Мышь ген идентификация

Для идентификации трансгенных животных вьщеляют ДНК из маленького кусочка хвоста и тестируют ее на наличие трансгена с помощью блот-гибридизации по Саузерну методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Чтобы определить, находится ли трансген в клетках зародышевой линии животного, трансгенную мышь скрещивают с другой мышью. Далее можно проводить скрещивание потомков для получения чистых (гомозиготных) трансгенных линий. [c.421]

Через 20 — 30 дней после заражения берут кровь у морской свинки (или мыши) и ставят РА. Затем животных забивают, вскрывают и делают посевы крови, взятой из сердца, взвеси из внутренних органов и лимфатических узлов. Идентификацию возбудителя ведут, как описано выше. [c.131]

Продемонстрирована возможность идентификации злокачественных опухолей [193]. Пирограммы здоровых клеток мышей идеально совпадали, тогда как пирограммы опухолевых клеток имели различия по величине пиков группы соединений, [c.225]

В ряде случаев для определения частоты соматического мутагенеза необходимо исследовать огромное число клеток, экспрессирующих один и тот же V-ren. Практический подход для идентификации такой группы состоит в характеристике иммуноглобулинов, получаемых от серии клеточных линий, осуществляющих иммунный ответ на одинаковый антиген. (Используемые для этой цели антигены представляют собой маленькие молекулы, имеющие дискретную структуру, которая, по-видимому, обусловливает стойкий иммунный ответ. Они отличаются от больших белков, отдельные части которых могут стимулировать образование разных антител. Эти маленькие молекулы получили название гаптенов. Для того чтобы придать им свойства антигена, их соединяют с инертным белковым носителем. Иммунизируя таким антигеном мышь, получают реактивные лимфоциты, которые соединяют путем слияния с миеломными клетками для получения гибридом. Такие гибридные клетки продолжают независимый синтез желаемого антитела.) [c.515]

Вариабельность потери хромосом человека у клеточных гибридов мышь—человек облегчает картирование человеческих генов. Для картирования генов мыши используют клеточные гибриды мышь—хомячок. Если присутствие продукта изучаемого гена коррелирует с наличием какой-либо одной хромосомы в гибриде, то этот ген, скорее всего, локализован в этой хромосоме. Должны соблюдаться два условия. Во-первых, исследуемый признак, кодируемый хромосомами человека, должен четко (на клеточном уровне) отличаться от аналогичного признака мыши. Например, исследуемая линия клеток человека содержит мутантную лактатдегидрогеназу А (LDH-A). Этот фермент отличается от белка, кодируемого соответствующим мышиным геном. Эти две формы легко разделяются при гель-электрофорезе. Второе условие, необходимое для картирования,-возможность идентификации данной человеческой хромосомы, присутствующей в исследуемой клеточной линии. [c.297]

Анализ выделенной ДНК Идентификация трансгенных мышей [c.312]

Таблица 10.2. Идентификация стадий эстрального цикла у самок мышей

Идентификация трансгенных мышей [c.343]

Как упоминалось выше, факты неравновесия по сцеплению, как и собственно идентификация генов иммунного ответа (1г) у мыши, стимулировали в последние годы многочисленные попытки поиска ассоциаций HLA-системы с заболеваниями, которые оказались в ряде случаев успешными (разд. 3.7.3). [c.220]

Для отбора нужных клонов гибридных соматических клеток применяют селективные среды. Для идентификации многих белков используют технику электрофореза, позволяющую различать гомологичные белки человека и мыши. Таким образом локализуют гены в определенных хромосомах. [c.261]

Для выявления вирусного антигена в зараженных клетках используют флуоресцирующие антитела. В каждую лунку планшета Терасаки вносят по 5 мкл конъюгированных с флуоресцеином антител против одного из вирусных антигенов (например, против нуклеокапсидного белка) и инкубируют планшет 30—60 мин при 37 °С во влажной камере. Следует убедиться в том, что на стенках лунок отсутствуют пузырьки воздуха. Альтернативный, непрямой метод идентификации вирусных антигенов предполагает использование моноклональных противовирусных антител мыши и конъюгированных с флуоресцеином антител против иммуноглобулинов мыши. [c.121]

Позиционные системы регулирования широко используются в про.мыш-ленных и бытовых объектах. В то же вре.мя они все еще реализуются традиционным способом в рамках классической теории регулирования. Их почти не коснулись такие понятия современной теории упраатения, как идентификация, адатагп1я, оценивание состояния, нечеткое управление и др. [c.213]

Рис. 19.1. Получение линии трансгенных мышей с использованием ретровирусных векторов. Эмбрион, обычно находящийся на стадии 8 клеток, инфицируют рекомбинантным ретровирусом, несущим трансген. Самки, которым бьи имплантирован эмбрион ( суррогатные матери), производят на свет трансгенное потомство. Для идентификации мьщ1ат, несущих трансген в клетках зародьшгевой лршии, проводят ряд скрещиваний.

В 1980 г. Верховный суд США вынес определение, что изобретение, которое включает что-либо, созданное под солнцем руками человека , является охраноспособным. В 1988 г. было запатентовано первое животное, полученное с помощью методов генной инженерии, — трансгенная мышь. В ее ДНК бьш встроен ген, ответственный за образование злокачественных опухолей (онкоген), который находился под контролем промотора на основе длинного концевого повтора вируса опухоли молочных желез мыши (ЬТЯ ММТУ). Онкоген представлял собой ген туе вируса миелоцитоматоза цыпленка ОКЮ. Изобретение заключалось в клонировании химерного гена ЬТК ММТУ—т>>с в плазмиде, введении линеаризованной плазмидной ДНК в мужской пронуклеус оплодотворенных одноклеточных мышиных яйцеклеток, идентификации потомков, экспрессирующих ген туе, и получении линий трансгенных мышей. У животньгх одних линий ген туе экспрессировался в различных тканях, у животных других экспрессия ограничивалась одной или несколькими тканями. По утверждению Ледера [c.538]

Линия гибридомных клеток не истинно нейрональная модельная система, однако она должна быть упомянута здесь, поскольку представляет собой полезный инструмент исследования в нейрохимии. Каждый В-лимфоцит обычно секретирует только один тип антител. Смесь большого числа моноспецифических антител образует нормальную гетерогенную антисыворотку. Для получения высокопродуктивных моноспецифических лимфоцитов, секретирующих антитела, Кёлер и Милштейн проводили слияние В-клеток иммунной мыши с опухолевыми клетками. В отличие от нормальных лимфоцитов, полученные гибридные клетки растут и размножаются практически бесконечно и продуцируют смесь антител против антигена, используемого для иммунизации. Даже если антиген является индивидуальным белком, продуцируемые антитела представляют собой смесь многих антител, каждое из которых направлено против одного специфичного антигенного участка исходной молекулы. Для получения моноспецифической сыворотки, т. е. раствора антител против одной антигенной области и происходящих из одного вида гибридомных клеток, эти клетки необходимо отобрать и клонировать . Теперь клон продуцирует моноклональные антитела , гомогенную популяцию антител против только одной детерминанты антигена. Эти моноклональные антитела можно пспользовать для разнообразных исследований, например для идентификации функциональных участков молекулы. Но что еще более важно, такой метод может использоваться для полу- [c.371]

Окончательную идентификацию выделенных клостридий газовой гангрены проводят путем выявления и типирования их экзотоксинов. Для этого ставят реакцию нейтрализации с поливалентными и моновалентными сыворотками (к токсинам С. perfringens, С. septi um, С. novyi А vi В). Центрифугаты 3-дневных бульонных чистых культур, содержащие экзотоксины, смешивают с соответствующими сыворотками и после 30-минутной экспозиции при 37 С по 0,5 мл смеси внутрибрюшинно вводят лабораторными животным (мышам). Результат учитывают через 5 ч и окончательно — на 3 —4-е сут. В случае нейтрализации (положительный результат) животные выживают, в контроле и при отрицательном результате (несоответствие сыворотки типу токсина) — погибают (обычно через I—4 ч). [c.192]

Для подтверждения диагноза мозг заболевших мышей исследуют на наличие телец Бабеша—Негри или антигена вируса бешенства в РИФ. Идентификацию проводят с помощью PH на мышах. [c.307]

Эмбриональные и другие ткани для репродукции вирусов и получения вирусных вакцин. Из эмбриональных тканей наиболее широко используемыми являются эмбриональные ткани цыпленка, мыши и человека. Особенной выгодой отличаются куриные эмбрионы (по доступности) десяти-двенадцатисуточного возраста, используемые преимущественно для репродукции вирусов и последующего изготовления вирусных вакцин. Куриные эмбрионы введены в вирусологическую практику в 1931 г. Г. М. Вудруфом и Е. У. Гудпасчером. Такие эмбрионы рекомендуют также для выявления, идентификации и определения инфицирующей дозы вирусов, для получения антигенных препаратов, применяемых в серологических реакциях. [c.544]

Неупорядоченное размещение различных клеток в костном мозге затрудняет идентификацию каких-либо предшественников зрелых кровяных клеток, кроме самых непосредственных. На очень ранних стадиях развития, когда видимая дифференщ1ровка еще не началась, все клетки-предшественницы чрезвычайно сходны между собой по внешнему ввдУ, а как выглядят первичные стволовые клетки, вообще остается предметом догадок. Результаты чисто описательных исследований сами по себе не позволяют даже утверждать, что эти стволовые клетки действительно находятся в костном мозге, и не дают ответа ва вопрос, существует ли свой тип стволовой клетки для каждого типа клеток крови. Однако с помощью эксперимента на эти вопросы можно ответить. Большая часть наиболее важных данных получена в опытах на мышах. [c.163]

Первые экспериментальные данные о канцерогенном действии ПАУ на легкие были получены в 1934 г. при исследовании пыли, собранной с покрытых гудроном дорог. По свидетельству Кэмпбелла [37], такая пыль помимо рака кожи вызывает появление первичных опухолей легких у мышей. Эксперименты других ученых с печной сажей [38, 39], пылью городских улиц и из воздухоочистительных установок [40] подтвердили, что у мышей, находящихся в контакте с пылью, заболевания раком легких встречаются чаще (хотя и не найного), чем у контрольных. В этих исследованиях идентификацию канцерогенов не проводили, но в 1946 г. Хайгер [41], подвергнув нефлуоресцирующий бензол действию лондонского воздуха, обнаружил в нем примеси БаП. Было высказано предположение [42],что копоть, образующаяся при сжигании угля, служит причиной повышенной смертности от рака в городах по сравнению с деревней. В 1949 г. Гоулден и Типлер 43] начали работы по идентификации активных канцерогенных 1АУ в бытовой саже. Они использовали для разделения колоночную хроматографию на оксиде алюминия, а для идентификации — флуоресцентную спектроскопию. Эта работа положила начало использованию жидкостной хроматографии для анализа воздушных загрязнений. [c.135]

Идентификация чужеродных клеток в организме облученного животного — это проблема, к решению которой подошли различными путями. В экспериментах, проведенных van Bekkum, крысиные эритроциты в циркулирующий кр01ви были идентифицированы методом агглютинации со специфической антисывороткой, а гра-нулоциты крысы и мыши можно было различить по реакции щелочной фосфатазы 6, 7]. Другие иммунологические i[8] и цитологические [4] методы требуют забоя исследуемых животных. [c.405]

Первая четкая идентификация онкогенного вируса относится к 1911 году, когда Раус обнаружил, что фактором, вызывающим саркому у кур, является вирус. С тех пор, и особенно после 1950 года, было открыто много других вирусов, вызывающих либо плотные опухоли, либо опухолевые заболевания лимфатической системы (лейкозы) у птиц и мышей. Все эти вирусы оказались более или менее родственными как с химической, так и с биологической точек зрения (табл. И). Вирус Биттнера (фактор молока) [41] также обнаруживает сходные физические и биологические свойства и поэтому может быть включен в число этих так называемых лейковирусов, хотя серо.яогпчески он, по-видимому, им не родствен. [c.273]

Концепция онкогена содержит в себе противоречие с одной стороны, в первой части этой главы мы привели множество аргументов в пользу того, что для возникновения рака единичной мутации недостаточно с другой стороны, онкоген - это доминантный ген, обладающий способностью вызывать неопластическую трансформацию клеток в культуре. Это кажущееся противоречие отражает пропасть межд> упрощенными моделями рака, наиболее широко используемыми в молекулярно-биологических исследованиях, и сложностью реальной болезни > человека. Стандартный метод идентификации онкогенов выявляет их действие не на нормальные человеческие соматические клетки, а на линию мышиных клеток ЗТЗ эти клетки уже претерпели мутапии в пропессе перевода в культуру, что и делает удивительно легкой их трансформапию при единичном дополнительном генетическом изменении. Более того, как указывалось в разд. 21.1.4, мыши в меньшей степени подвержены риску возникновения рака (у них короче продолжительность жизни и меньше общее число клеток), чем человек, и поэтому их клетки могут быть менее надежно защищены от последствий канцерогенных мутаций по сравнению с клетками человека. [c.475]

Результаты анализа на биохимическом уровне у человека сопоставимы с результатами, полученными в экспериментальной генетике таких видов, как Drosophila melanogaster, мышь, кукуруза, шелковичный червь и другие. У этих видов во многих случаях мутации идентифицировали не на основе изменений специфических белков, ферментативных дефектов или аберрантных антигенов, а благодаря опытам по скрещиванию и рекомбинационному анализу, что в совокупности обеспечивает эффективный альтернативный подход к идентификации индивидуальных генов. [c.231]

Тест-системы для идентификации различных мутаций in vivo в половых клетках мыши. Тест-системы с использованием этого животного можно подразделить на системы in vivo и in vitro и на системы для идентификации мутаций в половых и соматических клетках. [c.230]

Опыты с ДНК, выделенной из клеток опухолей, также свидетельствуют о существовании онкогенов. Метод обнаружения клеточных онкогенов получил название переноса генов или трансфекции . Он основан на том, что некоторые гены, присутствующие в опухолевых клетках, могут вызывать трансформацию нормальных клеток в культуре. Из опухолевых клеток выделяют ДНК, осаждают фосфатом кальция и добавляют к клеткам-реципиентам (обычно в этой роли выступает линия мыщиных фибробластов NIH/3T3). Через 1—2 недели под микроскопом наблюдают образование фокусов трансформации. Клетки, составляющие фокус, меняют свою морфологию из распластанных они становятся округленными. Из трансформированных клеток выделяют ДНК, и опыт повторяют. Так делают несколько раз, при этом уменьщается количество ДНК, не участвующей в переносе признака трансформации, и, следовательно, облегчается идентификация специфических генов (при помощи гибридизации по Саузерну (см. гл. 36)). С помощью этого метода было идентифицировано около 20 клеточных онкогенов некоторые из них сходны с геном га, вируса саркомы мышей. Эти клеточные онкогены либо вообще не отличаются от нормальных генов, либо имеют небольшие структурные особенности (см. ниже). В первом случае при опухолевом перерождении может меняться регуляция их экспрессии. [c.359]

Для приготовления и анализа образцов использовали методы, предотвращающие перемещение веществ, способных к диффузии, и давали надежные результаты о внутриклеточной концентрации элементов. Мы выбрали для образцов оптимальные условия, способствующие этой цели, и не пользовались их химической фиксацией и покрытием металлами. На рисунке (см. вклейку) представлена электронная микрофотография нормальной двенадцатиперстной кишки мышей, приготовленной для рентгеновского микроанализа, описанного в этой главе. Хотя мы не пользовались фиксацией и не покрывали ткань металлами, морфология среза оказалась качественно пригодной для идентификации разных типов клеток и дала даже некоторую внутриклеточную характеристику при малом увеличении. Гранулы больших клеток Панетта, находящихся у основания крипт, а также митотический хроматин можно четко различить от [c.368]

Идентификация бактерий туляремии основывается на совокупности следующих признаков характерной морфологии и окраске микробных клеток в мазках, специфичности микробного роста на свернутой желточной среде Мак-Коя, отсутствии роста на мясо-пептонном агаре, агглютинации микроба специфической туляремийной сывороткой, патогенности бактерий в отношении белых мышей с воспроизведением типичной натологоанатомической картины. [c.268]

Возможность применения ловушки для отлова насекомых разных видов — зто уже другая характеристика ловушки, специфичность. Наименее специфичны клеевые (особенно открытые варианты) и злектроубивающие ловушки. Они отлавливают всех насекомых, которые к ним прикоснутся, здесь зависимость от поведения насекомых минимальна — достаточно, чтобы они приблизились вплотную к поверхности ловушек. В связи с зтим такие ловушки могут применяться для отлова самых разных насекомых, и это подтверждает практика использования ловушек. Эти ловушки наиболее пригодны в начальный момент работы, когда поведение насекомого недостаточно изучено или привлекающее вещество еще не совсем отработано и не обладает полной эффективностью. С другой стороны, неспецифичность имеет и отрицательную сторону. Например, насекомые могут попадать в клеевые ловушки в значительном количестве даже при отсутствии приманки для них из-за активности, не связанной с привлечением на феромон [332, 391]. В связи с зтим встает задача отделить привлеченных насекомых от попавших случайно. Если посторонние виды близки к привлекаемым приманкой морфологически, то необходима идентификация каждой пойманной особи, что бывает трудоемко, особенно когда насекомые испачканы клеем. Клеевые ловушки, кроме насекомых, нередко отлавливают птиц и летучих мышей [372]. [c.252]

В противоречии со всеми этими результатами находится работа Н. Г. Хруш,ова (1970) о том, что у мышей радиохимер фибробласты в зоне асептического воспаления относятся к клеткам донора костного мозга. По мнению Барнса др. (1971), в этом исследовании была проведена правильная идентификация клеток по хромосомным маркерам, ио в определении морфологической принадлежности клеток (гистиоциты или фибробласты) была допущена ошибка. [c.150]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология