Разделение нейтральных аминокислот

Целью данной работы являлось изучение кинетических закономерностей сорбции нейтральной аминокислоты лейцина различными катионообменными смолами. К настоящему времени в литературе основное внимание уделялось изучению равновесия и термодинамики сорбции аминокислот [1—3]. Однако кинетические данные имеют существенное значение не только для выяснения механизма процессов сорбции, но и для изыскания возможности практического разделения нейтральных аминокислот. [c.34]

Турба и др. (1943) использовали для разделения нейтральных аминокислот различия в их изоэлектрических точках. Нейтральные аминокислоты по положению их изоэлектрических точек можно расположить в ряд цистин (pH 5,0), серия (5,5), метионин (5,82), лейцин (5,88), валин (5,89), глицин (6,05), аланин (6,11), пролин (6,13). Цистин, имеющий самое низкое значение изоэлектрической точки, адсорбируется в колонке окиси алюминия в слегка подкисленной уксусной кислотой водноспиртовой среде значительно сильнее других компонентов и поэтому может быть количественно от них отделен. Далее к раствору добавляется формальдегид, который, по предположению авторов, значительно повышает кислотность аминокислот, в особенности серина и глицина, благодаря чему последние можно отделить на колонке анионообменной окиси алюминия. Из оставшихся аминокислот формальдегид удаляется и pH раствора доводится до 5,5. Этот раствор затем пропускается через колонку отбеливающей земли — флоридина, на которой происходит отделение основных аминокислот — аланина и пролина и от более кислых компонентов — лейцина, валина и метионина. Последние можно разделить при помощи активированного угля. [c.126]

Приведем ряд примеров разделения нейтральных аминокислот. [c.126]

VI. РАЗДЕЛЕНИЕ НЕЙТРАЛЬНЫХ АМИНОКИСЛОТ [c.314]

Турба разработал подробную схему разделения нейтральных аминокислот. На колонке из окиси алюминия адсорбируется цистин, а все остальные аминокислоты удаляются водно-спиртовой смесью, подкисленной уксусной кислотой. Добавление формальдегида позволяет отделить серии и глицин на колонке из окиси алюминия, обработанной соляной кислотой. Удаляя из фильтрата формальдегид и доводя pH раствора до 5,5, адсорбируют аланин и пролин на колонке из флоридина. В растворе остаются лейцин, валин и метионин, которые разделяют на активированном угле. [c.154]

Автор описал [36] разделение метионина, лейцина, валина и аланина с применением 0,5 %-ного этилацетата в качестве вытесняющего раствора в интерферометрическом приборе, а таюке некоторые другие примеры разделения нейтральных аминокислот на угле. Пептиды также могут быть разделены (см. рис. 13). Возможности метода для этого класса веществ еще не полностью использованы. Из опыта лаборатории автора очевидно, однако, что различия между пептидами велики и что во многих случаях разделение возможно. Однако для пептидов с числом аминокислотных остатков больше двух или трех отклонения становятся значительными, воз- [c.160]

Смесь аминокислот может быть успещно разделена также методом электрофореза на бумаге. При pH 6,0 возможно хорощее разделение кислых и основных аминокислот с нейтральными. В этом случае отрицательно заряженные (кислые) аминокислоты будут двигаться к аноду, а положительно заряженные —к катоду. Нейтральные аминокислоты остаются на линии старта. [c.43]

Следовательно, если, например при хроматографии в тонком слое, основные и нейтральные аминокислоты до Вал имеют необычно высокие значения и вместе с тем разделение в верхней части пластинки оказалось неполным, можно сделать вывод, что pH буферного раствора выше 3,3. К сожалению, большинство приборов для измерения pH недостаточно надежны и точны, поэтому приходится поступать так, как это принято при фракционировании в анализаторе, где pH буферного раствора проверяют по месту цистина . В тонкослойной хроматографии pH также проверяют по относительной подвижности компонентов. В оптимальном варианте цистин располагается между Ала и Вал. [c.256]

Используется наиболее часто. Применяется для разделения нейтральных и кислых белков, пептидов и аминокислот, гормонов, ферментов, РНК, полисахаридов, полярных липидов (особенно фосфолипидов), гемоглобинов и др. Оптимальная область pH 8—9, [c.155]

Обессоливание растворов нейтральных аминокислот с помощью ионитов и новая препаративная методика разделения на группы аминокислот из белковых гидролизатов [194]. [c.216]

Аминокислота может существовать или в виде положительно заряженного иона, или в форме нейтральной молекулы, или в виде отрицательно заряженного иона. Каждой аминокислоте для достижения электронейтральности необходимо свое значение pH, поскольку аминокислоты различаются по значениям их констант диссоциации Ki, К2 и т. д.). При некотором выбранном значении pH часть аминокислот находится в растворе в виде положительно заряженных ионов, в то время как другие существуют в форме цвиттер-ионов или отрицательно заряженных ионов. Такое поведение облегчает разделение смесей аминокислот при помощи таких методов, как электрофорез или ионный обмен, для которых важен заряд частиц. [c.328]

ЭТОМ оказалось, что оптимальная скорость элюирования основных аминокислот достигается лишь при использовании более концентрированных буферных растворов. Однако при значительном изменении концентрации и pH буфера наблюдалось увеличение объема набухшего ионита и возрастание гидродинамического сопротивления колонки. Одновременно повышался уровень базовой линии. Кроме того, в этих условиях после каждого опыта приходилось извлекать иониты из колонки, а затем, после их регенерации, вновь набивать колонку. В итоге оказалось удобнее проводить анализ образца на двух колонках. На первой осуществляли анализ кислых и нейтральных аминокислот, а сумму основных аминокислот вытесняли в конце анализа гидроокисью натрия. На второй, более короткой колонке вначале в виде суммарного пика элюировали смесь кислых и нейтральных аминокислот, а затем осуществляли разделение основных аминокислот. После получения более качественных ионитов и усовершенствования метода детектирования был разработан современный одноколоночный аминокислотный анализ. [c.306]

Для устранения указанных выше недостатков оказалось выгодным производить смолы с определенными характеристиками. Так, сферическая смола типа АА-15 позволяет анализировать все кислые и нейтральные аминокислоты белковых гидролизатов за 4 ч при высоте столбика смолы 56 см основные аминокислоты анализируются на колонке высотой 5 см, заполненной смолой типа РА-35 [130]. Позднее была получена смола типа РА-28, применяемая для анализа аминокислот, обычно обнаруживаемых в таких пробах, как плазма крови или моча. Кислые и нейтральные аминокислоты определяются по методу анализа физиологических жидкостей на этой смоле за 5 с лишним часов основные аминокислоты анализируются в этом случае почти за 6 ч на упомянутой выше смоле типа РА-35 [88]. Названные смолы дают очень сильное увеличение высоты пиков, свидетельствующее о том, что аминокислоты элюируются из сферической смолы в виде более узких зон, улучшая разделение пиков. Несколько позднее появилась смола типа иК-ЗО, с помощью которой можно анализировать кислые и нейтральные аминокислоты как белковых гидролизатов, так и физиологических жидкостей. Преимуществом этой смолы является также и то, что на ней [c.35]

Сравнительно недавно синтезирована смола типа UR-40, которая позволяет определять кислые и нейтральные аминокислоты по методике анализа физиологических жидкостей за 170 мин на колонке высотой 26 см. Основные аминокислоты физиологических жидкостей также могут быть определены на этой же колонке за 210 мин. Одноколоночный метод анализа белковых гидролизатов на этой смоле описан в разд. 1.6. Использование более коротких колонок и улучшение разделения пиков аминокислот стало возможным благодаря устранению специфических перемешивающих узлов (таких, как реактор, подводящие трубки, краны и кюветы), имеющихся в большинстве приборов. [c.36]

Четырехчасовой метод анализа, смолы иН-ЗО, РА-35. Увеличение pH первого буфера (pH 3,25 0,20 н. раствор) для кислых и нейтральных аминокислот всего на несколько сотых долей улучшает разделение пары аминокислот треонин — серин. Увеличение pH второго буфера с 4,25 до 4,41 (0,20 н. раствор) ухудшает разделение пары изолейцин — лейцин. При увеличении pH буфера (pH 5,25 0,35 н. раствор) гистидин элюируется быстрее по сравнению с другими основными аминокислотами. [c.41]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола UR-30, натрий-цитратные буферы. Увеличение pH буфера со значения 3,20 (0,20 н.) до 3,26 (0,20 н.) улучшает разделение аспарагиновой кислоты и треонина приблизительно до 0,10 (отношение высоты впадины к высоте пика). Цистин элюируется быстрее, а глутаминовая кислота перемещается ближе к пролину. Разделение глицина и аланина ухудшается. Увеличение pH буфера оказывает общее влияние на элюирование аминокислот они элюируются из колонки быстрее. [c.42]

Основные аминокислоты, смола иЯ-40. Так же, как и при анализе кислых и нейтральных аминокислот, уменьшение концентрации ионов натрия приводит, как правило, к задержке элюирования аминокислот. Уменьшение концентрации ниже 0,4 н. оказывает незначительное влияние на разделение этаноламина и аммиака, но при этом разделение лизина и 1-метилгистидина уменьшается до 0,45 (соотношение высот впадины и пика). [c.44]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола иЯ-ЗО, натрий-цитратные буферы. По мере повышения температуры улучшается разделение а-аминоадипиновой и а-амино-н-масляной кислот, но ухудшается разделение валина и цистина. Повышение температуры способствует также более полному разделению следующих пар аминокислот аспарагиновая кислота — треонин и тирозин— фенилаланин. При повышении температуры цистин, как и глутаминовая кислота, элюируется из колонки значительно быстрее. Триплет пиков пролин — глутаминовая кислота — цитруллин сжимается, в результате чего ухудшается разделение этих аминокислот. [c.46]

По этой методике можно анализировать 20 аминокислот, которые описаны в разд. 1.3.1.1. Ниже описаны условия анализа этих аминокислот с использованием смол типа иК-ЗО и иН-40. На смоле иК-ЗО анализируются кислые и нейтральные аминокислоты при высоте столбика смолы 56 см. Основные аминокислоты анализируются на колонке высотой 5,5 см, заполненной смолой РА-35. Общая продолжительность анализа составляет около 4 ч. Время анализа можно сократить до 2 ч путем проведения анализа одновременно на обеих колонках с точным расчетом момента включения и переключения колонок. На той же колонке, заполненной смолой иК-ЗО, также можно анализировать все аминокислоты, включая и основные. Для их элюирования используют третий буфер, который подают после разделения кислых и нейтральных аминокислот. [c.55]

РИС. 9.3. Разделение нейтральных аминокислот (группа 2) на энаитиомеры па колонке с обращенной фазой. Подвижная фаза хиральная добавка (Си-ДПА) в воде и водном ацетонитриле (1%-ный). Температура комнатная, скорость п.)тока 0,25 мл/мин. [c.339]

Степень прочности сорбции и десорбции на смоле разных аминокислот, определяемая главным образом величинами зарядов молекул, различна. Наиболее прочно на смоле сорбируются диаминокислоты и наименее прочно — дикарбоновые аминокислоты. Разделение аминокислот при ионообменной хроматографии происходит при десорбции их со смолы элюирующими буферными растворами, отличающимися от исходного буферного раствора большими величинами pH и (или) ионной силы. Обычно для элюции кислых и нейтральных аминокислот используют Ыа-цитратные буферные растворы с pH 3,25 и 4,25. Для десорбции со смолы наиболее прочно связанных (основных) аминокислот используют более щелочной Ыа-цитратный буферный раствор со значением pH 5,28 и более высокой ионной силой (0,35 М). [c.133]

Прибор изготовлен из органического стекла. Он состоит из двух цельных стенок /, пространство внутри разделено целлофановыми мембранами 4. Смесь помещается в среднее пространство 3, а в крайние ячейки 2 наливают дистиллированную воду, после чего включают постоянный ток. По истечении определенного времени в катодном пространстве оказываются все основные, в среднем пространстве —нейтральные, а в анодном — кислые аминокислоты. Практически разделение будет не совсем полным из-за влияния злектрозндоосмоса, который способствует проникновению части нейтральных аминокислот в катодное пространство. [c.532]

Сущность работы. Разделение смеси аминокислот методом ионообменной хроматографии основано на различии в их изоэлектриче-ских точках. Аминокислоты можно условно разделить на три группы основные, нейтральные и кислые. К первым относятся диаминомонокарбоновые кислоты с изоэлектрической точкой, лежащей при pH 7. Нейтральные аминокислоты представляют собой моноаминомонокарбоновые кислоты с изоэлектрической точкой, лежащей в пределах pH = 5,5—6,5. Наконец, кислые аминокислоты являются моноаминодикарбоновыми кислотами. Их изоэлектриче-ская точка находится при рН<5. [c.106]

Тройные комплексы должны обладать достаточной стабильностью, а этому условию отвечает только ограниченный круг рацемических соединений. Поскольку предпочтительными являются пятичленные хелатные кольца, наиболее прочные комплексы образуют такие соединения, как а-амино- и а-оксикислоты. Не удивительно, что (З-аминокислоты (образующие шестичленные хелатные кольца) трудно поддаются разделению методом ХЛОХ [1П]. Прочность комплекса зависит и от числа функциональных групп в молекуле лиганда, связанных с атомом металла. Вследствие этого бидентатные лиганды, например нейтральные аминокислоты, лишенные других полярных заместителей, показывают при хроматографировании на полистирольных сорбентах, содержащих l-Рго или l-HO-Рго-хиральные лиганды, порядок выхода энантиомеров обратный тому, который наблюдается, например, для кислых аминокислот (Asp, Glu) (у этих аминокислот с ионом металла могут координироваться три группы). [c.143]

Заполнение большой колонки для разделения кислых и нейтральных аминокислот при двухколоночном методе. Для одной колонки требуется около 50 г смолы. Большая колонка заполняется так же, как и малая (описано выше), за исключением того, что вслед за обработкой ш,елочью смолу суспендируют в растворе А и последующую обработку в колонке также производят щелочью и раствором А. [c.177]

СМ (карбоксиметил)-целлюлоза. Активные группы —ОСНаСООН, слабокислотные (рК = 3,5—4). Рабочая область pH > 4—5, оптимальное значение pH 6. Применяют для разделения нейтральных и основных белков (альбуминов, гемоглобинов, ферментов), основных аминокислот и пептидов, нуклеиновых кислот, липидов, гормонов, а также клеток и их фрагментов. Используют также для распределительной хроматографии в полярных растворителях. [c.160]

В процессе разделения содержащих аминокислоты проб наименьшее сродство к катионообменной смоле проявляют кислые и оксиаминокислоты. Нейтральные аминокислоты связываются сильнее, а ароматические аминокислоты, в сравнении с нейтральными, имеют еще большее сродство к смоле. Самым большим сродством к смоле обладают основные аминокислоты. [c.16]

Имеется вторая схема анализа, которая обеспечивает лучшее разделение аминокислот при анализе физиологических жидкостей и дает возможность анализировать большее число аминокислот. Для анализа кислых и нейтральных аминокислот используют ту же самую колонку размером 150 X см однако анализ основных аминокислот проводят на колонке 50X0.9 см (см. разд. 1.3). [c.18]

Факторы, влияющие на разделение аминокислот, описаны в разд. 1.4. В некоторых случаях анионная форма смолы дает определенные преимущества, которые помогают в разделении аминокислот и пептидов благодаря их способности образовывать более прочные связи за счет ионизированных карбоксильных групп. Партридж [91] использовал анионообменную смолу для хроматографии аминокислот в этих условиях аминокислоты и пептиды, несущие наименьший отрицательный заряд, связываются смолой в щелочной среде чрезвычайно слабо. Анионооб-менные смолы нашли также применение для разделения нейтральных сахаров в виде боратных комплексов (Оме [92], Грин [93]) было также достигнуто разделение на одной анионообменной колонке смеси оснований, нуклеозидов и нуклеотидов [94]. [c.20]

Двухчасовой метод анализа, смола иК-ЗО для кислых и нейтральных аминокислот. При увеличении pH первого буфера (pH 3,488 0,20 н. раствор) ухудшается разрешение сдвоенных пиков аминокислот треонина и серина. Кроме того, ухудшается разделение между пиками серина и глутаминовой кислоты, глицина и аланина. Цистин в этом случае элюируется быстрее и лучше отделяется от глицина. [c.41]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола UR-30, литий-цитратные буферы. При увеличении pH первого буфера (прочие условия остаются неизменными) с 2,80 до 3,13 аспарагин и глутаминовая кислота вымываются в виде одного пика. Ухудшается также разделение пролина и а-аминоадипиновой кислоты. Дальнейшее увеличение pH до 3,27 приводит к ухудшению разделения таурина и фосфоэтаноламина. Аспарагин и глутаминовая кислота все еще элюируются совместно, но разделение цитруллина и а-амино-н-масляной кислоты улучшается. При повышении pH большинство аминокислот, как правило, вымываются из колонки быстрее. [c.42]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола UR-40. При постоянных значениях температуры колонки, концентрации ионов натрия и цитрат-ионов и постоянной скорости течения буфера увеличение pH первого натрийцитратного буфера (pH 3,175 0,18 и. Na+, 0,133 М цитрат) на 0,010 единиц pH улучшает разделение аспарагиновой кислоты и треонина до величины 0,045 (отношение высоты впадины к высоте пика). В результате увеличения pH буфера на 0,011 цистин выходит быстрее на 1 мин, раньше элюируется глутаминовая кислота, но, кроме того, сжимаются пики трех аминокислот — пролина, глутаминовой кислоты и цитруллина. При увеличении pH буфера ухудшается разделение глицина и аланина. [c.42]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола иЯ-40. Поддерживая постоянными температуру колонки, скорость течения буфера и концентрацию цитрат-ионов, варьируют концентрацию ионов натрия в обоих буферах, первом и втором. Обычно уменьшение концентрации ионов натрия приводит к задержке элюирования большинства аминокислот однако большинство заметных эффектов наблюдается здесь при уменьшении концентрации ионов натрия, что позволяет растянуть пики пролина, глутаминовой кислоты и цитруллина и улучшить разделение изолейцина и лейцина. [c.44]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола иЯ-40. Повышение концентрации цитрата с 0,066 до 0,133 М не изменяет положения глутаминовой кислоты относительно пролина или цитруллина при следующих условиях анализа pH буфера 3,175, концентрация ионов натрия 0,18 н., температура колонки 32,5 °С, скорость течения буфера 60 мл/ч. При увеличении концентрации цитрата улучшается разделение аспарагина и треонина до 0,40 (соотношение вы от впадины и пика). При более высокой концентрации цитрата большинство аминокислот элюируются быстрее. Значительно улучшается разделение глицина и аланина сжимаются пики пролина, глутаминовой кислоты и цитруллина. [c.45]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола иЯ-30, литий-цитратные буферы. Повышение температуры колонки в общем приводит к ускорению элюирования аминокислот. При 30 °С разделение пролина и а-аминоадипиновой кислоты неполное. При повышении температуры ухудшается разделение цистатионина и метионина однако разрешение пиков цитруллина и а-амино-н- [c.46]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола UR-40. Повышение температуры колонки приблизительно на 1,5 °С при неизменных значениях pH буфера, концентрации ионов натрия и цитрат-ионов, а также скорости подачи буфера приводит в основном к ускорению элюирования аминокислот. Разделение аспарагиновой кислоты и треонина улучшается приблизительно до 0,12. Однако глутаминовая кислота элюируется настолько быстро, что не полностью разделяется с пролином. Цистин вымьшается быстрее на 2 мин, а пролин — глутаминовая кислота — цитруллин выходят более узкой зоной и поэтому разделяются хуже. При повышении температуры значительно улучшается разделение тирозина и фенилаланина, но несколько ухудшается разделение изолейцина и лейцина. [c.47]

Анализ кислых и нейтральных аминокислоте использованием литийцитратных буферов. Разделение аспарагина и глутамина в присутствии других аминокислот всегда представляет собой [c.61]

Считают, что различие в разделении аминокислот при использовании литий- или натрийцитратных буферов обусловлено, невидимому, гидратацией. Хефтман [29] объясняет, что скорость ионного обмена в первую очередь контролируется процессом диффузии ионов из смолы и что наименее прочно связываются наиболее гидратированные ионы. Гидратированный ион лития имеет 7,3—10,0 А в диаметре, тогда как ион натрия—5,6—7,9 А. При использовании смолы иН-ЗО продолжительность анализа кислых и нейтральных аминокислот физиологических жидкостей составляет 270 мин, включая определение р-аминоизомасляной кислоты. [c.66]

Разделение аминокислот основано на резличии их изоэлек-трических точек. Например, если в растворе находится смесь аминокислот, обладающих основными и кислыми или нейтральными свойствами, то достаточно пропустить такой раствор сначала через катионит, а затем через анионит, чтобы добиться удовлетворительного группового разделения взятых аминокислот. В этих случаях аминокислоты с основными свойствами поглощаются катионитами, причем степень поглощения зависит от pH среды. [c.191]

Развитие хроматографических методов разделения и идентификации аминокислот значительно облегчило проведение исследований с аминокислотами многие успехи, достигнутые в изучении аминокислот за последнее время, непосредственно связаны с применением хроматографии. Занимаясь разделением аминокислот, Нейбергер [154] в 1938 г. обнаружил, что у ацетил-производных разных нейтральных аминокислот коэффициенты распределения между водой и несмешивающимися с водой растворителями различны. В 1941 г. хМартин и Синг [155] осуществили разделение ацетилированных аминокислот на силикагеле последний служил инертной опорой для водной фазы, через которую протекал неводный растворитель. В дальнейшем эта техника была усовершенствована. Большим достижением явилось использование фильтровальной бумаги в качестве неподвижной фазы [156], что привело к широкому развитию разнообразных методов хроматографии на бумаге (см. Блок и др. [157]). В настоящее время считают, что в процессе разделения веществ на бумаге наряду с распределением между растворяющими фазами играют роль также механизмы адсорбции и ионного обмена. [c.40]