Лейцин в смеси

Вопросу анализа аминокислот методом хроматографии на бумаге посвящено большое число работ советских и иностранных авторов. Однако почти все они связаны с разделением аминокислот белков и других биологических препаратов [61. Наша попытка применить их для анализа мелассы не дала положительных результатов, что можно объяснить мешающим действием остальных компонентов мелассы, ио отношению к которым содержание отдельных аминокислот составляет лишь 0,1—3 вес. %. Описанный в литературе метод 17, 81, состоящий в сорбции аминокислот на катионите с последующей их элюцией и идентификацией на бумаге неудобен, так как требует сложной специальной аппаратуры и чрезмерно длителен. Первой частью нашего исследования было хроматографическое разделение искусственной смеси из десяти аминокислот, приблизительно имитирующей аминокислотный состав мелассы [1, 81. Смесь включала лизин, аргинин, серии, глицин, аспарагиновую и глютаминовую кислоты, а-аланин, валин, метионин и лейцин. Растворы аминокислот готовили в 15%-ном этиловом спирте с концентрацией 0,5—1 у аминокислоты в 1 мкл. [c.212]

Аминокислоты- свндетели — 50 мМ растворы отдельных аминокислот в смеси муравьиная кислота — уксусная кислота — вода (7 5 13). Смесь А — равные объемы растворов тирозина, фенилаланина, глутад гиновой кислоты, лейцина, серина, аланина, аргинина и лизина. Смесь Б — равные объемы растворов аспарагиновой кислоты, треонина, пролина, валина, аланина, глицина и гистидина. [c.137]

DL. -нзо-Лейцин (смесь трео- и алло-изомеров) [c.289]

I — глутаминовая кислота 2 — тирозин 3 — лейцин 4 — исследуемая смесь аминокислот [c.17]

Для определения коэффициента распределения можно использовать 0,01 эквимолярный раствор смеси трех аминокислот гистидина, валина, лейцина. Неподвижный растворитель—вода подвижный растворитель—смесь н-бутанола, уксусной кислоты и воды (4 1 5). [c.141]

Принцип метода. Смесь аминокислот дезаминируют азотистой кислотой и определенные объемы полученной смеси оксикислот окисляют хроматом или перманганатом. Содержание лейцина и валина рассчитывают из выходов ацетона после окисления СгОз [c.283]

Сухую бумагу размечают так, что линия старта находится на расстоянии одной трети (20 см) от катода. Гидролизат, растворенный в смеси ацетон — 1 н. НС1 или в 50%-ном растворе пиридина, наносят на сухую бумагу в минимальном объеме (10—20 мкл). С обеих сторон от образца-гидролизата на расстоянии 2—3 см наносят образцы отдельных ДНС-аминокислот- свидетелей , а также 2 стандартные смеси ДНС-аминокислот. Смесь А состоит из ДНС-производных аспарагиновой кислоты, пролина, треонина, валина, фенилаланина, бис-ДНС-лизина, а-ДНС-лизина, в-ДНС-лизина и ДНС-ЫНг. Смесь Б состоит из ДНС-производных цистеиновой кислоты, глицина, глутаминовой кислоты, серина, аланина, лейцина, изолейцина, гистидина, аргинина, а-ДНС-тирозина, о- и б с-ДНС-тирозина. На бумагу необходимо наносить не менее 1—5 нмоль каждой из ДНС-аминокислот. После нанесения образцов бумагу увлажняют буфером (с. 138), помещают в прибор для средневольтного электрофореза с источником пи- [c.150]

Полученная смесь легко разделяется, так как ь-лейцин растворим в кислотах и основаниях, а Н-ацетил-в-лейцин — только в основаниях. (Почему ) Наконец, в результате гидролиза N-aцeтил-D-лейцин а разбавленной кислотой освобождается в-лейцин (в виде соли). [c.393]

Менее эффективным методом является элюентная хроматография на ионитах, по емкости на два порядка уступающая вытеснительной технике. Однако ее несомненным преимуществом является возможность получения хроматографически чистых аминокислот. Еще в 1950 г. был разработан предельно простой метод препаративного разделения аминокислот на смоле дауэкс 50-Х8 в ступенчатом градиенте соляной кислоты [91]. Аминокислоты выделяли из элюата простым упариванием досуха. Однако в этом случае плохо разделяются серин и треонин, а также лейцин и изолейцин. Основные аминокислоты элюируют 4 н. раствором НС1, и тем не менее элюирование занимает много времени. Поэтому авторами была разработана новая схема элюирования — аммоний-ацетатным и аммоний-формиатным буферами, при которой достигалось полное разделение всех аминокислот. Первой стадией является элюирование ацетатными буферами на колонке с дауэксом 50-Х8 высотой 15 см. При этом происходит разделение основных аминокислот. Первые два пика содержат смесь аминокислот, которая разделяется при рехроматографии. Второй пик, соответствующий тирозину и фенилаланину, хроматографируют на колонке (высотой 60 см) с дауэксом 50-Х8. Материал, соответствующий первому пику, фильтруют через колонку (высотой 15 см) с ам- [c.356]

Метиловый эфир карбобензилокси Ь-лейцил-Ь-лейцииа [377]. Раствор 25 г карбобепзнлокси-Ь-лейцина и 13,2 мл триэтил-амипа в 200 жл ацетона охлаждают до —10° и обрабатывают 7,2 мл метансульфонилхлорида. Смесь перемешивают 4 мин при [c.283]

Этиловый эфир карбобензилоксиглицил-Ь-лейцил-О-трипто-фаиа [15]. К раствору 8,1 г карбобензилоксиглицил-Ь-лейцина и 7 мл триэтиламина в 70 мл толуола, охлаждецпому до 0°, прибавляют 4,8 3 п-толуолсульфохлорида и смесь перемешивают 30 мин. К раствору полученного смешанного ангидрида прибавляют раствор 6,6 г этилового эфира О-триптофана в 40 мл теплого толуола. Смесь быстро нагревают до 65°, поддерживают эту температуру 5 мин, а затем охлаждают. Раствор последовательно промывают водой, разбавленной соляной кислотой и водным раствором бикарбоната натрия, затем растворител"ь отгоняют и получают 7, г препарата с т. пл. 127—130 . [c.283]

Полученную аминокислоту перекристаллизовывают, растворяя все количество неочищенниго вещества в 12,5 л воды при нагревании до 95° на паровом нагревателе. Горячий раствор обрабатывают 20 г активированного березового угля в течение получаса и фильтруют в горячем состоянии. К фильтрату немедленно прибавляют равное по объему количесгво 95%-ного спирта и помещают колбу на ночь в холодильный шкаф. Кристаллическое вещество отделяют на фильтре и промывают 200 мл 95 о-ного спирта. Полученная порция чистого лейцина составляет 290— 300 г. Добавочную порцию можно получить, если выпаривать маточный раствор в вакууме до тех пор, пока не выделится значительное количество твердого вещества (объем жидкости составляет около 1 л), а затем прибавить к нему равное по объему количество спирта и смесь охладить. Эту порцию кристаллов промывают сперва 100л1уг холодной воды, а затем 200 ла спирта. Полученное ве-,щество весит 60—65 г. Общий выход чистого лейцина составляет 350—365 г (43—45% теоретич.). В запаянном капилляре лейцин разлагается при 290—292° (не исправл. примечание 4). [c.276]

В двухгорлую круглодонную колбу емкостью 0,5 л, снабженную механической мешалкой и обратным холодильником, помеш.ают 13,1 г (0,1 М) лейцнна, 18,6 г (0,1 /VI) динитрофтор-бензола, 15 s двууглекислого натрия и 400 мл 50%-ного этилового спирта. Реакционную смесь иеремешиеают 1,5 часа при температуре водяной бани 60°, Спирт отгоняют в вакууме водоструйного насоса, а водный остаток экстрагируют 3 раза (по Ь мл) эфиром для удаления непрореагировавшего динитро-фторбензола. Водный раствор подкисляют концентрированной соляной кислотой до кислой реакции по бумажке конго (30 мл). Выделившееся масло промывают ледяной водой (3 раза по 25 2,4-ДНФ-лейцин перекристаллизовывают из смеси эфир петролейный эфир (1 1). Выход 17 г (60% теории). Т. пл. 118—120 . [c.115]

Смесь ь-лейцина (10 г, 76 ммолей), /3-нафтола (11 г, 76 ммолей) и безводного сульфита натрия (9,6 г, 76 ммолей) помешают в устойчивый к действию давления сосуд с магнитной мешалкой. Туда же добавляют насыщенный раствор бисульфита натрия (60 мл), сосуд плотно закрывают и медленно при перемешивании нагревают до 115°С. Через 4 сут сосуд охлаждают и выливают содержимое в литровый стакан, после чего сосуд ополаскивают последовательно 5 %-ным раствором бикарбоната натрия и ацетоном. Объединенные промывные жидкости и реакционную смесь разбавляют до 500 мл водой и доводят pH до 8,5—9,0 (с помощью карбоната натрия). Смесь экстрагируют дважды метиленхлоридом (порциями по 50 мл), чтобы удалить непрореагировавший 3-нафтол. Органический слой промывают дважды порциями по 20 мл 5 %-ного раствора бикарбоната натрия и промывные воды объединяют с водным слоем. Далее pH водного слоя доводят до 3—3,5, добавляя 6М соляную кислоту (сопровождается выделением СО2 и ЗОз), и выпадающий при этом белый осадок удаляют фильтрованием. Фильтрат экстрагируют несколько раз этилацетатом и объединенные экстракты упаривают. Остаток добавляют к первой порции продукта, собранной фильтрованием, и все вместе пе-рекристаллизовывают из 95%-ного этанола. Выход замещенного лей- [c.251]

Для двумерной хроматографии пригодна смесь растворителей III и IV (рис. 159 [7]), и в особенности смесь растворителей VIII и IV (рис. 161 [9]). Они позволяют разделить все Р-аланин + у-амино-м-масляная кислота, кроме лейцина и изолейцина. Эти изомеры можно разделить в параллельном опыте при использовании проточного метода [13] с растворителем VII (рис. 162). [c.402]

Шербулье и др. [4] рекомендуют смесь гептан — пиридин — этилацетат (50 -Ь 30 -Ь 20) (разделение ФТГ-глицина, ФТГ-пролина и ФТГ-лейцина). [c.428]

Анализ таблицы показывает, что в первом растворителе (За) плохо разделяются валин и метионин, не разделяются глицин и аспарагиновая кислота, а во втором (46) вместе движутся аргинин и аспарагиновая кислота и близко друг к другу — глицин и серии. Для разделения аминокислот, дающих одно пятно в бутанольно-водном растворителе, применяли смесь фенола с фосфатным буфером с рН=12. Кроме того, для увеличения разрешающей способности растворителя для веществ с близкими Rf на пятно аминокислот на стартовой линии несколько раз наносили порции растворителя. При этом аминокислоты перемещаются на периферию пятен и проявляются в виде колец. Удовлетворительное разделение аминокислот при использовании бутанольно-водных растворителей достигается через 36 ч. Увеличение времени протекания растворителя не улучшает разделения, но пятна аминокислот получаются диффузными, особенно у веществ с большой величиной Ег (валин, метионин, лейцин). [c.214]

Из табл. 1 видно, что некоторые пары или даже системы из трех аминокислот можно разделить на одномерной хроматограмме, выбирая соответствующий растворитель. Так, в первом растворителе легко разделить, например, смесь лизина, метионинсуль-фона и лейцина между тем во втором растворителе эта смесь будет плохо разделяться. Наоборот, смесь лизина и гистидина нельзя разделить первым растворителем, но можно разделить при длительном хроматографировании со вторым растворителем. Наконец, некоторые трехкомпонентные смеси нельзя разделить, пользуясь только одномерной хроматограммой. Так, нельзя разделить указанными растворителями смесь тирозина, метионина и лейцина. В первом растворителе будут подниматься вместе тирозин и метионин, а во втором растворителе — метионин и лейцин. Названную смесь трех компонентов можно разделить при двухмерной хроматограмме. Можно также применять и другие растворители. [c.66]

Первую фракцию хроматографируют на силикагеле в следующих условиях в системе хлороформ — (этанол—петролейный эфир) (1 1) элюируют смесь ДНФ-лейцина и ДНФ-изолей-цина в системе хлороформ—(ацетон—циклогексан) — (этанол— петролейный эфир) (1 2 2) элюируют смесь ДНФ-валина и ДНФ-фенилаланина, которые можно разделить в той же системе, элюируя при соотношении компонентов 1 2 1 ДНФ-валин, а при соотношении 1 2 2 ДНФ-фенилаланин в системе хлороформ— (этанол—петролейный эфир) (1 3) элюируют ДНФ-ме-тионин, ДНФ-пролин и ДНФ-аланин. Эти аминркислоты разделяют в системах хлоро4горм—(этанол—петролейный эфир) — (метанол—четыреххлористый углерод), элюируя при соотношении 1 3 1 ДНФ-метионин и при соотношении 1 3 2 смесь ДНФ-пролина и ДНФ-аланина. Эту пару разделяют, добавляя в последнюю композицию этиленгликоль—бензол в соотношении 1 3 2 1 (ДНФ-пролин) и 1 3 2 2 (ДНФ-аланин). [c.361]

Примечание. Недавно Мур и Штейн [11] использовали хроматографию распределения на крахмале для разделения фенилаланина лейцина, нзолейцина, метионина, тирозина и валина. Подвижной фазой являлась смесь 1 1 0,288 н-бута-нол — бензиловый спирт — вода. Вытекающие из колонки фрак-ции автоматически собираются и исследуются на количественное содержание в них отдельных аминокислот. [c.390]

Рис. 29-9. Доказательство того, что полипептидные цепи растут за счет присоединения новых аминокислотных остатков к С-концу. Красным цветом отмечены те части цепей гемоглобина, которые содержат остатки радиоактивного лейцина через разные промежутки времени после добавления его в инкубационную смесь. Через 4 мин оказались мечеными лишь несколько остатков на С-конце а-гяобина. При более длительной инкубации с меченым лейцином мечеными становятся все большие и большие участки полипептидной цепи, причем меченые остатки лейцина всегда обнаруживаются в прилежащей к С-концу части цепи. Следовательно, полипептидные цепи растут в результате последовательного присоединения аминокислот к С-концу.

А, Н. Белозерским и Т. С. Пасхиной и продолженное затем зарубежными исследователями, показало, что он представляет собой полипептид, дающий при гидролизе эквимолекулярную смесь пяти аминокислот L-лейцина, D-фенилаланина, L-пролина, L-валина и L-орни-тина. Этот пентапептид повторяется в молекуле грамицидина дважды, причем концы цепи из десяти остатков аминокислот замыкаются в одно гигантское кольцо. Таким образом, грамицидин С представляет собой циклический декапептид [c.389]

N, N -дициклогексилкарбодиимида в 5 мл того же растворителя. Раствор охлаждают до 0° и при перемешивании прибавляют 6,4 г N, М -дитритил-Ь-гистидина. Реакционную смесь оставляют на ночь при комнатной температуре, затем прибавляют 0,5 мл уксусной кислоты, чтобы разрушить избыток карбодиимида, и выпавшую в осадок дициклогексилмочевину (2,5 г) отфильтровывают. Фильтрат промывают 5 н. водным раствором аммиака и водой, высушивают и выпаривают получают неочищенный эфир дитритил-Ь-гистидил-Ь-лейцина, который омыляют путем кипячения с обратным холодильником в течение 5 мин с 8 мл 20%-ного метанольного раствора едкого кали и 2 мл воды. Раствор разбавляют 30 мл воды, охлаждают и подкисляют уксусной кислотой, чтобы осадить неочищенную кислоту, выход которой после высушивания при 100° составляет [c.229]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология