Электрофорез аппарат Тизелиуса

Для электрофоретического разделения полисахаридов пользуются как аппаратом Тизелиуса, так и электрофорезом на бумаге или на стекловолокнистой бумаге, а также на колонке со стеклянным порошком. Последние два метода имеют преимущества перед бумажным электрофорезом, поскольку в этих случаях исключается взаимодействие полисахаридов с целлюлозой бумаги, обладающей сильными сорбционными свойствами. [c.56]

В самое последнее время в практику вошел электрофорез на бумаге, в известной мере заменяющий исследования на громоздком и дорогостоящем аппарате Тизелиуса. При этом на пропитанную буферным раствором полосу хроматографической бумаги наносят каплю белковой смеси (сыворотка крови, лимфа и т. п.). Сама середина бумаги подвешивается на подставке и ее концы погружаются в катодную и анодную ванны, заполненные буфером, с угольными электродами. На угольные электроды подается известное напряжение. Капля белковой смеси, продвигаясь к тому или иному полюсу, расслаивается. Белки, имеющие наибольший электрокинетический потенциал, продвигаются быстрее, белки с меньшим потенциалом отстают. [c.279]

Рпс. 3.1. Аппарат для фронтального электрофореза (по Тизелиусу) [c.50]

Разделять смеси белков посредством электрофореза начали еще в первые годы XX в. Однако до сравнительно недавнего времени этот метод применялся лишь в аналитических целях. В течение 30 и более лет широко использовался довольно Сложный аппарат Тизелиуса для электрофореза в свободном растворе, однако с его помощью не всегда удавалось добиться полного разделения компонентов. И до сих пор остается справедливым утверждение, что электрофорез — это в основном аналитический метод. Все современные более тонкие электрофоретические методы, такие, как гель-электрофорез, изоэлектрическое фокусирование и изотахофорез, были разработаны главным образом с целью улучшить способы анализа смесей белков. Тем не менее каждый из этих методов может быть приспособлен для препаративных целей с использованием десятков и даже сотен миллиграммов белковой смеси. [c.213]

Наиболее полное разделение смеси белков на индивидуальные компоненты достигается с помощью электрофоретических методов. Как уже обсуждалось в разд. 5.2, проведение препаративного электрофореза, несмотря на то что он обладает значительными теоретическими преимуществами, сопряжено с большими трудностями. Поэтому он используется не часто. В аналитическом же варианте электрофорез — это один из наиболее широко применяемых методов исследования. Действительно, чтобы охарактеризовать очищенные препараты белков, их теперь почти обязательно подвергают электрофоретическому анализу. Для проведения аналитического электрофореза в гелях требуется всего 5—25 мкг белка это обычно не слишком значительная часть полученного препарата. До того как были предложены гелевые системы, электрофоретический анализ проводили в аппарате Тизелиуса методом движущейся границы. Хотя для этого приходилось расходовать десятки миллиграммов белка, разделения очень сходных белков не достигалось и анализ каждого образца требовал больших усилий и внимания. Затем был разработан аналитический электрофорез на бумаге и других целлюлозных материалах, используемых в качестве носителей, что исключило два из указанных выше недостатков метода Тизелиуса количество необходимого для анализа белка значительно сократилось и проводить электрофорез стало намного легче, так как для этого метода требуется только простое оборудование. Однако разрешение осталось примерно таким же, как н прежде, даже при использовании обладающих хорошими качествами современных ацетатцеллюлозных пленок это объясняется тем, что разделение компонентов смеси происходит в соответствии только с приблизительной величиной отношения заряд/размер и многие белки движутся вместе в виде одной зоны (ср. с разд. 5.2). [c.316]

Наиболее совершенная и довольно сложная конструкция аппарата для электрофоретического разделения, предложенная Тизелиусом, основана на методе подвижной границы. Компоненты раствора (например, плазмы крови), обладающие различными подвижностями, пространственно разделяются в U-образном сосуде после длительного электрофореза. Оптическая система построена так, что свет, проходящий через сосуд в нормальном к нему направлении, преломляется на границах, которые разделяют растворы отдельных компонентов. [c.218]

Принципы, положенные в основу конструкции прибора Тизелиуса, описаны выше. Современный аппарат для фронтального электрофореза является сложным и дорогим устройством, вклю- [c.62]

Хотя метод электрофореза известен уже со второй половины XIX в., точные измерения на чистых белках стали проводить лишь после создания Тизелиусом усовершенствованного аппарата для электро ретического анализа методом подвижной границы. В этом приборе электрофоретическая кювета помещалась в низкотемпературный термостат, благодаря чему для разделения белков можно было использовать высокие градиенты потенциала, избежав тепловой конвекции. Сама кювета имела прямоугольное сечение, оптические поверхности и смещающиеся относительно друг друга части. Это позволило получать четкие границы раздела между белковым и буферным растворами и наблюдать изменения показателя преломления в зоне подвижных границ с помощью теневой оптической системы, использующей принцип Фуко—Теплера. [c.164]

Литературу по электрофорезу на бумаге несколько осложняет разнообразие терминологии, используемой различными исследователями. Михаэлис [1] в 1909 г. применил термин электрофорез при описании движения коллоидных ионов в электрическом поле в обзоре, изданном в 1945 г., Мартин и Синге [2] называют электромиграцию ионов с низким молекулярным весом в опорной среде ионофорезом. Разделения как маленьких, так и больших молекул, основанные на различиях в заряде, проводятся в одинаковых или сходных аппаратах, и по этой причине большинство исследователей склонны применять термин электрофорез с соответствующим прилагательным, указывающим на характер используемой опорной среды. Тизелиус и др. предложили удачное выражение зональный электрофорез для разграничения этих методов от метода подвижной границы. По-видимому, нет надобности вводить специальные термины для обозначения побочных эффектов, обусловленных хроматографией, адсорбцией или испарением. [c.244]

Имеется ряд аналогичных конструкций, позволяющих осуществить разделение больших количеств смесей. К ним относятся конструкция Свенсона [651, прибор Машбефа [46] и препаративный аппарат для электрофореза конструкции Тизелиуса [74]. [c.535]

Для анализа смесей кислых полисахаридов может с успехом применяться электрофорез в аппарате Тизелиуса. Таким путем, например, отделяют сульфированные полисахариды от полиуронидов водорослей при низких рН . Разделение нейтральных полисахаридов проводят в боратном буфере в условиях, при которых полисахариды различаются по способности образовывать комплексы с борной кислотой . Таким способом удалось легко отделить маннан от глюкана в водорастворимой фракции полисахаридов andida albi ans . [c.487]

Таким образом, если смесь белков поместить в электрическое поле, то белки с суммарным отрицательным зарядом будут передвигаться по направлению к аноду, белки с положительным зарядом — к катоду, а белки, находящиеся в изоэлектрической точке (т. е. с нулевым суммарным зарядом), останутся на месте. Разделение такой смеси можно проводить на фильтровальной бумаге, пропитанной буфером, на забуференных крахмальных колонках или в усовершенствованном аппарате для электрофореза, сконструированном Тизелиусом. Для подробного ознакомления с принципами, положенными в основу использования аппарата Тизелиуса, рекомендуем две статьи Олберти [ 1 ]. [c.16]

Электрофоретические данные. При электрофорезе эремурана в аппарате Тизелиуса мы получили очень сходную картину два пика (рис. 1) — подвижного и практически неподвижного компонента, а затем препаративно выделили две [c.57]

При электрофорезе в аппарате Тизелиуса (в боратном буфере) были обнаружены два компонента быстро движущийся,, составляющий главную часть препарата и медленно движущийся. Оба содержали глюкозу и маннозу и давали окрашивание с йодом. Осажденный в виде медного комплекса и затем регенерированный эремуран содержал глюкозу и маннозу в отношении 1 2. Выделенный из медного комплекса, он терял свою растворимость в воде, однако его хлопья, суспендированные в воде, окрашивались йодом в темный красно-бурый цвет. Слюнная амилаза и 3-амилаза не расщепляют эремуран. [c.216]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

Имеются еще два способа использования аппарата Тизелиуса для электрофореза по методу свободной границы, которые позволяют оценить гомогенность и полидисперсность макромолекулярных препаратов, а именно метод стационарной восходящей границы [25] и метод обратимого расширения границы [26, 27]. Оба метода позволяют отличить монодисперсные препараты от полидисперсных и не обязательно связаны с гомогенностью, как она определена здесь. Первый метод требует наблюдения восходящей границы при продолжительном электрофорезе. При этом наблюдается эффект обострения границы вследствие изменения проводимости в области ее зоны для монодисперсных препаратов этот эффект через некоторое время уравновешивается размыванием границы за счет диффузии. Форма границы становится тогда постоянной. Такое стационарное состояние не достигается для полидисперсных препаратов (метод не вполне строг [14]). Метод обратимого расширения границы предусматривает наблюдение стационарной границы в изоэлектрической точке. Граница электрофоретически полидисперсного материала будет расширяться в электрическом поле, и это расширение будет налагаться на расширение, вызываемое диффузией. Однако в противоположность расширению, вызываемому диффузией, электрофоретическое расширение будет обратимым при изменении направления тока [28]. Кажущийся коэффициент диффузии, рассчитанный для расширяющейся границы в электрическом поле Е в см), может быть представлен как функция времени [c.46]

I — прибор с горизонтальной камерой, в котором бумага располагается между стеклянными пластинами (S) 2 — прибор обычного типа [33], пригодный для горизонтального электрофореза белков (разработано много модифицированных его вариантов) 3 — прибор с горизонтальной камерой для разделения белков у этого прибора небольшой объем влажной камеры и насыщение парами электролита происходит быстро 4 — аппарат Кре-мера и Тизелиуса [14], в котором отвод тепла осуществляется с помощью инертной жидкости 5 — аппарат с подвешенной в центре бумагой, часто используется (в виде различных модификаций) для рутинного анализа белков и низкомолекулярных соединений [62, 108] 6 — прибор, в котором избыточное тепло бысттро удаляется иаертной жидкостью, например ССЦ пригоден для разделения низкомолекулярных соединений при градиенте [c.290]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология