Пиримидины, разделение

Разделение методом ХТС и методом хроматографии на бумаге пуринов и пиримидинов, а таюке их нуклеозидов (растворитель — вода) [69] [c.444]

Одновременное разделение пуринов, пиримидинов, аминокислот и других азотистых соединений ионообменной хроматографией [1473]. [c.211]

Рис. 37.5. Разделение пуринов и пиримидинов на колонке со смолой дауэкс 1.

Схема разделения гуминовых соединений, пуринов, пиримидинов и керогена [c.21]

В условиях, в которых проходит лишь частичный гидролиз нуклеиновой кислоты -РНК-азой, кривая хроматографического разделения должна иметь вид, приведенный на рис. 7.3. В этом случае радиоактивность фиксируется в пиках, соответствующих 3,7,10,12 и 13 отрицательным зарядам, откуда следует, что G присутствует в положениях 5,9,12,14 и 15 от З -конца. Подобный подход в случае продуктов гидролиза нуклеиновой кислоты панкреатической РНК-азой позволил бы установить положения пиримидинов. [c.133]

Основная часть соединений пиримидина (см. № 13) (например, инсектицид диазинон) после первоначального разделения Нитрат гуанидина некоторые соли гуанидина (см. № 187, 270) мочевина (см, № 7) тиомочевина (см. № 63, 199, 276, 296, 311, 324) Вторичные и третичные алифатические амины (технические) их смеси (см. № 47) [c.359]

В ряде работ [434, 435] описано хроматографическое разделение некоторых белковых гидролизатов на колонне, наполненной крахмалом, с последующим определением в элюате отдельных аминокислот нингидринным методом. Такой же способ был применен для разделения тимина, урацила, аденина и некоторых других пуринов и пиримидинов [266]. Для разделения смеси некоторых аминокислот использована хроматография на бумаге, а также и ионообменные емолы (амберлит Ш-4В) [229, 238, 263, 271] для разделения основных аминокислот предложен пермутит [479]. [c.222]

Второй, разработанный А. Максамом и В. Гильбертом, сводится к химической модификации пуриновых и пиримидиновых оснований в ДНК или ее фрагментах, избирательном расщеплении фосфодиэфирных связей по месту модифицированных оснований, разделении продуктов расщепления электрофорезом в полиакриламидном геле и прямому считыванию структуры фрагмента ДНК с полученных электрофореграмм (число полос на электрофоре-грамме продуктов расщепления фрагмента ДНК с модифицированным азотистым основанием равно числу нуклеотидных остатков, содержащих этот пурин или пиримидин, а их положение на электрофореграмме указывает место этого нуклеотидного остатка в анализируемом фрагменте ДНК). [c.203]

С и А но заряжены, но различаются по степени гидрофобности). За ними следуют UMP н GMP — здесь, помимо гидрофобности, играют роль отрицательные заряды U и G. Далее выходят динуклеотиды в том порядке, который диктуется зарядами входящих в их состав оснований АС—GG—AU—GU (последнее основание после гидролиза панкреатической РНКазой — всегда пиримидин). Затем элюируются тринуклеотиды также в соответствии с пропорцией в их составе незаряженных и отрицательно заряженных оснований, начиная с ААС (этот тринуклеотид выходит даже раньше динуклеотида GU) и кончая GGU. Разделение занимало около 20 ч [Aste-riadis et al., 1976]. [c.320]

С этой же целью можно использовать и аминосиликагель. На рис. 4.39 представлены данные из [126] по удерживанию производных пиримидина на Зорбаксе С8, Сепароне СЫ и Сепароне N42. Величины удерживания, изображенные таким образом, характеризуют сравнительную селективность двух систем. Если точки располагаются вдоль одной линии, это означает, что по селективности данные системы сходны и не следует ожидать существенного изменения характера разделения при замене одной ко- [c.167]

Существует три этапа в этом классическом методе анализа последовательности. Первоначально РНК расщепляют иа фрагменты умеренной длины (примерно 50 пар оснований) частичным гидролизом РНазой. Затем анализируют общий состав оснований этих дискретных фрагментов с последующим их расщеплением до маленьких блоков, для которых можно непосредственно установить последовательность оснований. И наконец, большие по размеру фрагменты располагают в нужном порядке, используя частичное перекрывание последовательностей. Такие частичные перекрывания возникают в результате различных способов расщепления, получаемых при действии панкреатической РНазы (специфичной к пиримидинам) и такадиастазы Т] (специфичной к гуанозину). Сложное разделение большого числа фрагментов, получаемых в результате частичного расщепления нуклеазами, удается наилучшим образом осуществить при использовании двумерного разделения ( фингерпринт ), сочетая ионофорез на ацетате целлюлозы при pH 3,5 в одном направлении и ионофорез- на ДЕАЕ-целлюлозной бумаге при кислых значениях pH [30]. Во всех случаях фрагменты детектируют без деструкции с использованием Р-меченных нуклеотидов. [c.193]

Согласно Тамму, Шапиро, Лифшицу и Чаргафу [88], дистиллированная вода пригодна для разделения методом хроматографии на бумаге пурин-и пиримидин-оснований и их нуклеозидов. Рандерат [69, 71], а также Рандерат и Струк [70] нашли, что вода обеспечивает также хорошее разделение на слое целлюлозы в течение 45 мин. Рандерат [69] использовал воду для фракционирования пуклеооснований и нуклеозидов на силикагеле Г. [c.443]

Кон, впервые сообщивший в 1949—1950 гг. о ионообменной хроматографии осколков нуклеиновых кислот на синтетических обменных смолах [16—18], затем указал, что разделение этих веществ нужно проводить методом анионо- или катионообменной хроматографии [23]. Он применил оба вида хроматографии для разделения пуринов и пиримидинов [16], нуклеозидов и нуклеотидов [17—19, 24, 46]. [c.446]

Слой эктеола, в зависимости от растворителя, может служить в качестве неподвижной фазы при распределительной хроматографии или в качестве ионообменника. Дистиллированная вода в качестве растворителя пригодна для разделения пуринов и пиримидинов, а также их нуклеозидов, на слоях [c.448]

Ионообменные смолы обычно наиосят иа пластинки в виде смесей с целлюлозой (ср. [32]). В этих целях можно использовать большое число товарных продуктов (см. гл. 5, разд. 5.6) с гранулами размером 40—80 мкм, например дауэкс-50. Его сначала переводят в требуемую форму, после этого смешивают в ступке 5 г порошка целлюлозы МНЗОО с несколькими миллилитрами дистиллированной воды и к этой смеси небольшими порциями добавляют при перемешивании суспензию 30 г ионообменника в 20—30 мл воды. В заключение добавляют еще 25 мл воды. Полученную суспензию наносят слоем толщиной Ю,25 мм и сушат при комнатной температуре. Приготовленные лластинки хранят в закрытой коробке, причем их надо обязательно использовать в течение недели. Некоторые фирмы выпускают готовые слои ионообменников, нанесенные иа гибкую фольгу (см. табл. 9.5). Перед употреблением их нужно выдержать 16 ч с соответствующим буферным раствором (см. разд. 9.8.3). Эти пластинки применяют в тех же целях, что и слои с целлюлозными ионообменниками, например для разделения аминокислот, нуклеотидов, пуринов, пиримидинов, неорганических ионов, антибиотиков и т. п. [c.108]

Пурины и пиримидины. Окончательное разделение и очистка оснований осуществляется одномерной хроматографией на бумаге (ватманская фильтровальная бумага № 1). Для этого существует несколько типов распределительных сред н-бутиловый спирт и гидроокись аммония пригодны в тех случаях, когда отсутствует гуанин в присутствии гуанина хорошие результаты получаются при использовании смеси изонронанола и соляной кислоты (Linskens, 1959). Места пятен определяют с помощью ультрафиолетового света. Количественный анализ заключается в элюировании пятен и спектрофотометрическом измерении. [c.28]

Дезоксирибонуклеаза стрептококка (стрептодорназа) также расщепляет межнуклеотидные связи, образуя фрагменты различной длины, несущие на конце 5 -фосфатную группу. При этом получаются главным образом олигодезоксинуклеотиды с длиной цепи более двух нуклеотидов, а также небольшое количество динуклеотидов и следы мононуклеотидов [357]. Анализ этих продуктов указывает на преимущественное расщепление связей ф5 -пиримидин-3 -ф5 -пурин, т. е. действие этого фермента комплементарно действию панкреатической дезоксирибонуклеазы I. Оба эти фермента действуют при одних и тех же условиях pH, требуют присутствия одинаковых ионов металлов и оба являются эндонуклеазами (расщепляют цепь не постепенно, а сразу по всей ее длине) [357]. Присутствующие в каждом случае в гидролизатах следы мононуклеотидов могут представлять собой концевые нуклеотиды цепи ДНК. Не вполне ясно, заключается ли действие всех таких ферментов на нативную двуспиральную дезоксирибонуклеиновую кислоту в расщеплении межнуклеотидных связей с последующим разделением олигонуклеотидных тяжей [358] или, наоборот, в разрыве водородных связей и разделении цепей ДНК, за которым следует гидролиз ковалентных связей. Существуют некоторые данные, показывающие, что на начальных этапах действия дезоксирибонуклеазы гидролизу предшествуют структурные изменения [359]. [c.422]

Дозе и Ризи [92] использовали электрофорез высокого напряжения на слоях агара для разделения компонентов смеси нуклеиновых кислот с последующей спектроскопической идентификацией их. Вайнер и Зак [93] разделили методом электрофореза пурины и пиримидины рубонуклеиновой кислоты на тонких слоях геля агара, нанесенных на тефлоново-стеклянную бумагу (Fiberfilm Т-20, А-60, Pallflex). Для денситометрических измерений применяли также тонкие слои агара на кварцевых [c.135]

Методы хроматографии на бумаге были применены также для контроля химических синтезов пуринов, пиримидинов, пуклеозидов и нуклеотидов, а также при изучении предшественников пуринов, метаболизма пуринов и пиримидинов, для контроля полноты ферментативного расш,епления пуриновых пуклеозидов, при разделении изомеров нуклеотидов. [c.518]

Таким путем удается добиться и разделения сахаров. Хроматография на бумаге была применена для качественного анализа редуцирующих сахаров в таких разнообразных материалах,. как яблочный сок, яичный белок и кровь [49, 216]. Для локализации положения отдельных сахаров на бумаге был применен аммиачный раствор окиси серебра, хотя в более поздней работе указывается, что флуоресценция, появляющаяся после конденсации редуцирующего сахара с ж-фенилендиамином, дает более надежные результаты. Как силикагель, так и фильтровальная бумага были применены для хроматографического разделения органических кислот, выделенных из фруктов [99, 139]. На этом же принципе основано определение молочной кислоты в молоке и янтарной — в яичных продуктах [60]. Особый интерес для биохимика представляет применение хроматографии на бумаге для разделения пуринов, пиримидинов и нуклеозидов из гидролизата нуклеиновой кислоты [134]. Удалось улучшить метод определения витамина В в рыбьих жирах и продуктах облучения эргостерина, основанный на измерении характерной абсорбции в ультрафиолетовом свете или интенсивности окраски производных с треххлористой сурьмой точность определения была значительно повышена после хроматографического удаления примесей, мешающих определению [79, 95]. [c.164]

Так как известно, что основания нуклеиновых кислот обладают электронодонорными свойстшами [438], пиримидины подобно триптофану должны тушить триплетные состояния фурокумаринов посредством переноса заряда. Если это действительно так, то, по-ви-димому, полного разделения заряда не происходит, ибо в экспериментах с тимином или другими пиримидинами наблюдались очень слабые долгоживущие спектры поглощения II19]. [c.346]

Для разделения пуриновых и пиримидиновых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов используются различные хроматографические методы. В случае нуклеотидов используется также электрофорез. Эти методы пригодны и для разделения производных рибозы и дезоксирибозы. Разделение нуклеотидов зависит от присутствия в пуринах и пиримидинах способных к ионизации групп, а именно енольных гидроксидных групп урацила, тимина н гуанина с рК в интервале от 9 до 12,5 и амииогрупп аденина, гуаиина и цитозина с рК между 2 и 4,5. Кроме того, все нуклеотиды обладают двумя кислотными группами замещенной фосфорной кислоты с р 1 1 и рК 6. [c.214]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология