Тушители флуоресценции

Условия синтеза близки к описанным в гл. 15 (см. стр. 302) для красителей — производных цианурхлорида. Синтез обычно ведут в водной среде замещение первого атома хлора в цианурхлориде проводят при 0 С и рНЗ—6 замещение второго атома хлора — при 20—40°С и pH 6—8, а третьего —при 80—100°С и pH 8. При синтезе отбеливателей особенно важно применение чистого исходного сырья и сведение к минимуму побочных реакций часто промежуточные продукты и полученные отбеливатели специально очищают от примесей. Должны отсутствовать окрашенные примеси, недопустимы и бесцветные примеси, которые могут гасить оптические отбеливатели, т. е. снижать их флуоресценцию. Эффект тушения флуоресценции объясняют передачей поглощенной отбеливателем энергии ультрафиолетового света тушителю ранее осуществления акта флуоресценции. Тушителями флуоресценции могут быть не только примеси, но также димеры флуоресцирующих веществ при их достаточно высокой концентрации. [c.454]

Представим себе цепь, у которой на одном конце находится флуоресцентная метка, а на другом - оптическая ловушка. Ловушка является эффективным тушителем флуоресценции, только если оба партнера находятся в тесном контакте. Поместим одну такую цепь в раствор, где все остальные цепи - обычные. Такой эксперимент позволит нам измерить вероятность контакта между двумя концами цепи Е как функцию Ф. Эксперименты подобного типа были недавно выполнены [11]. Скейлинговый закон для Е должен иметь вид [c.88]

При исследовании хемилюминесценции, сопровождающей термический распад различных веществ в средах, способных к окислению, и в инертных растворителях, было обнаружено резкое усиление интенсивности хемилюминесценции при подаче в систему кислорода [42, 220]. Такое влияние кислорода представлялось на первых порах удивительным, так как из литературы известно, что кислород является тушителем флуоресценции и фосфоресценции [223, 224]. Давно уже отмечалось усиление хемилюминесценции кислородом в других системах. Однако этот эффект оставался без объяснения [19]. [c.105]

В отсутствие тушителей флуоресценции эта максимального значения [c.109]

В качестве тушителей флуоресценции могут выступать также примеси посторонних веществ, например нефлуоресцирующих красителей, вводимых в дневные флуоресцентные пигменты наряду с люминофорами. [c.14]

Во-первых, он должен обладать интенсивной люминесценцией. Поскольку в любой среде имеются вещества с собственной флуоресценцией или тушители флуоресценции, то чем выше интенсивность флуо ресценции метчика, тем в меньших количествах он может быть обнаружен. Флуорохромы с низким квантовым выходом не могут быть пригодны для индикации следовых количеств веществ или микроорганизмов. [c.290]

Тушители флуоресценции эозина [c.622]

Не каждый переход из синглетного состояния с низшей энергией в основное состояние сопровождается испусканием кванта света. Е> разбавленном растворе (органические растворители) квантовый выход флуоресценции (т. е. отношение числа испускаемых квантов к числу поглощенных квантов) составляет только 0,3 для хлорофилла а и 0,1 для хлорофилла Ъ [68]. Остальная энергия возбуждения рассеивается в виде тепловой энергии. Выход флуоресценции может значительно изменяться при взаимодействии с другими молекулами. Некоторые из них являются эффективными тушителями флуоресценции, так как они связываются с пигментом и оказываются связанными с ним в момент поглощения кванта света. В случае кол- [c.556]

Новые возможности определения люминесцентным методом катионов с незастроенными электронными оболочками—тушителей флуоресценции открываются при применении гомогенных каталитических реакций [21]. Применение флуоресцирующих реагентов в кинетических методах анализа имеет преимущество по сравнению с цветными, так как дает возможность [c.9]

Усиление некоторых линий элементов может быть связано также с исключением кислорода, который, как известно, является сильным тушителем флуоресценции молекул и атомов [34,40, 41]. Нами было показано, что при использовании электротермического атомизатора интенсивность атомной флуоресценции С(1, Hg, Т1, Ag и В1 в атмосфере воздуха имеет не оптимальную величину, она понижена из-за процессов тушения (рис. 4). Основным тушащим компонентом является кислород. Вычисление времени существования возбужденного состояния атома подтверждает это. Установлено, что эффективность тушащих столкновений равна единице для Hg и Т1, т. е. каждое столкновение возбужденного атома с кислородом приводит к его тушению. Для С(1 эффективность тушения меньше единицы ( 0,36). Замена воздуха на аргон давала выигрыш в чувствительности в 10 раз и больше. При этом чувствительность определения указанных элементов достигала 10 — 10- о/о (табл. 7) [41]. [c.24]

Время облучения не должно быть слишком большим, так как продукты фоторазложения реагента могут создавать трудности и вносить определенный вклад в наблюдаемую флуоресценцию или действовать как эффективные тушители флуоресценции реагента [115]. [c.640]

При исследовании пигментов, адсорбированных на окиси магния, в нашей лаборатории было показано, что даже кислород, который обычно принадлежит к сильным тушителям флуоресценции органических соединений, вызывает возгорание флуоресценции, и только при увеличении давления кислорода сверх определенного предела наступает тушение, имеющее обратимый характер. В этих опытах было также установлено образование флуоресцирующих комплексов адсорбированных молекул пигмента с различными посторонними молекулами [13]. [c.366]

Подобные структурные флуктуации позволяют низкомолекулярным тушителям флуоресценции, в частности кислороду, диффундировать во внутренние области белка, дезактивируя возбужденные состояния. [c.270]

Длительность флуоресценции групп ПБК, обслуживающих непосредственно ре-акционные центры, должна также зависеть и от эффективности самого процесса захвата энергии возбуждения в РЦ, т. е. от процесса фотосинтетического тушения флуоресценции. Последнее обстоятельство определяется не только взаимодействием между РЦ и принадлежащим ему ПБК, но и состоянием самого РЦ. Очевидно, активные РЦ, эффективно трансформирующие энергию электронного возбуждения, дают начало электронному потоку в ЭТЦ фотосинтеза и одновременно являются активными тушителями флуоресценции ПБК. Наоборот, РЦ, которые по каким-либо причинам не могут передавать электроны в цепь фотосинтеза, не в состоянии утилизировать энергию электронного возбуждения, которая, следовательно, остается в ПБК неиспользованной и может высвечиваться в виде флуоресценции с большим временем жизни. [c.297]

Первый процесс (излучательный переход) зависит от вязкости среды и может быть использован для ее измерения. Тушителями флуоресценции являются тяжелые анионы или катионы (Л , Вг , Сз+, Си +), парамагнетики (Мп +, нитроксильные радикалы). Кроме того, наблюдается тушение флуоресценции в полярных растворителях, например в воде. [c.77]

При использовании стандартных праймеров Скорпион имеет место некоторое тушение флуоресценции даже после их гибридизации с ампликоном, из-за пространственной близости флуорофора и тушителя флуоресценции. Дальнейшее усиление интенсивности сигнала в этой системе достигается путем отделения флуорофора и тушителя друг от друга, которые связывают с отдельными олигонуклеотидами, комплементарными друг другу (рис. 25, б). [c.233]

Максимум флуоресценции наблюдается при К — БЗО нм, пропорциональность между тушением и концентрацией сульфид-иона сохраняется в пределах 0,001—0,02 мкг/мл S при концентрации тетрамеркурацетатфлуоресцеина 0,8 мкг/мл. Воспроизводимость определения около 10%. Тушителями флуоресценции также являются тиоацетамид, тиокарбамнд, соединения, содержащие SH-группы, 1 , Вг , ЗОз , N . [c.100]

Комплексы ионов переходных металлов [например, Сг(П1), Ре(1П), Си(II)] в растворе обычно не флуоресцируют, а, наоборот, являются эффективными тушителями флуоресценции других комплексов. Этот эффект тушения, как правило, увеличивается в ряду Мп(П), Ре(П)<Со(11), №(П)<Ре(1П), Си(П), Сг(1П), который соответствует последовательности возрастания устойчивости их комплексов. Это можно объяснить легкостью, с которой ионы переходных металлов участвуют в передаче энергии лри столкновении с возбужденной молекулой. Такая диссипация элек- [c.103]

Природа заместителей и их положение в антраценовом ядре заметно влияют на квантовый выход флуоресценции (табл. 1) [23]. В чистом виде это влияние проявляется при сравнении выходов флуоресценции растворов, из которых удален молекулярный кислород, являющийся сильным тушителем флуоресценции антраценовых соединений [24]. При замещении атома водорода в мезо-положепжа антраценового ядра заместителями с сильными электроноакцепторными свойствами флуоресценция обычно почти полностью тушится. Так, не флуоресцируют в обычных условиях 9-нитро-, 9-бензоил-, [c.30]

В некоторых случаях после длительного облучения система теряет флуоресцентные свойства. Это может быть связано с хи-мическиим превращением, продукты которого действуют как тушители флуоресценции [31, 32]. [c.84]

Сильными тушителями флуоресценции являются галоиды 1, 36. 37]. Из них наибольшее тушащее действие оказывает йод, наименьшее — хлор [37]. Ионы галоидов обычно не мешают выполнению реакций с применением люминесцеь тных органических реактивов. [c.16]

На рис. 17.5 представлены типичные кривые изменения фпуорео-ценшш, полученные путем лазерного фотолиза пирена в мицеллах тритона Х-100 без и в присутствии тушителей, таких, как кислород, 1 и ТГ. Без тушителей флуоресценция мономеров пирена имеет длительные времена жизни, достигающие 320 не в мицеллах неионогенного ПАБ тритона Х-100 и игепала СО-630, Затухание флуоресценции ускоряется в присутствии тушителей, и эффективность тушения описывается уравнением [c.316]

Из данных спектроскопии ЯМР и N3 следует, что молекулы воды, распределенные в гидратных оболочках противоионов, находятся в сильно иммобилизованном состоянии в обратных мицеллах аэрозоль ОТ - Н О -гептан. После завершения гидратной оболочки подвижность воды усиливается и приближается к подвижности обычной воды. Флуоресцентные зонды пирен (Р) и пиренсульфокислота (ПСК) инкубировали в обратных мицеллах и возбуждали рубиновым импульсным лазером с длиной волны 347,1 нм. С целью исследования динамики движения зонда и тушителей флуоресценции следили за затуханием возбужденного синглетного состояния зонда. В случае ионных тушителей движение оказалось весьма затрудненным при низком содержании воды. Однако тушители типа 0 или СН212 свободно диффундируют в таких системах. Константы скорости тушения флуоресценции меньше для гидрофобного зонда пирена, чем для дифильной ПСК в случае ионных тушителей. Этот факт объясняется меньшей вероятностью столкновения между тушителем и ПСК. Паносекундный импульсный радиолиз дифенила в обратных мицеллах приводит к образованию аниона и триплетного дифенила. Изучен последующий перенос электрона и энергии от этих промежуточных форм к акцепторам, локализованным в разных местах мицеллы. Показано, что заряд донора, доступность акцептора, а также микроокружение акцептора существенно влияют на эффективность этих процессов переноса. [c.354]

Примеси, вызывающие уменьшение фототека. Снижение величины фототека может быть объяснено двумя причинами. Нортроп и Симпсон показали, что примеси — тушители флуоресценции— уменьшают фототок. Таким образом, примеси просто отводят энергию возбуждения из системы, прежде чем могут возникнуть носители заряда. Согласно другому механизму, примесь выступает в роли ловушки или рекомбинационного центра носителей заряда, вызывая тем самым также снижение фототока32. [c.69]

Этот порядок близок к последовательности уменьшения их ьмакс1 так что эффективность этих ионов в качестве тушителей флуоресценции оказывается связанной с легкостью переноса заряда от иона. [c.217]

Квантовый выход первичных процессов фотосинтеза достаточно высок. Поэтому указанное сокращение длительности и выхода флуоресценции пигментов в живых системах должно быть главным образом обусловлено не тепловыми потерями, а процессом фотохимической дезактивации синглетного возбуждения состояния S в реакционных центрах фотосинтеза. Независимо от механизма этого процесса РЦ следует рассматривать как естественные фотохимические тушители флуоресценции молекул пигментов светособирающей матрицы. Можно оценить эффективность этого тушения, считая, что в фотосинтетической мембране значения констант р, д, г (см. 1 гл. xxvn) сохраняются неизменными, а процесс тушения флуоресценции при захвате энергии реакционными центрами эквивалентен фотохимической дезактивации кф состояния S молекул антенны. Тогда, подставляя величины т. Б, xi, Bi в формулы (XXVn.l.l)-(XXVn.l.9), найдем, что эффективность использования возбуждения реакционными центрами составляет Ф 0,93 -j- 0,95 (Борисов А. Ю.). [c.296]

Оценка проницаемости белка или доступности отдельных его остатков — очень сложный вопрос. В общем он ставится следующим образом могут ли малые молекулы проникнуть внуть белка и участвовать в химических реакциях или изменять спектроскопические свойства внутренних остатков Для различных малых молекул иногда получаются разные результаты. Например, молекулы кислорода, по-видимому, способны достигать внутренних областей белка и тушить флуоресценцию большинства (или даже всех) остатков триптофана в глобулярном белке. Ионы иода могут достичь только некоторых из них. Вместе с тем и те и другие одинаково эффективны в качестве тушителей флуоресценции, если третичная структура белка разрушена денатурирующими агентами. Неизвестно, обусловлено ли различие во взаимодействиях с нативными структурами зарядом ио-дида, его большими размерами или более тонким локальным влиянием окружения на процесс тушения. [c.113]

Физическое разделение флуоресцентных красителей - репортера и тушителя флуоресценции - в процессе гидролитического разрушения зонда снимает подавление флуоресценции в анализируемой части спектра. Максимальный сигнал флуоресценции получают в том случае, если в зонде оба красителя максимально удалены друг от друга, т.е. находятся на 5 - и 3 -концах олигонуклеотида. Это вызвано, по-видимому, более эффективным расщеплением зонда ДНК-полимеразой [301]. Поскольку ДНК-полимераза может гидролизовать зонд лишь в составе гибрида с ДНК-матрицей, температура стадии элонгации праймера не должна превышать температуру плавления (Гд ) гибрида. Большинство используемых зондов обладают Tj 70°С, поэтому на практике при проведении ПЦР в реальном времени в системе TaqMan стадии отжига зонда и праймеров, а также элонгации объединяют и проводят при 60-62°С. Это приводит к тому, что ДНК-полимераза функционирует в субоптимальных условиях и делает всю систему TaqMan менее эффективной и гибкой по сравнению с системами ПЦР в реальном времени, основанными на других принципах (см. ниже). [c.226]

Молекулярные маяки . Третий тип зондов, используемых для обнаружения специфических продуктов ПЦР в реальном времени, получил название молекулярных маяков (mole ular bea ons) [305, 306] (рис. 23, б). Такие олигонуклеотиды обладают тремя характерными чертами. К 5 - и З -концам молекулярного маяка присоединены, соответственно тушитель флуоресценции и флуорохром. Последовательности, непосредственно примыкающие к этим красителям, самокомплементарны, поэтому в реакционной смеси такие зонды приобретают структуру типа стебель-петля , в которой тушитель и флуорохром пространственно сближены, и флуоресценция флуорохрома-репортера подавлена. В качестве тушителей флуоресценции в этих системах часто используют нефлуоресцирующие хромофоры, которые, получив энергию от флуорофора, рассеивают ее в виде тепла. Область петли зонда содержит последовательность, комплементарную анализируемому продукту ПЦР. При температурах более низких, чем температура отжига зонда на продукт ПЦР, структура стебля сохраняется и молекулярный маяк находится в выключенном состоянии. После образования гибрида между зондом и продуктом ПЦР или денатурации зонда тушитель и флуорохром пространственно разделяются, флуорохром начинает флуоресцировать, то есть маяк зажигается и начинает функционировать. Возбуждение элек- [c.229]

З -Концевая часть олигонуклеотида Скорпион заключает в себе последовательность, комплементарную анализируемому участку ДНК, и в ПЦР выполняет непосредственную роль праймера. 5 -Концевая часть олигонуклеотида сконструирована таким образом, что образует структуру типа стебель-петля . За счет этого происходит сближение флуорофора, присоединенного непосредственно к 5 -концу Скорпиона с тушителем флуоресценции, расположенным в центральной части олигонуклеотида на границе последовательности праймера. В этом отношении пространственная структура олигонуклеотидов Скорпион напоминает таковую молекулярных маяков и выполняет ту же функцию - обеспечивает тушение флуоресценции флуорофора до тех пор, пока олигонуклеотиды находятся в свободном состоянии. Однако, в отличие от молекулярных маяков , участок ДНК, находящийся в петле Скорпиона , комплементарен последовательности нуклеотидов амплифицируемой последовательности ДНК (ампликона), что и обеспечивает ему уникальные свойства. Кроме того, непосредственно за тушителем флуоресценции в цепь ДНК вводится мономер гексэтиленгликоля (HEG), который блокирует прохождение ДНК-полимеразы вдоль матрицы до 5 -конца, т.е. прекращает амплификацию в этой точке, и последовательность, образующая структуру типа стебель-петля , остается неамплифицированной. [c.231]

Тушитель флуоресценции Флуорофор Ж ПЦР-праймер Блокатор [c.232]

Олигонуклеотиды этого типа объединяют в одной (а) или двух (б) молекулах специфический праймер для ПЦР, расположенный в их З -концевой части, флуорофор на 5 -конце, тушитель флуоресценции, находящийся вне праймера ближе к его 5 -концу, и ингибитор (блокатор) синтеза ДНК, препятствующий использованию 5 -концевой части олигонуклеотида во время ПЦР в качестве матрицы. Кроме того, центральная часть олигонуклеотида комплементарна 5 -концевому участку амплифицируемого продукта ПЦР, что удерживает флуорофор вдали от тушителя флуоресценции после образования петли ДНК в фазе отжига праймеров [c.232]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология