесью анионо- и катионообменников. Изоионной точкой данного белка принято называть значение pH изоионного раствора этого белка [c.49]

Однако обычно один из ионов соли связывается белком сильнее, чем другой. В этом случае происходит смещение изоточек белка, причем изоионная и изоэлектрическая точки смещаются в противоположные стороны (А. Г. Пасынский). Поясним это обстоятельство на примере преимущественной адсорбции анионов (например, ионов I") белками.Эта избыточная адсорбция анионов всегда сопровождается вытеснением части связанных ионов ОН" в раствор. Предположим, что на каждой белковой молекуле поглощено в чистом водном растворе т ионов Н и т ионов ОН в растворе соли т ионов Н , (т — п) ионов ОН и ионов I" при этом обычно > п, вследствие чего т — п 8> т. [c.103]

Легко видеть, что если 5 = п, то изоэлектрическая точка белка не изменится, но произойдет щелочное смещение изоионной точки напротив, если л = О, то изоионная точка не изменится и произойдет лишь кислое смещение изоэлектрической точки. Во всех случаях неодинаковой адсорбции ионов солей изоточки белка расходятся между собой. [c.103]

В чистых водных растворах изо-ионная точка совпадает с изоэлектрической точкой. В растворах электролитов происходит сорбция ионов белками. В присутствии солей заряд белковых макромолекул определяется также ионами электролитов. Например, при сорбции белками анионов солей часть гидроксильных ионов из белка вытесняется в раствор и изоионная точка смещается в сторону более щелочных значений pH. [c.127]

Электрические заряды на коллоидных частицах возникают в результате преимущественной адсорбции одного из ионов электролитов из раствора или диссоциации собственных ионогенных групп. Независимо от механизма возникновения зарядов на коллоидных частицах, при достаточной плотности расположения зарядов, образуется двойной электрический слой, состоящий из зарядов на поверхности и из компенсирующих ионов в растворе при этом, по теории Штерна, компенсирующие ионы частично входят в прилегающий к поверхности адсорбционный слой, а частично — в диффузную часть двойного слоя. Изучение заряда поверхности методом электрокапиллярных кривых (на ртути, V. 4) и кривых титрования (золи AgJ, растворы белков) позволили определить точки нулевого заряда (в белках — изоионную точку, V. 5) и установить их смещение в растворах различных электролитов. [c.132]

Сравнение изоэлектрической и изоионной точек. Если считать изоэлектрической точкой белка такую величину pH, при которой Е = 0, то, за исключением случая, когда изоионная точка находится при pH 7, раствор белка не может быть одновременно нзоэлектрическим и изоионным. Для изоионного раствора из требования электронейтральности вытекает, что [c.121]

Указана точка, отвечающ.ч 1 вому суммарному заряду (г =19), и изоионное значение рИ, отвечающее использованной в опыте концентрации белка. [c.71]

Сравните изоэлектрическую и изоионную точки (в присутствии и в отсутствие соли) для белка, способного связывать анионы, если известно, что его изоэлектрическая точка расположена в щелочной области. [c.124]

Если белок в растворе находится вблизи изоионной точки, электростатическая энергия отталкивания молекул мала, что может привести к образованию ассоциатов молекул и осаждению белка. При добавлении кислоты или основания молекулы приобретают положительный или отрицательный заряд, что обычно уменьшает их стабильность. Нейтральные белки при низкой ионной силе стремятся ассоциироваться. Это объясняется тем,что в результате флуктуаций заряда на соседних молекулах часто возникают области, несущие заряды противоположного знака. [c.277]

Типичная кривая титрования белка приведена на рис. 10. По оси ординат отложено число ионов [Н+], связанных с молекулой белка, при двух способах выбора начала отсчета. На правой шкале отсчет ведется от числа ионов [Н ], связанных молекулой в изоионной точке, в которой суммарный заряд молекулы равен нулю на левой шкале — от максимального числа связанных ионов [Н+] , определяемого по плато кривой титрования в области низких значений pH. Конец титрования в щелочной области (пунктир на рис. 10) обычно не удается хорошо определить, так как он лежит при значениях pH выше тех, при которых производятся измерения. [c.35]

Удобным и точным методом определения заряда белка является потенциометрическое титрование, в котором заряд определяется по количеству связываемой белком сильной кислоты или щелочи. Это количество эквивалентно количеству связываемых белком (или диссоциированных) протонов. За начало отсчета принимается так называемая изоионная точка, в которой количества связанных с молекулой и диссоциированных протонов равны. Эту точку можно определить, определив pH раствора белка, диализованного против дистиллированной воды. Если pH отличается от 7 не более чем на 3 единицы, а концентрация белка достаточно высока, можно пренебречь количеством протонов и гидроксилов в растворе и считать, что белок нейтрален. [c.60]

Правда, в белке имеются различные кислые и основные группы, но формула (У.8) остается приближенно правильной, если отнести значения и к наиболее сильным группам. Для полного определения молярного содержания различных ионогенных групп в белке и их констант диссоциации измеряют ход поглощения ионов Н и ОН в широком интервале pH (примерно pH = 2—12), прибавляя к белковому раствору различные количества кислоты или щелочи и измеряя равновесное значение pH водородным или стеклянным электродом, что позволяет построить кривую электрометрического титрования белков. Значение pH, при котором избирательное поглощение Нили ОН ионов по кривой титрования равно нулю, т. е. оба иона поглощаются в равной мере, и составляет изоионную точку белка. [c.102]

Водородный показатель рН о, устанавливающийся в растворе чистого белка, характеризует изоионную точку. Очень часто она близка к изоэлектрической. Различие между ними увеличивается, если снижается концентрация белка, так как изоэлектрическая точка не зависит от концентрации полиэлектролита. В изоэлектрической точке электростатическое притяжение между противоположно заряженными частями макромолекул глобулярных белков выражается всего сильнее. В таком состоянии макромолекулы стремятся принять наиболее плотную клубковую упаковку, и растворимость их становится минимальной. Так как в достаточно концентрированных растворах изоионная точка близка к изоэлектрической, то тщательной очисткой раствора от примесных электролитов можно выделить белок из раствора. Для этой цели удобен метод электродиализа. [c.215]

Изоионная точка. Раствор белка, не содержащий никаких других ионов, кроме ионизированных аминокислотных остатков самого белка и ионов, образующихся при диссоциации воды, называется изоионным раствором. Изоионные растворы можно приготовить, пропустив раствор белка через колонку, содержащую как анионообменник, так и катионообменник, которые удаляют все посторонние ионы, кроме ионов водорода и гидроксильных ионов. Другой метод получения нзоионных растворов —- диализ (см. ниже) против дистиллированной воды. Этот сгюсоб, как правило, менее удобен, чем применение ионообменников. Значение pH изоионного раствора белка называется изоионной точкой этого белка. Согласно условию электронейтральности, [c.72]

Изоэлектрическая точка не зависит в явном виде от концентрации белка для изоионной точки, как показывает уравнение (V. 8), такая зависимость наблюдается. С уменьшением концентрации белка несоответствие между изоионной и изоэлектриче-скими точками увеличивается. При умеренных концентрациях белка различие между этими точками невелико, если только обе они лежат в пределах значений pH между 3 и 11. [c.121]

Наконец этот вопрос был детально изучен для белков, так как в чистых водных растворах заряд белковых молекул определяется только поглощением Н+ или ОН -ионов, что легко может быть измерено при помощи водородного или стеклянного электрода. Для белков поглощение Н+ - и 0Н - ионов непосредственно сопоставимо с константами диссоциации ионогенных групп — карбоксильной Ка и аминогруппы Кв- Точка нулевого заряда, т. е. точка равного поглощения Н+ - и ОН - ионов, называется для белков изоионной (Зеренсен) или изопротонной точкой. Положение изоточки (рУ) на шкале pH определяется для 1—У-валентного амфотерного электролита уравнением Михаэлиса [c.114]

Для белков между зарядом молекул и электрофоретической подвижностью существует прямая пропорциональная зависимость в широком интервале pH. Если при некотором значении pH число всех положительных зарядов на белковой молекуле равно общему числу отрицательных зарядов, то при этом pH молекула не передвигается в электрическом поле. Значение pH, при котором электрофоретическая подвижность белка равна нулю, называется изо-электрической точкой. Для чистого водного раствора белка, в котором заряд молекул определяется только Н+ -и ОН- - ионами, изоэлектрическая и изоионная точки белка, естественно, совпадают. Напротив, при преимущественной адсорбции анионов и щелочном смещении изоионной точки (см.выше) на белковой молекуле остаются избыточные отрицательные заряды анионов, сообщающие молекуле электрофоретическую подвижность в сторону анода. Для ее компенсации следует сообщить молекуле эквивалентное количество положительных зарядов, что может быть достигнуто подкислением раствора, т. е. в этом случае изоэлек- [c.115]

Изоэлектрической точкой амфолита называют то значение pH, при котором суммарный заряд вещества равен нулю. В этих условиях амфолит не способен перемещаться в электрическом поле. На положение изоэлектрической точки оказывают заметное влияние ионы электролита, связываемые молекулами белка. Поэтому изоэлектрическая точка может отличаться от изоион-ной точки, которую определяют как изоэлектрическую точку белка в свободном от солей растворе и которая вследствие этого является более строгим понятием. [c.298]

Для чистого водного р-ра белка, в к-ром заряд макромолекул определяется только ионами Н+ и ОН , И. т. совпадает по смыслу и по методам определения с изоионной точкой. В присутствии солей, когда заряд белковых макромолекул определяется также ионами электролитов, обе изоточки изменяются различным образом. Напр., при преимущественной адсорбции анионов и щелочном смещении изоионной точки на белковой макромолекуле остаются избыточные отрицательные заряды анионов, сообщающие ей электрофоретич. подвижность в сторону анода. Для ее компенсации следует сообщить макромолекуле эквивалентное количество положительных зарядов, что может быть достигнуто подкислепием раствора, т. к. из более кислого р-ра белок адсорбирует больше Н+-И0Н0В. Т. обр., И. т. сместится в более кислую область, т. е. в другом направлении, чем изоионная точка. При преимущественной адсорбции белком катиона соли И. т. смещается в щелочном направлении, а изоионная точка — в кислом. Смещение И. т. в р-рах солей можно иногда также наблюдать косвенными [c.106]

Сн+Сон константе диссоциации воды, а другое является зависимостью 2 от pH (т. е. от Сн+), оиределямой уравнением (30-1). Для большинства типичных белков изоионное значение pH лежит между 3 и И (это можно наблюдать на примере рибонуклеазы, как показано на рис. 166). Таким образом, 1Сн+—Сон+ <10" М. Если М, то, по уравнению (30-6), 2 1. Изоионный [c.635]

Представляет интерес рассмотрение влияния добавления соли (например, ЫаС1) к изоионному или изоэлектрическому раствору белка. Для простоты рассмотрим макромолекулу белка, у которой изоэлектрическая точка лежит между рН = 5 и рН = 9 и концентрация настолько высока, что изоионное состояние в воде совпадает с изоэлектрическим. Значение pH определяется по уравнению (30-1) при условии, что 2=0 и г=г (г —число протонов, которое должно образоваться при диссоциации, чтобы 2 стало равно нулю). При добавлении соли г не может изменяться сколько-нибудь заметно, так как не происходит ни удаления, ни присоединения заметного количества ионов водорода. Однако 2 может измениться, если белок реагирует с катионом или анионом при- [c.635]

Наконец, представляет интерес сделать еще одно замечание. По уравнению (30-6) можно определить средний общий заряд 2 первоначально изоионного белкового препарата как указывалось выше, это значение обычно очень мало. С другой стороны, по кривой титрования мы можем найти максимальное число ионов Н , которое может присоединиться к изоионной белковой макромолекуле. Сумма этих двух величин представляет собой наибольший положительный заряд, вызванный наличием ионов Н" , который может приобрести макромолекула белка. Это число равно общему количеству катионных участков (ЫНз и т. д.) в макромолекуле. Поэтому его можно определить по кривой титрования даже несмотря на то, что некоторые из катионных участков (гуанидильные группы) не титруются в экспериментально доступной области pH. Таким путем (по разности) было найдено число гуанидильных групп указанное для рибонуклеазы в табл. 38. [c.637]

Точка нулевого заряда называется для белков изоионной (по Зеренсену), или изопротонной точкой. Она соответствует активности водородных ионов Он + в растворе, при которой белок поглощает равные количества ионов Н" и ОН , т. е. в этой точке активные концентрации катионов " ЫНзНСООН и анионов ЫНгНСОО" одинаковы (сб+ = ав-)- Из уравнения (У.6) видно, что при условии ав + = Об- [c.101]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология