Белки изоточки

Гидратация белка также находится в определенной зависимости от pH раствора она наименьшая в изоточке. Вполне понятно, что с изменением формы белковых молекул и степени их гидратации связано изменение целого ряда свойств белков и их растворов. Так, например, вязкость растворов имеет минимум в изоточке, поскольку свернутые в плотные клубки молекулы оказывают меньшее сопротивление потоку жидкости, чем длинные цепеобразные молекулы. [c.192]

Более подробное обсуждение кислотно-основных свойств белков приводится в работах [5—7] изоточки различных белков указаны в работе [7]. [c.298]

Изоэлектрпческая точка белка является важной константой (см. табл. 6). У большинства белков изоточка лежит между pH 5 п 7, но встречаются и исключения пз этого правила. В изоточке подвижность белка в электрическом поле равна нулю, по если отступить от pH,, на 2—3 единицы, то подвижность белка ока-. см2 [c.125]

Для амфотерных твердых тел и макромолекул, содержащих различные ионогенные группы (белки, нуклеиновые кислоты и др.), величина и знак термодинамического потенциала поверхности зависят от pH раствора при этом изоэлектрической точке (изоточке) отвечает определенное значение pH. [c.210]

Лиофобные коллоиды (в воде) Положение нулевой точки заряда Белки Положение изоточек [c.115]

Помимо методов электрометрического титрования и электрофореза, положение изоточки белков иногда определяется по ряду свойств, косвенно связанных с зарядом частиц — по вязкости, набуханию, осмотическому давлению, оптическому вращению, кривые зависимости которых от рн обладают минимумом в изоточке. [c.116]

Скорость процессов денатурации молекул яичного альбумина при pH, далеких от изоточки, в значительной мере зависит от температуры. Из измерений удельного оптического вращения было найдено, что выдерживание растворов яичного альбумина при 55° С в течение 2 час приводит к полному переходу молекул белка в беспорядочные клубки [301, 302]. [c.130]

Растворимость белков также сильно зависит от pH, с минимумом в изоточке (рис. 74) при смещении от изоточки возрастают заряд и гидратация белковых молекул и повышается их растворимость, поэтому при высаливании белков всегда поддерживают pH близким к изоточке. [c.185]

Хотя в настоящее время существуют методы определения изоэлектрической точки исследуемых белков с достаточной точностью (например, изоэлектрическое фокусирование в градиенте плотности сахарозы), знание изоточки вовсе не обязательно для выбора ионообменника. Пригодность того или иного ионита легко определить по степени связывания белка в статических условиях. В случае анионита смолу приводят в равновесие с буферным раствором, pH которого соответствует верхней границе области устойчивости исследуемого белка. В случае катионита pH буфера будет соответствовать нижней границе этой области. Обессоленный белок растворяют в соответствующем буфере, осторожно (избегая вспенивания) перемешивают с порцией ионита, отделяют надосадочную жидкость. По концентрации белка в надосадочной жидкости судят о степени связывания его с соответствующим ионообменником. [c.431]

Опыты, проведенные при различных концентрациях амфолитов-носителей, свидетельствуют о том, что изоэлектрическая точка белка не зависит от концентрации амфолитов [24]. Обычно работают при концентрации амфолитов 1% (вес/объем), т. е. для работы на колонке объемом 110 мл требуется 1,1 г амфолитов, или 2,75 мл 40%-ного запасного раствора. Работают и при 0,5%-ной концентрации амфолитов, хотя изменение буферной емкости непропорционально изменению концентрации. Более высокое содержание амфолитов (свыше 1%) повышает растворимость белков, склонных выпадать в осадок в изоточке [21]. [c.309]

Для достижения хорошего разрешения необходимо работать в возможно более узком диапазоне pH. Правда, при фракционировании белков с неизвестными изоточками обычно проводят предварительный опыт в широком диапазоне pH. Электрофокусирование в области pH 1—3 проводят в присутствии смеси кислот [53]. [c.309]

Как уже отмечалось, белки, склонные выпадать в осадок в районе изоточки, при повышении ионной силы (например, при [c.310]

Электрофокусирование окрашенных белков, скажем нативного гемоглобина, является прекрасной демонстрацией процессов, происходящих в колонке, а также служит хорошим упражнением при обучении работе на приборе. Зоны, полученные при делении гемоглобина, приведены на рис. 5. Профиль элюирования, записанный при 254 нм, приведен на рис. 6. Градиент pH здесь в целом линейный pH в пробирках с максимальной концентрацией компонентов соответствует их изоточкам. [c.314]

Определение изоточек электрофокусированием дает большую экономию по сравнению с классическими методами. Если при электрофокусировании в одном опыте можно определить изоточки нескольких белков, то в случае метода движущейся границы необходимо для каждого белка поставить около четырех опытов при четырех различных pH. [c.319]

В настоящее время отсутствуют прямые доказательства влияния амфолитов-носителей на р1. Тот факт, что величина р1 не зависит от концентрации амфолитов-носителей [24] и в некоторых случаях от присутствия 6 М мочевины [28], свидетельствует о том, что амфолиты не образуют комплексов с белками. Электростатическое взаимодействие между белком и амфолитами с одинаковыми изоточками должно быть минимальным при плавном электрофокусировании, когда оба компонента имеют нулевой суммарный заряд. Таким образом, любое обратимое взаимодействие белка и амфолита при значениях pH, далеких от их изоточек, не должно сказываться на результатах фракционирования. Однако нельзя совсем исключить возможность комплексообразования. [c.320]

Точное сравнение положения соответствующих зон в спектрах разделения различных образцов представляется затруднительным. В значительной мере вопрос сопоставления результатов можно решить, применяя трубку, показанную на рис. 13. Она имеет два отделения в верхней части, позволяющие одновременно вносить два образца. В данном случае перегородка выполнена из стекла, впаянного в трубку. Однако это может быть подклеенный или жестко заклиненный пластик. На рис. 13 и 14 приведены примеры использования такой трубки для сравнения компонентов гемоглобина с одинаковыми изоточками и соответственно сопоставления состава глиадинов различных сортов пшеницы. Кроме того, этот метод находит применение для сравнения спектра частично очищенного белка с исходным экстрактом. [c.332]

Адсорбция на носителе. При работе с пористым носителем поверхность раздела фаз очень велика и даже сравнительно слабая адсорбция может привести к полной неудаче при электрофоретическом разделении. Причины адсорбции не всегда достаточно ясны. По-видимому, силы неэлектростатического происхождения играют большую роль по отношению к белкам, чем к малым ионам. Адсорбция последних (пептидов, аминокислот и т. д.) связана с наличием ионизованных групп на поверхности носителя. Установлено, что в целлюлозе и крахмале, например, имеется значительное количество карбоксильных групп. Так как эти группы заряжены отрицательно, опасность адсорбции относительно мала для отрицательных ионов, но велика для положительных. Делались попытки уменьшить заряд бумаги этерифи-кацией карбоксилов диазометаном. С белками рекомендуется работать при pH выше их изоточки, тогда электростатическое отталкивание препятствует адсорбции. Этот эффект можно усилить, используя ионообменную бумагу, в которой с поверхностью целлюлозных волокон химически связано значительное число ионизированных групп с зарядом, противоположным заряду исследуемого иона. Для уменьшения адсорбции белков применялись также детергенты иногда помогает предварительная обработка носителя раствором исследуемого белка. Хотя в некоторых случаях эти меры приносят желаемый эффект, адсорбция часто (для белков — почти всегда) наблюдается в той или иной степени при электрофорезе на твердом носителе. Обратимая адсорбция проявляется в уменьшении скорости движения и в образовании хвостов у движущихся зон, что ухудшает разделение и затрудняет количественный анализ. Необратимая адсорбция приводит к тому, что на всем пути зоны остается равномерный след — адсорбированный белок, а количество вещества в зоне постепенно уменьшается. Если это количество мало, зона может вообще исчезнуть по дороге. Иногда адсорбция сопровождается денатурацией белка, частичной или полной потерей его биологической активности. [c.81]

Лиофобные КОЛЛОИДЫ (в воде) Положение нулевой точки заряда, рА0 Белки Положение изоточек, pH [c.102]

Однако обычно один из ионов соли связывается белком сильнее, чем другой. В этом случае происходит смещение изоточек белка, причем изоионная и изоэлектрическая точки смещаются в противоположные стороны (А. Г. Пасынский). Поясним это обстоятельство на примере преимущественной адсорбции анионов (например, ионов I") белками.Эта избыточная адсорбция анионов всегда сопровождается вытеснением части связанных ионов ОН" в раствор. Предположим, что на каждой белковой молекуле поглощено в чистом водном растворе т ионов Н и т ионов ОН в растворе соли т ионов Н , (т — п) ионов ОН и ионов I" при этом обычно > п, вследствие чего т — п 8> т. [c.103]

Практически можно подобрать такую концентрацию ионов водорода, при которой количество ионов РСОО и НЫНз будет одинаковым. Такое состояние называется изоэлектрическим. Концентрация ионол водорода, при которой белок находится в изоэлектрическом состоянии, называется изоточкой белка. [c.192]

Рассмотрим поведение белка с изоточкой 6 (рис. 1) в трубке со стабилизованной средой и с постепенным возрастанием pH рт значения 3 (ввер.ху) до значения 10 (внизу). Через колонку [c.298]

Электрофоретическая подвижность и измеряется по величине перемещения, рассчитанной для времени 1 сек., и падения потенциала 1 в см и имеет размерность [см в сек. В качестве примера укажем, что для частиц различных коллоидов (АзаЗд, берлинская лазурь, РегОз и др.) и = =2—3-10 , для белков (вблизи изоточки) и=0,4—0,8-для эритроцитов (при pH крови) различных животных и = 1,0—1,7 10 , и т. д. Величина электрокинетичес-кого потенциала С вычисляется при известной а по следующему уравнению [c.110]

Наконец этот вопрос был детально изучен для белков, так как в чистых водных растворах заряд белковых молекул определяется только поглощением Н+ или ОН -ионов, что легко может быть измерено при помощи водородного или стеклянного электрода. Для белков поглощение Н+ - и 0Н - ионов непосредственно сопоставимо с константами диссоциации ионогенных групп — карбоксильной Ка и аминогруппы Кв- Точка нулевого заряда, т. е. точка равного поглощения Н+ - и ОН - ионов, называется для белков изоионной (Зеренсен) или изопротонной точкой. Положение изоточки (рУ) на шкале pH определяется для 1—У-валентного амфотерного электролита уравнением Михаэлиса [c.114]

На понижении растворимости и переходе от полного смешения к ограниченной растворимости основаны также многочисленные случаи коацервации (Бунгенберг-де-Ионг). Так, например, коацерваты с расслоением в капельножидкой форме или в виде двух слоев могут быть получены из водных растворов желатины добавлением спирта или сернокислого натрия, из спиртовых растворов проламинов при разбавлении их водой, из положительно заряженных молекул желатины (при pH 1,2—4,8) и отрицательно заряженных частиц гуммиарабика или крахмалофосфорной кислоты, из растворов двух белков с сильно различными положениями изоточек, из растворов белка и нуклеиновых кислот и др. Во всех этих случаях коацерваты возникают в условиях перехода к взаимно ограниченной растворимости компонентов раствора. Степень расслоения полимеров при коацервации очень велика, например, при получении коацервата из 1%-ного раствора желатины до 93% ее количества входит в состав коацерватного слоя, а при более низких концентрациях — относительно еще больше поэтому оба слоя при коацервации резко различаются по содержанию коллоидных веществ. Физико-химические свойства коацерватов в ряде отношений напоминают соответствующие свойства протоплазмы, что привлекает к ним внимание биологов согласно Опарину, коацервация имела большое значение для пространственного отделения и организации коллоидных веществ в истории возникновения жизни на Земле. [c.187]

Исследование солюбилизации бензола в растворах яичного альбумина, пепсина и химотрипсина при разных значениях pH среды показало, что глобулярные белки обладают наибольшей солюбилизирующей способностью по отношению к бензолу вблизи изоэлектрической точки. Эта особенность, очевидно, является общим свойством глобулярных белков. Процесс денатурации, происходящий с глобулярными белками в растворах при pH, далеких от изоточки, приводит к уменьшению растворимости бензолав растворах белков. [c.25]

Величины О и йи1й рН) отражают свойства разделяемого вещества. Из уравнений (2) и (3) следует, что узкие зоны должны получаться при фракционировании веществ с низкими коэффициентами диффузии и крутым подъемом кривой подвижности вблизи изоточки. Именно эти свойства характерны для белков, что делает их наиболее удобными объектами изоэлектрического фокусирования. Кроме того, вполне очевидно, что для достижения хорошего разрешения необходимо использовать высокое напряжение и пологий градиент pH. В соответствии с этим при конструировании прибора необходимо предусмотреть отвод тепла, а также возможность создания пологого и стабильного градиента pH в среде, обладающей хорошей проводимостью. [c.300]

Вестерберг и Свенссон [24] вывели уравнение для минимального А pH изоточек двух белков, достаточного для их разделения электрофокусированием [c.319]

Эти авторы [24] разделили миоглобнны с Api 0,06 на колонке объемом 110 мл при 1000 В в диапазоне pH 6,5—7,5. Используя коэффициент диффузии миоглобина и ряд других параметров этого эксперимента, они рассчитали, что разрешение составляет 0,02 единицы pH. На этом основании авторы указывают, что если разницу в изоточках двух белков удается зафиксировать с помощью хорошего рН-метра, то такие белки могут быть разделены плавным электрофорезом . Эта теоретическая оценка разрешения подтверждена экспериментально 26, 45]. [c.319]

Взаимное расположение ионогенных групп в макромолекулах белков существенным образом влияет на конформацию пептидных цепей и морфологию. Наиболее выгодным состоянием с минимумом свободной энергии должны обладать такие структуры амфотерных макромолекул-цвиттерионов, в которых были бы сближены (в изоточке) противоположно заряженные функциональные группы. Подобному расположению групп и, следовательно, полипептидных цепей мешают ограниченная гибкость цепей, близость ионогенных функциональных групп в первичной структуре и наличие внутримолекулярных водородных, вандерваальсовых и ковалентных связей. Можно было бы думать, что нарушение вторичной или третичной структуры вызовет увеличение локальной цвит-терионности — сближение противоположно заряженных групп в макромолекуле белка. Это действительно имеет место при плавлении а-спирали, в процессе нагревания В-цепи инсулина или [c.196]

Электрофоретическая подвижность и измеряется по величине перемещения, рассчитанной для времени 1 сек, и падения потенциала 1 в1см она имеет размерность [см в-сек. В качестве примера укажем, что для частиц различных коллоидов (АззЗз, берлинская лазурь, РезОз и др.) и — 2-3-10" , для белков (вблизи изоточки) и = [c.97]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология