Флуоресценция собственная

Если две различные молекулы расположены достаточно близко, они могут влиять на флуоресценцию друг друга. Одна из них, например, может поглощать излучение флуоресценции другой, свидетельствуя о довольно эффективной миграции энергии от одной молекулы к другой при облучении молекулярного комплекса. Такое взаимодействие может происходить между ароматическими аминокислотами, в ферментах и флуоресцирующих коферментах. Следовательно, можно определять и расстояние между этими молекулами. Кроме того, излучаемый отдельными молекулами данного вещества поток энергии определенным образом ориентирован по отношению к излучающей молекуле. Поэтому флуоресценция твердых тел сильно поляризована. В жидких невязких растворителях поляризация флуоресценции небольших молекул обычно мала, так как вследствие броуновского движения молекулы быстро меняют свое положение. Однако у больших молекул, таких, как белки, даже в жидких растворителях наблюдается менее интенсивное броуновское движение за время жизни возбужденного состояния они мало меняют свое положение, и поэтому их флуоресценция сильно поляризована. У флуоресцирующих групп, находящихся внутри белковой молекулы или соединенных с белком в виде комплексов фермент — кофермент или фермент — субстрат, также обнаруживается поляризация флуоресценции. Степень поляризации флуоресценции таких комплексов и влияние на нее различных факторов дают информацию о механизме действия фермента. Все это представляет ценность для анализа не только собственно ферментов, но и вообще всех белков. [c.178]

Локализация по собственной окраске или собственной флуоресценции определяемого вещества [20]. При [c.104]

У флуоресцирующих групп, находящихся внутри белковой молекулы или соединенных с белком в виде комплексов фермент — кофермент или фермент — субстрат, также обнаруживается поляризация флуоресценции. Степень поляризации флуоресценции таких комплексов и влияние на нее различных факторов дают информацию о механизме действия фермента. Все это представляет ценность для анализа не только собственно ферментов, но и вообще всех белков. [c.85]

Абсолютные значения квантовых выходов флуоресценции или фосфоресценции можно рассчитывать по данным измерений в одних и тех же произвольных единицах интенсивности поглощаемого и испускаемого света. Должны быть сделаны поправки на различия в пространственном и спектральном распределениях возбуждающего света и испускаемого излучения, необходимо также знать кривую спектральной чувствительности фотоприемника. Направленный возбуждающий пучок можно рассеять для сравнения с изотропным испускаемым излучением с помощью матовой поверхности или, лучше, с помощью белкового раствора, рассеивающую силу которого можно рассчитать. Процедура коррекции спектрального распределения испускаемого излучения может быть упрощена. Для этого испускаемое излучение образца и рассеянный возбуждающий свет надо последовательно направить на подходящее флуоресцирующее вещество, которое преобразует все падающее излучение в свой собственный спектр флуоресценции с постоянным [c.192]

Флуоресцировать могут многие органические вещесгва и комплексные соединения металлов. Собственной флуоресценцией обладают катионы редкоземельных металлов и уранила ИО . Во многих других случаях о присутствии того или иного соединения (катиона, аниона, нейтральных молекул), не обладающего собственной флуоресценцией, судят по наличию характерной флуоресценции продуктов реакции этого соединения с люминесцентными реагентами, проводя соответствующую люминесцентную реакцию. [c.591]

Рис. 2.38. Зависимость интенсивности флуоресценции (/ф) от pH 1-10 М. раствора собственно комплексона 2.3 68 (1) и в присутствии ЫО М растворов хлоридов 8с + (2), Оа + (3), Lп + (4), А1 + (5)

Заслуживает внимания возникновение флуоресценции в области слабого собственного свечения реагента 2.3.68 (рН<2,5) в присутствии ряда легкогидролизующихся элементов — алюминия, галлия, скандия (рис. 2.38). Так, 8сЗ+ образует флуоресцирующие комплексы в области pH<2, где интенсивность флуоресценции реагента минимальна [532, 533]. [c.278]

Для комплексонов 2-го типа характерна способность образовывать в щелочной области, где собственная флуоресценция лиганда минимальна, флуоресцирующие комплексы с кальцием, барием, стронцием [c.291]

Вещества-люминофоры определяют флуориметрическим методом по их собственной флуоресценции. Если определяемые вещества не являются люминофорами, то для их флуориметрического определения используют люминесцентные реакции. Последние должны сопровождаться возникновением или ослаблением флуоресценции. Как и каждая реакция, применяемая в анализе, люминесцентная реакция должна протекать [c.514]

Оптическая и геометрическая анизотропия коллоидных частиц исследуются методами поляризационной оптики, среди которых основное значение имеет изучение двойного лучепреломления, как собственного, обусловленного оптической анизотропией частиц, так и двойного лучепреломления формы, зависящего от ориентированного расположения асимметричных частиц. Метод двойного лучепреломления при течении особенно широко используется для определения коэффициента вращательной диффузии (III. 9) и линейных размеров вытянутых частиц для той же цели иногда изучают поляризацию флуоресценции. [c.72]

Локализацию дансил аминокислот определяют на влажной хроматограмме по их собственной флуоресценции в ультрафиолете при 360 нм. Этот способ позволяет выявлять до 10" мкмоля дансил-аминокислот [15]. После высушивания хроматографической пластинки интенсивность флуоресценции значительно снижается. [c.237]

Впервые возможность определения рзэ в твердых материалах была обнаружена при изучении природных и искусственных шеелитов [1564, 1778, 1780—1785]. Кристаллический Са 04 под действием ультрафиолетовых лучей испускает непрерывный спектр флуоресценции во всей видимой области. Рзэ, введенные сплавлением в его решетку в ничтожных количествах (порядка 10" — —10 г/г основы), оказываются способными излучать собственные дискретные спектры фосфоресценции, которые и служат для обна-)ужения и определения большинства элементов, за исключением а, Се, Но, УЬ, Ьи и У. Наиболее удобно определять 5т, обладающий самыми интенсивными полосами, и N(1, спектр которого отличается от спектров других элементов наличием излучения в глубокой инфракрасной области, благодаря чему отсутствует влияние остальных рзэ, в том числе и 5т в 100-кратном количестве [1781]. Чувствительность определения индивидуальных элементов приведена в табл. 39. [c.203]

При облучении некоторых веществ ультрафиолетовым светом возбужденные молекулы этого вещества, возвращаясь в исходное состояние, излучают собственное (вторичное или эмиссионное) излучение, сдвинутое в длинноволновую область по сравнению с возбуждающим Уф излучением. Если молекулы этого вещества находятся в возбужденном состоянии (при облучении одноразовым импульсом УФ-излучения) в течение 10 - Ю с, то такое эмиссионное излучение называется флуоресцентным, а описанное явление -флуоресценцией [1]. [c.56]

Метод флуориметрии применяется для определения 8т, Ей, Ос1, ТЬ, Е)у, и, Т1, 8п, РЬ в водных растворах по их собственной флуоресценции. Низкотемпературную флуоресценцию галогенидных комплексов В1(1П), 8Ь(1П), А8(Ш), 8е(1У), Те(1У) используют для высокочувствительного и селективного определения этих элементов. Непереходные элементы, а также лантаноиды определяют по флуоресценции их комплексов с 8-оксихинолином, Р-дикетонами, основаниями Шиффа, азосоединениями, оксифлавонами, родаминовыми красителями и др. органическими реагентами. Разработаны методы определения порфиринов, витаминов, антибиотиков и других органических веществ по их собственной флуоресценции. [c.515]

Флуоресцентное детектирование используют для регистрации веществ, обладающих собственной флуоресценцией или тех, для которых возможно получение флуоресцирующих производных [122,130, 133,135, 136]. [c.352]

Если, однако, можно локализовать разделенные вещества без их далЬ . нейшего превращения, например по их собственной флуоресценции или по поглощению в ультрафиолете на пластинках, покрытых флуоресцирующим составом, и если после экстракции вещества имеются в количествах, достаточных для применения физико-химических методов определения, то эту возможность обычно следует использовать. [c.59]

ИЛИ СОБСТВЕННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ ОПРЕДЕЛЯЕМОГО ВЕЩЕСТВА [c.61]

Растворимые в жирах биологически активные вещества в малых количествах можно обнаружить при освещении по собственной окраске (каротиноиды), по поглощению или флуоресценции (см. табл. 26). Эти данные представляют большую ценность при последующем элюировании и количествен- [c.215]

Реакция гаптена с антителом может быть зарегистрирована с помощью техники спектрофлуорометрии. Как известно, флуоресценция триптофансодержащих белков обусловлена почти исключительно индольными остатками триптофана. Последние, находясь в неполярном микроокружении, флуоресцируют с максимумом при 330 нм в случае облучения белка ультрафиолетом с длиной волны 270—290 нм. Если в активном центре антитела находится гаптен, одна из полос в спектре поглощения которого совпадает с полосой поглощения триптофана, происходит тушение флуоресценции триптофана, содержащегося в молекуле антитела, а следовательно, флуоресценции собственно молекулы антитела (5. УеИск е1 а ., 1963). Такой феномен наблюдается при взаимодействии нитрофенильных гаптенов с направленными к ним антителами. Степень тушения достигает 70% для нерасщепленного антитела и 907о для его РаЬ-фрагмента. Чувствительность метода при использовании чистых антител очень велика на одно определение достаточно 50 иг антител. [c.248]

В качестве сенсибилизатора очень часто применяется ртутный пар, являющийся примером сенсибилизатора, в котором первоначально возникают возбужденные атомы, ([ри облучении смеси реагирующих веществ, содержащей пебольшое количество ртутного пара, светом ртутной дуги образуются возбужденные атомы ртути Hg ( 1), Hg = Hg с энергией возбуждения 112 ккал. Превращепяо энергии возбуждения атома ртути в химическую энергию молекулы (или молекул) реагирующих веществ и является началом собственно импческой реакции. Отметим, что нри давлении 1 тор возбужденный атом ртути за время своей л. изни (1,55-10 сек) испытывает в среднем не болсс одного столкновения поэтому при р тор нужно ожидать большую вероятность флуоресценции и малую вероятность фотохимической активации. [c.167]

Используемые в рентгеновской спсктроскопии трубки характеризуются высокой потребляемой мощностью (3,5 кВт). Ввиду этого предпочитают трубки с вольфрамовым анодом. Излучение флуоресценции особенно велико в том случае, когда собственное излучение рентгеновской трубки имеет длину волны, близкую к краю поглощения определяемого элемента (например, использование анода из хрома при определении К, Са, Т1). [c.204]

Так, образующиеся окрашенные вещества экстрагируются значительно труднее, чем сами разделяемые вещества. Кроме того, сам слой сорбента окрашивается реактивом и возникает необходимость учрта фона слоя. В этом случае можно локализовать разделенные вещества без их дальнейшего превращения, например по их собственной флуоресценции или по поглощению в ультрафиолете на пластинках, покрытых флуоресцирующим составом, а если после экстракции вещества имеются в достаточных количествах, их следует определить физикохимическим методом. [c.103]

Довольно широкое применение в фотохимии при исследовании промежуточных продуктов нашли методы магнитного резонанса. Для исследований как дублетных радикалов, так и молекул в триплетном возбужденном состоянии используется собственно метод электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Хотя в газовой фазе молекулы с орбитальным моментом (например, Ог Дг) также дают парамагнитный резонанс, основной областью применения этого метода являются исследования в жидкой фазе. Один из недостатков собственно метода ЭПР заключается в ограниченном временном разрешении (около I мкс), преимущественно обусловленном параметрами микроволнового резонатора. Метод спинового эха позволяет достигать временного разрешения примерно 50 нс. Однако наилучшее временное разрешение порядка нескольких наносекунд дает метод оптически детектируемого магнитного резонанса (ОДМР). Этот метод относится к большой группе методов двойного резонанса. Переход в микроволновой области распознается не по поглощению, непосредственно измеряемому в микроволновом диапазоне, а по некоторому эффекту, например изменению поглощения или флуоресценции в видимой области вследствие изменений взаимодействия при перераспределении заселенностей спиновых состояний. Мы уже ссылались (см. разд. 3.7) на метод химической поляризации ядер и метод химически индуцированной динамической поляризации электронного спина при изучении поведения радикальных пар. В первом методе используется поляризация рекомбинирующих мо- [c.198]

Многие физические методы анализа — атомная и ядерная спектроскопия, активационный анализ и другие ядерно-физиче-ские методы позволяют проводить количественные определения, минуя стадию разделения. Одиако при этом обычно возникает другая, порою не менее сложная, задача — необходимость разделения аналитических сигналов определяемого и основных компонентов пробы (основы), а также сигналов сопутствующих компонентов, соседних по положению на щкале развертки аналитических сигналов. Так, в рентгено-флуоресцентном методе интенсивность флуоресценции определяемого элемента может падать за счет-частичного поглощения первичного (возбуждающего) излучения сопутствующими элементами и одновременно за счет поглощения ими собственного излучения флуоресценции элемента. С другой стороны, при частичном наложении полос их флуоресцентного излучения на полосу определяемого элемента интенсивность аналитического сигнала определяемого элемента будет возрастать. [c.19]

Пределы обнаружения для этих флуоресцентных реагентов определяются мешающим влиянием фона и квантовой эффективностью. В первом случае собственная флуоресценция пробы, особенно если она содержит, например, сьшороточньш белки, NADH или билирубин, может быть очень высока. Свободный NADH, напрнмер, проявляет максимум поглощения прн 340 нм и [c.588]

Одним из наиболее чувствительных методов детектирования являётся способ, в котором собственную флуоресценцию наблюдают при облучении пластин УФ-светом с длиной волны, возбуждающей флуоресценцию данного соединения. [c.363]

Интересные возможности для детектирования карбамазепина (антиэпилептическое средство) открывает ТСХ с пост-хроматогра-фическим детектированием. Собственная флуоресценция этого соединения (>. зв = 313 нм, >. = 390 нм) нестабильна. Однако она стабилизируется и увеличивается в 20 раз при погружении в реагент 1 (см. табл. IV.7). Выдержка пластины в парах НС1 в течение 5 мин с последующим облучением УФ-светом увеличивает интенсивность флуоресценции по сравнению с интенсивностью в предыдущем способе в 2 раза. Погружение пластины в 20%-й раствор перхлорной кислоты в этаноле увеличивает интенсивность флуоресценции в 20 раз по сравнению с интенсивностью в первом методе. Последующая же обработка реагентом [парафиновое масло— хлороформ — триэтаноламин (1 6 1)] увеличивает флуоресценцию карбамазелина в 30 раз (чувствительность определения 100—900 пг). [c.367]

Пики вылета в амплитудных спектрах обусловлены неполным поглощением в детекторе собственной рентгеновской флуоресценции, возбуждаемой регистрируемым излучением. Комптоновский континиум возникает вследствие вылета из детекторов квантов некогерентного рассеянного излучения. Наличие хвоста в области малых энергий может быть обусловлено как присутствием в объеме детектора областей с неполным сбором носете-лей, так и вылетом из детектора части фото- и Оже-электронов. Обычно суммарная высота пиков помех не превышает 1 % от высоты основного пика. [c.18]

Определению мешают А1, 1п (образуют флуоресцирующие комплексы), Си, Со, N1 (собственная окраска ионов), соли Ре(1П), Т1(1П), хроматы (редокс-действие на краситель), оксикислоты, дикарбоновые кислоты, многоатомные спирты, сахар, фосфаты, фториды (образуют с галлием более прочные комплексы, чем реагент I). Галлий предварительно экстрагируют эфиром из 6 НСЬв присутствии Т1С1з. Следы железа, частично увлеченные в экстракт, отделяют методом хроматографии на бумаге или ионного обмена. Комплекс галлия с реагентом II в водном растворе практически не флуоресцирует, но в бутаноле, амиловом и гексиловом спиртах уже при дневном свете дает интенсивную кроваво-красную флуоресценцию, которая достигает максимума в растворе амилового спирта. Оптимальное значение pH экстракции 4,7. Интенсивность флуоресценции зависит от тех же факторов, которые указаны для соединения галлия с реагентом I, а также от содержания воды в слое амилового спирта. [c.139]

Чтобы избежать дополнительного увеличения, применяют в качестве съемочного аппарата зеркальный фотоаппарат с насадочпыми линзами. Черно-белые фотографии Контрастных хроматограмм лучше всего получать, применяя съемку на просвет. Таигм образом, например, были сфотогра рованы яятна липидов, окрашенные хлоридом сурьмы [15]. При этом часто выступают дефекты слоя. Пластинки с дефектами слоя можно фотогра ровать при комбинированном освещении. Для контрастных хроматограмм применяют только верхнее освещение. Источники света в этом с чае следует разместить с двух сторон, причем угол падения должен составлять 45°. Для черно-белой съемки пятен с собственной флуоресценцией применяют источники УФ-света в области длин волн вблизи 254 лц, аналогично описываемому ниже, и работают с верхним светом. Пленка Ag a АОР или Чтобы исключить рассеянный и отраженный свет, перед объективом [c.50]

УФ-Сиектрофото-метрическое определение после локализации по собственной флуоресценции в УФ-свете [c.54]

При хроматографии в тонких слоях работают стандартным методом (стр. 35). К адсорбенту добавляют 2% светяш егося веш ества 78-супер , вследствие чего слои в УФ-свете в области 254 м х. флуоресцируют. Пластинки с нанесенными на них слоями должны обладать одинаковой активностью, должны иметь слой одинаковой толш ины и одинакового состава, поскольку уже небольшое различие слоев может привести к искажению и смеш ению пятен. Аналогичные аффекты могут быть вызваны также сопутствуюш ими веш ествами или слишком концентрированными растворами, вследствие перегрузки слоев. Для соблюдения стандартных условий камеры, оклеенные фильтровальной бумагой (насыш ение камеры), для каждого хроматографического анализа насыш аются свежим растворителем. Поскольку величины которые следует рассматривать как ориентировочные, могут сильно колебаться, в экстракт для сравнения необходимо добавить чистый витамин. Перед опрыскиванием хроматограммы рассматривают в коротковолновом УФ-свете (254 к[х) на поглош ение, в длинноволновом УФ-свете (365 к[х) на флуоресценцию и с помош ью лампы дневного света для установления собственной окраски. [c.213]

Для определения алкалоидные основания переводили в свободное состояние добавкой бикарбоната и извлекали метиленхлоридом. После упаривания определенный объем раствора наносили в виде полосы на слои силикагеля Г. Зоны алкалоидов, видимые по собственной флуоресценции в УФ-свете, после хроматограф1фования соскабливали с пластинок, элюировали и колориметрически определяли содержание вещества в элюате, добавляя соответствующий реактив (см. стр. 54 и 292). [c.335]

Для анализа используют приведенные в табл, 84 растворители. После разделения некоторые пластификаторы можно обнаружить в УФ-свете (366 по их собственной флуоресценции, а фталатпроизводные — в виде темных абсорбционных пятен. Кроме того, пластификаторы могут быть идентифицированы по различным цветным реакциям (реактивы № 1206, 151 и др.). Для обеспечения хорошей воспроизводимости вместо величин Rf найдены величины Rgt, отнесенные к дибутилсебацинату (100). 3 критические пары веществ 5—6, 5—7 и 7—9 (см. табл. 84) нельзя разделить в приведенных растворителях, однако их идентификация возможна с применением [c.356]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология