Хиральные добавки к подвижной фаз

Кислая (Ser, Thr, Суа, Asp, Ghi) и основная (Lys, Arg, His) группы элюируются водным раствором, содержащим хиральную добавку. Для группы, состоящей из нейтральных аминокислот (Gly, Ala, Val, Met, Leu, Ile), к подвижной фазе добавляют ацетонитрил (1%) для уменьшения времени удерживания. Третья группа (Phe, Туг, Тгр) элюируется с добавлением 14% ацетопитрила. [c.338]

В немодифицированной с помощью ЦД буферной системе отрицательно заряженные энантиомеры обладают высокой подвижностью относительно ЭОП, так как они без сопротивления могут проходить сквозь буфер (нижняя электрофореграмма).. Уже небольшие добавки хирального селектора вызывают сильное уменьшение подвижности анализируемых веществ, причем в этом случае наблюдается вполне Достаточная селективность. Разделение при очень низких концентрациях ЦД объясняется различным временем пребывания - и 1-форм в ЦД. Энантиомер с большим временем пребывания в ЦД проявляет меньшую подвижность и детектируется ближе к ЭОП. [c.92]

Разность подвижностей и, соответственно, селективность зависят концентрации ЦД, констант равновесия между анализируемыми хиральным селектором и разности подвижностей в комплексном и состояниях анализируемых веществ. Из вышесказанного следует, что при постоянной концентрации ЦД добавка органического компонента к буферу может изменить константу равновесия в положительную (улучшение разрешения) или отрицательную (потеря разрешения) сторону. Характер изменения зависит в основном от концентрации [c.95]

Разработаны и подробно исследованы методы нековалентной иммобилизации комплексов аминокислот с металлами, обусловленной гидрофобными взаимодействиями с обращенно-фазовым сили-кагелевым сорбентом (алкилсиликагелем). И хотя некоторые из этих методов не требуют добавления хирального селектора в подвижную фазу [130], их следует рассматривать как пограничные по причине их сходства с другими методами, основанными на сочетании обращенно-фазовых нехиральных колонок и подвижных фаз, содержащих хиральные добавки, и мы их рассмотрим в разд. 7.3. [c.146]

Число возможных водородных связей заметно возрастает при переходе к селектору на основе винной килоты. В этом случае, кроме того, наблюдается еще и большая конформационная подвиж-нось, которая придает структуре большую изменчивость, что допускает ассоциацию с широким кругом соединений и, следовательно, более широкую энантиоселективность. Поскольку (к, К)-ДИПАВК был с успехом использован в качестве хиральной добавки в подвижную фазу (см, разд. 7.3), был синтезирован иммобилизованный селектор такого же типа, структурно совершенно аналогичный (К, к)-ДИПАВК. [c.155]

С, , на который предварительно были нанесены Ы-алкил-и-оксипролины С-1, С]о и С1 ) подвижной фазой служил раствор ацетата меди(П) (0,1 мМ) в смеси метанол/вода (15/85 по объему). Все добавки удерживались на сорбенте [g благодаря сильным гидрофобным взаимодействиям и не вымывались из колонки. Таким образом, в данном случае, если содержание воды в элюенте было достаточно высоким, хиральные добавки в подвижной фазе могли отсутствовать. Предполагаемая структура образующегося при этом гетеролигандного комплекса показана на рис. 7.17. [c.158]

Как выяснилось, уменьшение длины алкильной цепи обычно приводит к увеличению селективности. Причина этого не вполне ясна, поскольку количество хиральной добавки, сорбированной на носителе, определено не было. Влияние состава подвижной фазы на разделение в целом выглядит следующим образом а) возрастание [c.158]

Логическим развитием метода ион-парной хроматографии [216, 217] явилось использование хирального противоиона (-Ь)-Ю-кам-форсульфокислоты в качестве хиральной добавки к подвижной фазе для разделения энантиомеров некоторых аминоспиртов [218]. Аминоспирты в протонированной форме образуют с анионом камфор-сульфокислоты вследствие электростатических взаимодействий диастереомерные комплексы. Предполагается, что в комплексе между партнерами возможны и другие типы взаимодействий, и в первую очередь образование водородной связи между кетогруппой и гидроксильной группой, что также влияет на наблюдаемое различие в хроматографическом удерживании (рис. 7.18). Разделение бы- [c.163]

Общее преимущество прямого метода сводится на нет тем фактом, что в настоящее время только несколько типов хиральных хроматографических колонок или хиральных добавок к подвижной фазе являются коммерчески доступными. Тем не менее такую колонку можно использовать неоднократно, что компенсирует ее дороговизну и трудность приготовления. Метод хиральных добавок к подвижной фазе требует постоянного источника (или регенерации) хиральных добавок. Эта проблема также в какой-то степени может быть рещена при использовании аналитических колонок малого диаметра (небольшой расход подвижной фазы), но она будет оставаться серьезной при препаративных разделениях. Кроме того, хиральные добавки к подвижной фазе необходимо в конечном счете отделить от каждого энантиомера после препаративного разделения. [c.116]

Как уже говорилось выше, энантиомерная чистота определяется из относительных площадей пиков сравниваемых стереоизомеров. При использовании хирального агента или хиральной добавки к подвижной фазе диастереомеры в принципе не обязательно вызывают идентичные сигналы детекторов. В методе с использованием хиральной неподвижной фазы элюируются энантиомеры, сигналы которых одинаковы. [c.116]

Хорошо известно, что в принципе энантиомеры можно разделить хроматографически на хиральной неподвижной фазе. Для той же цеди можно использовать хиральные добавки к подвижной фазе. [c.134]

Хиральная неподвижная фаза используется шире, чем хиральные добавки к подвижной фазе. На наш взгляд, первый метод имеет неоспоримые преимущества. Хиральные колонки для жидкостной хроматографии (т. е. колонки с хиральной неподвижной фазой) можно использовать тысячи раз, и при этом не требуется специальной техники. При использовании метода хиральной добавки к подвижной фазе требуется постоянный источник такой добавки ее наличие может затруднить обнаружение энантиомеров или даже потребовать специальных детекторов. Для препаративных целей необходимо также отделять хиральную добавку от уже разделенных энантиомеров. [c.134]

В то же время следует указать, что появилось несколько весьма эффективных применений хиральных добавок к подвижной фазе. В настоящее время метод с использованием хиральной неподвижной фазы опережает метод с применением хиральной добавки как в частоте применения, так и в понимании механизмов хирального распознавания при разделении энантиомеров. Такое понимание необходимо, чтобы можно было по результатам хроматографического разделения установить абсолютную конфигурацию. [c.134]

Хиральные добавки к подвижной фазе.-. Механизм. При разделении энантиомеров на ахиральной колонке с помощью хиральных добавок к подвижной фазе процесс разделения весьма сложен. Разделение может происходить за счет комбинаций диастереомерных комплексов различной стабильности в подвижной фазе, различной адсорбции диастереомерных комплексов или адсорбции хиральной добавки к подвижной фазе неподвижной фазой таким образом, что пос- [c.153]

Большинство методов хиральной добавки к подвижной фазе было разработано при разделении а-аминокислот при лигандообменной хроматографии по методу Даванкова. Во всех этих случаях подвижная фаза содержит комплексообразующий ион металла и хиральную добавку к подвижной фазе, способную к комплексообразованию (обычно аминокислоту, ее производное или хиральный амин). Хотя требования к колонке достаточно просты (октадецил, ионный обмен), проблема состоит в детектировании. Кроме того, часто необходима модификация (предварительная или после разделения на колонке). [c.154]

РИС. 9.2. Разделение к[1слы аминокислот (группа 1) на энаитиомеры иа колонке с (>брап1,ениой фазой. Подвижная фаза хиральная добавка (Си-ДПЛ) в воде. Температура комнатная скорость потока 0,1 мл/мин, через 30 мии- 0,2 мл/мин. [c.339]

РИС. 9.3. Разделение нейтральных аминокислот (группа 2) на энаитиомеры па колонке с обращенной фазой. Подвижная фаза хиральная добавка (Си-ДПА) в воде и водном ацетонитриле (1%-ный). Температура комнатная, скорость п.)тока 0,25 мл/мин. [c.339]

РИС, 9.4. Разделение ароматических аминокислот (Туг, РЬс и Тгр) на знан-тиомеры на колонке с обращенной фазой. Подвижная фаза хиральная добавка (Си-ДПА) в воде и водном ацетонитриле (14%-ный). Температура комнатная, скорость потока 0,5 мл/мин. [c.340]

РИС, 9.5. Разделение основных аминокислот на энаитиомеры на колонке с обращенной фазой. Подвижная фаза хиральная добавка (Си-ДПА) п воде. Температура комнатная, скорость потока 0,2 мл/мин. [c.340]

Было показано, что при разделении энантиомеров важную роль наряду с выбором подходящего хирального селектора играют и другие параметры электрофоретической системы, которые требуют дальнейшей оптимизации. Например, на процесс оптимизации разделения энантиомеров решающее влияние оказывает величина pH. Вследствие того, что разделение энантиомеров методом КЭ основано на различии в подвижностях между - и 1-формами, анализируемые вещества необходимо перевести в ионную форму, что обеспечивается подходящим значением pH. При электрофоретическом движении анализируемых веществ через "квазистациомарную" фазу (в данном случае - ЦД) происходит разделение пары энантиомеров. Важнейшими оптимизирующими параметрами в данном случае являются концентрация хирального селектора в используемой буферной системе, сама буферная система (вид фонового электролита), а также другие буферные добавки, такие как ДДСН, метанол и др. Их [c.90]

С ПОМОЩЬЮ добавки раствора 7 М мочевины можно поднять концентрацию ЦД (случай О). Однако, в данном случае время анализов заметно растет вследствие увеличения вязкости буфера и низкой подвижности анализируемых веществ, обусловленной высокой концентрацией хирального селектора. При этом улучшения разрешения не наблюдается. В данном случае положительное влияние оказывает добавка метанола (Е). Время миграции при этом несколько возрастает, однако достигается лучшее разрешение. Если использовать буфер, соответствующий случаю , вместе с 0.1 М ДДСН, время миграции резко уменьшается (случай В). Это объясняется тем, что в данных условиях ДДСН и анализируемые вещества движутся в одном направлении (оба анионные), тем самым создается синергический эффект. Разрешение по сравнению со случаем (О) резко улучшается, а время анализов уменьшается. И в этом случае добавка метанола в буферную систему приводит к увеличению времени анализов, однако улучшения разрешения не наблюдается (случай С). В рассматриваемых здесь случаях улучшение разрешения определяется в основном более высокой эффективностью конкретной разделяющей среды. Значения а в этих примерах практически не изменяются. [c.96]

В соответствии с этим принципиального различия между описанными выше методами и теми методами, которые рассматриваются в этом разделе, не существует. Так, фаза Пиркла, связанная ионной связью с носителем (см. разд. 7.2.3), является превосходной ХНФ, если она используется в сочетании с неполярными растворителями, так как в этом случае подвижная фаза проявляет очень небольшую тенденцию к вытеснению хирального селектора с сорбционных центров. В этих условиях добавки хирального селектора к подвижной фазе не являются обязательными. Если же селектор закреплен на алкилсиликагеле или другой гидрофобной матрице, вследствие наличия сильных гидрофобных взаимодействий ситуация может быть вполне аналогичной, но все же необходимость сохранения постоянной степени покрытия матрицы обычно требует присутствия селектора в подвижной фазе. [c.157]

Многие из уже описанных принципов образования ковалентносвязанных хиральных фаз можно реализовать путем добавления хирального селектора в подвижную фазу. Все системы такого типа можно разделить на три группы системы, в которых происходит образование комплексов металлов (ХЛОХ), системы с добавками различных незаряженных соединений и, наконец, ион-парные системы, предназначенные для разделения заряженных соединений. [c.157]

Таблица 7.11. Хиральные комплексы металлов, используемые как добавки в подвижную фазу при разделении оптических изомеров методом ХЛОХ

Как выяснилось, для такого контроля очень удобна ЖХ, основанная на методе ХЛОХ с применением подвижной фазы, содержащей добавки хирального соединения (см. разд. 7.3, а также описанный ниже метод) [75]. Хроматографическая система состоит из колонки С, (4,6 X 250 мм), которую уравновешивают с подвижной фазой (водой), содержащей L-фeнилaлaнин (бмМ) и сульфат меди (II) (ЗмМ). Элюируемые соединения обнаруживаются УФ-детектором при 280 нм. [c.202]

Несмотря на большое количество работ механизм удерживания на хиральных фазах с иммобилизованными белками практически невыяснен. Нередко механизм разделения ассоциируют с аффинной хроматографией. Отмечено, что удерживание и энантиоселективность в значительной степени определяются pH и ионной силой водных буферных растворов, используемых в качестве подвижной фазы, а также добавками изопропанола и ион-парных агентов (органических кислот, аминов). Хроматографическое удерживание разделяемых соединений по-разному зависит от перечисленных факторов даже для соединений близких по химической структуре [298]. Очевидно, третичная структура белковых макромолекул обеспечивает наличие множественных (возможно, для каждого соединения своего) хиральных центров, характеризующихся уникальной совокупностью гидрофобных и ионообменных взаимодействий. [c.447]