Ацетилированные аминокислоты

Метод хроматографического экстрагирования для разделения смеси ацетилированных аминокислот впервые с успехом был применен А. Мартином и Р. Синджем в 1941 г. и назван ими распределительной хроматографией [97]. Вначале распределительная хроматография была предложена ими в обычном колоночном варианте, а затем в виде так называемой бумажной хроматографии. [c.149]

Мартин и Синдж [97] при разделении ацетилированных аминокислот пользовались чехословацким прибором, работающим по принципу противоточной колонки. Прибор состоял из 40 соединенных между собой экстракционных камер с мешалками. В настоящее время этот сложный прибор [c.437]

Задача 37.4. Каким образом можно ускорить а) этерификацию аминокислоты и б) ацетилирование аминокислоты [c.1042]

Прибор для мягкого ацетилирования аминокислот описан Уайтхедом [67]. [c.78]

Техника и приборы жидкость-жидкостной хроматографии те же, что и в адсорбционной хроматографии, основное отличие-— в природе неподвижной фазы. В первых работах Мартин и Синдж [59] осуществили разделение ацетилированных аминокислот, используя в качестве носителя водной неподвижной жидкой фазы силикагель. Подвижной фазой была смесь хлороформа, бутанола и воды. Метод применен для анализа аминокислот из различных протеинов [60]. [c.546]

В то время, когда Тизелиус начал систематическое изучение колоночной хроматографии, Синдж достиг успеха в опытах по выделению ацетилированных аминокислот из белковых гидролизатов путем проводившейся в воронках экстракции из водной фазы в органическую. Мартин и Синдж [21] сконструировали состоявшую из сорока сосудов экстракционную установку разделение ацетилированных аминокислот достигалось благодаря различиям их констант распределения между противоточными фазами — водой и хлороформом (рис. 1.2). Обе фазы перемешивали с помощью вибратора. Однако в том же 1941 г. была опубликована работа, автор которой осуществил аналогичное разделение на колонке, заполненной частицами силикагеля (рис. 1.3)-. Частицы силикагеля могут удерживать значительное количество водной фазы, оставаясь сухими на ощупь и твердыми. Хлороформ (органическая фаза) протекал в колонке между ча- [c.16]

Рис. 1.3. Разделение методом распределительной хроматографии на колонке с силикагелем. а — колонка 6 — частицы силикагеля с закрепленной на них неподвижной водной фазой, соответствующие экстракционным сосудам на предыдущем рисунке. Раствор смеси ацетилированных аминокислот А, и В вводят в колонку сверху и элюируют потоком (в) хлороформа. В ходе элюирования компоненты смеси различным образом распределяются между текущей органической фазой и закрепленной на поверхности силикагеля водной фазой, и при это.м постепенно происходит разделение смеси. Первой элюируется зона того вещества, которое в присутствии водной фазы лучше всего растворимо в хлороформе.

Очевидно, что описанные параметры газо-хроматографического анализа К-ТФА-бутиловых эфиров аминокислот могут быть использованы с меньшими или большими видоизменениями и для разделения ТФА-производных других эфиров. Это тем более важно, так как методика получения бутиловых эфиров К-трифтор-ацетилированных аминокислот является весьма трудоемкой и для получения соответствующих производных требуется значительно больше времени, чем для проведения собственно хроматографического разделения. Поэтому в настоящее время усилия многих исследователей направлены на исследование возможности более простого и количественного превращения аминокислот в летучие производные, что является необходимым условием для количественных определений аминокислот методом газо-жидкостной хроматографии. [c.265]

В 1941 г. был пред-ложен следующий метод разделения смеси ацетилированных аминокислот 2-. Подкрашенный метилоранжем силикагель пропитывался небольшим количеством воды и замешивался с 1 % -ным раствором бутилового спирта в хлороформе. [c.212]

Впервые метод распределительной хроматографии был применен для разделения ацетилированных аминокислот на силикагеле (Мартин и Синдж, 1941 Гордон, Мартин и Синдж, 1943). [c.144]

Некоторые авторы считают, что промежуточными соединениями при взаимном превращении f-амино- и ог-кетокислот являются ацетилированные аминокислоты [107] [c.378]

Fie природные аминокислоты, а анилиды и ацетилированные аминокислоты. Возможность столь легкого синтеза пептидов из подобных соединений объясняется тем, что продукты, образующиеся в результате этой реакции, нерастворимы в воде и удаляются нз системы в виде нерастворимых осадков. Поэтому равновесие (1) [c.386]

Другое предположение для объяснения механиз.л1а ферментативного синтеза пептидов из анилидов и ацетилированных аминокислот основано на том, что ни одно из веществ, участвующих в этом синтезе, не может образовывать цвиттерионы. Синтез пептидов из соединений, находящихся в неионизированной форме (реакция 1), требует значительно меньше энергии, чем синтез пептидов из соединений, находящихся в ионизированной форме (реакция 2) [21] [c.386]

Хлоруксусный ангидрид. Мол. в. 170,99 т. пл. 46°. Применяется для N-ацетилирования аминокислот в щелочном растворе . [c.414]

Главной трудностью элюционного анализа является образование хвоста , который в свою очередь, как указывалось, является результатом нелинейности адсорбционной изотермы. Распределение растворенного вещества между двумя несмешивающимися растворителями следует закону Генри, согласно которому концентрации вещества в двух фазах находятся в постоянном отношении. Это явление может иметь место также и при обычной адсорбции и, согласно Лэнгмюру, при низких концентрациях является правилом. Проводимый при таких условиях адсорбционный анализ должен сделать возможным применение проявления вымыванием без слишком сильного растекания зон. Мартин и Синдж [20, 21] впервые использовали этот принцип при разделении ацетилированных аминокислот, применяя увлажненный водой силикагель в качестве одной фазы и органические растворители в качестве другой. Мартин и Синдж по- [c.156]

К ацетилированию аминокислоты на носителе вместо присоединения следующего аминокислотного остатка. В диоксане, в свою очередь, могут накапливаться перекиси поэтому его необходимо очищать перед использованием (см. стр. 76). Если вместо раствора НС1 в диоксане применять раствор НС1 в СНзСООН, то программу А необходимо изменить следующим образом стадия 1 — промывка уксусной кислотой 3 раза, стадия 2 — обработка 1 н. раствором НС1 в уксусной кислоте, стадия За — промывка уксусной кислотой [c.86]

Если N-концевой участок белка удастся выделить в виде короткого пептида, то содержание в нем ацетилированной аминокислоты может быть определено после гидролиза хроматографическим или электрофоретическим анализом [414]. Для установления природы блокирующего остатка и одновременно аминокислотной последовательности пептида наиболее надежен прямой масс-спектрометрический метод (на анализ требуется — 50 пмоль пептида) (гл. 19), [6]. [c.266]

При первоначальной разработке метода Мартин и Синдж разделили смесь ацетилированных аминокислот на носителе — силикагеле — с водой в качестве стационарной фазы. Подвижная фаза представляла собой смесь хлороформа, бутанола и воды. Метод был использован для определения состава аминокислот различных нротеинов 5 . Свободные аминокислоты были разделены на крахмале, в качестве неподвижной фазы использовалась вода, подвижной — смешанный органический растворитель, насыщенный водой [c.541]

Разделяются только ацетилированные аминокислоты, так как свободные адсорбируются кремневым гелем. Метод количественный, Точность 5%. Пригоден для разделения моноаминомоно карбоновых кислот и серийных полу.микроопределенпй фенилаланина, лейцина, изолейцина, триптофана, валина, метионина, пролина, аланина и тирозина. [c.388]

Впервые метод колоночной распределительной хроматографии был использован Мартином и Сингом (Martin, Synge, 1941) для разделения ацетилированных аминокислот. Носителем неподвижной фазы служил силикагель, в качестве подвижного растворителя авторы применили смесь хлороформа с возрастающей концентрацией /(-бутанола. За разработку метода распределительной хроматографии Мартину и Сингу в 1952 г. была присуждена Нобелевская премия. [c.73]

Несмотря на утверждение о том, что этерификация раствором H I в пропаноле может проводиться после ацетилирования аминокислот уксусным ангидридом в уксусной кислоте [52], этот метод применим исключительно к аминокислотам, имеющим только а-ННг-группы. Мы обнаружили, что при этерификации смесью пропанол — H l 0-ацетилсерин, -треонин, -тирозин и e-NH-ацетиллизин полностью разрушаются (это относится к ТФА-метиловым эфирам [25]). Нами было также показано, что в отличие от ди-ТФА-производных н-пропиловые эфиры диацетиламинокислот (за исключением гистидина) относительно устойчивы в присутствии спирта (табл. 3). [c.114]

Хотя Герке выбрал н-бутиловые эфиры [78], на основании количественного измерения потерь при упаривании эфиров N-ТФА-аланина было сделано заключение, что достоверные результаты можно получить только с -амиловыми производными [27]. Потерь метиловых эфиров N-ТФА-аминокислот удавалось избежать только при упаривании избытка реагентов при низкой температуре [30]. По предварительным данным, полученным в лаборатории авторов, метиловые, этиловые и н-пропиловые эфиры ацетилированных аминокислот пригодны для газохроматографического разделения в интервале температур 100—240 °С. Этерификация проходит быстро, и при простой двухстадийной методике получения ацетил-н-пропиловых эфиров [23] нет потерь, связанных с упариванием (табл. 4). По этим причинам, а также из-за легкости разделения на покрытых карбоваксом хромосорбах G или W (высококачественные), мы остановили свой выбор на ацетил-н-пропиловых эфирах (см. разд. 2.4.7). [c.116]

Развитие хроматографических методов разделения и идентификации аминокислот значительно облегчило проведение исследований с аминокислотами многие успехи, достигнутые в изучении аминокислот за последнее время, непосредственно связаны с применением хроматографии. Занимаясь разделением аминокислот, Нейбергер [154] в 1938 г. обнаружил, что у ацетил-производных разных нейтральных аминокислот коэффициенты распределения между водой и несмешивающимися с водой растворителями различны. В 1941 г. хМартин и Синг [155] осуществили разделение ацетилированных аминокислот на силикагеле последний служил инертной опорой для водной фазы, через которую протекал неводный растворитель. В дальнейшем эта техника была усовершенствована. Большим достижением явилось использование фильтровальной бумаги в качестве неподвижной фазы [156], что привело к широкому развитию разнообразных методов хроматографии на бумаге (см. Блок и др. [157]). В настоящее время считают, что в процессе разделения веществ на бумаге наряду с распределением между растворяющими фазами играют роль также механизмы адсорбции и ионного обмена. [c.40]

Процедура анализа аминокислотного состава белка сводилась к следующему. Белок гидролизовали 6 н. НС1 в запаянных под разрежением трубках в течение 24 час. Избыток НС1 удаляли выпариванием под вакуумом. Остаток разбавляли в небольшом количестве воды, затем подщелачивали 6 н. NaOH до щелочной реакции по тимолфталсину. Часть гидролизата, соответствующую 25 мг бе.лка, ацетилировали пятикратным внесением 5 мл 4 н. NaOH и 1 мл уксусного ангидрида в течение 15 мин. Между прибавлением реактивов раствор каждый раз встряхивали и о-хлаждали. Затем щелочной раствор оставляли стоять 10 мин.,после чего подкисляли 10%-ной серной кислотой (с контролем по тимол-синему). Ацетилированные аминокислоты экстрагировались из полученного раствора смесью хлороформа и 17%-ного бутилового спирта. Экстракт упаривали досуха и остаток растворяли в 1—2 мл хлороформа, содержащего 1% бутилового спирта. В таком виде смесь ацетилированных аминокислот была готова для хроматографического анализа. [c.144]

Образование ацетилированных аминокислот было показано в срезах печени при добавлении дейтероацетата [108]. [c.378]

Небольшое количество исследуемого вещества, взятое на кончике ножа, обрабатывают 0,3 мл 2,5%-ного спиртового раствора солянокислого гидроксиламина и 0,3 мл 2,5%-НОГО спиртового раствора NaOH. Смесь упаривают на водяной бане при 76—79° в течение 4—5 мин., но не более. К сухому остатку прибавляют 5 мл раствора хлорного железа. Развивается красно-фиолетовая окраска. Необходимо одновременно ставить контрольные опыты с известными веществами (например, ацетилированной аминокислотой). [c.342]