Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Белки, исследование с помощью ультрацентрифуги

    При очень малых частицах, близких по величине к большим молекулам (например, белки), надо принимать ео внимание еще одну силу — силу диффузии, препятствующую оседанию частиц. Сведберг дал подсчеты и для этого случая. Начиная с 1930 г. Сведберг и его сотрудники с помощью ультрацентрифуги предприняли исследование молекулярных весов белков и целлюлозы и получили гораздо более достоверные величины, чем дали прежние физико-химические методы. В табл. 4 приведены некоторые из найденных величин [c.29]


    Наконец, в последней главе обсуждается вопрос об исследованиях высокомолекулярных веществ с помощью ультрацентрифуги. Ультрацентрифугирование позволяет получить надежные данные о среднем молекулярном весе и о распределении молекул по молекулярным весам, а также о форме удлиненных молекул (отношение длины к поперечнику). Важность получения этих сведений не приходится доказывать, особенно ввиду того значения, которое приобрело исследование белков и синтетических высоко-полимеров за последние десятилетия. [c.8]

    Исследования с помощью ультрацентрифуги могут в принципе дать наиболее подробные сведения о молекулярных свойствах синтетических и природных высокополимерных соединений, но практическое применение ультрацентрифуги ограничено вследствие трудности проведения опытов с чрезвычайно разбавленными растворами, а также из-за недостаточной разработанности теории поведения растворов цепных молекул в центробежном ноле и трудоемкости обработки эмпирических данных (стр. 471). Последние теоретические работы (стр. 481) указывают, однако, что методы ультрацентрифугирования, несомненно, займут в онределении молекулярных свойств высокополимерных соединений такое же место, какое они занимают сейчас в исследовании белков. [c.551]

    Установлено, что белки могут иметь весьма различные размеры и форму. Определение молекулярной массы и размеров молекул белка выполняется с применением мощного арсенала физических методов исследований. Молекулярные массы можно определить с помощью измерения скоростей диффузии, скоростей седиментации в ультрацентрифуге, рассеяния света и даже путем измерения размеров индивидуальных больших по размеру молекул белка методом электронной микроскопии. [c.510]

    Ультрацентрифуга, разработанная Сведбергом, развивает центробежную силу, превышающую приблизительно в 500 ООО раз силу земного притяжения. Центробежная сила пропорциональна радиусу вращения и квадрату скорости вращения. Если на белковый раствор воздействовать очень большой центробежной силой, то процесс седиментации белка будет протекать гораздо быстрее, чем процесс диффузии. Первоначально белковые молекулы равномерно распределены в растворителе, но под действием центробежной силы они удаляются от оси вращения и между водой и белковым раствором образуется довольно четкая граница. В области границы заметно изменяется показатель преломления, и это позволяет следить зг движением границы во время центрифугирования с помощью различных, специально сконструированных оптических систем. При исследовании однородных молекул наблюдается одна-единствен-ная граница. Если же присутствуют два белка и они достаточно различаются по размерам молекул, то образуются две границы. Скорость движения границы выражается формулой [c.15]


    Установлено, что белки могут иметь весьма различные размеры и форму. Определение молекулярных масс и размеров белков было выполнено с применением мощного арсенала физических методов исследований. Молекулярные массы можно определить с помощью анализа отдельных компонентов (см. упражнение 20-23), измерения скоростей диффузии, скоростей седиментации в ультрацентрифуге, рассеяния света и даже путем измерения размеров индивидуальных, очень больших по размеру молекул белка методом электронной микроскопии. Сведения о форме молекул получают, измеряя скорости молекулярной релаксации после электрической поляризации, исследуя изменения в оптических свойствах (двойное лучепреломление), возникающие в струе жидкости, непосредственно с помощью электронной микроскопии и, что имеет, быть может, наиболее важное значение, исследуя интенсивность рассеяния света и рентгеновского излучения как функцию угла рассеяния. Применение всех этих методов часто встречает трудности вследствие высокой степени гидратации белков, а также в результате того, что многие белки вступают в обратимые реакции ассоциации, образуя димеры, три-меры и т. д. Молекулярные массы, молекулярные параметры и изоэлектрические точки ряда важных белков приведены в табл. 20-2. [c.125]

    Растворы белков обладают многими свойствами, которые характерны для лиофильных коллоидных растворов. Молекулы белков не проходят через полупроницаемые мембраны, и это используется для их очистки от низкомолекулярных примесей при помощи диализа. Представляет большой интерес определение размеров, формы белковых молекул и молекулярных весов белков. Для этой цели используется целый ряд физико-химических методов. Так, белки в растворах седиментируют в ультрацентрифугах при ускорениях до 200 ООО g , величины констант седиментации колеблются от 1 Ю до 90—100 сек. Коэффициенты диффузии — в пределах от 0,1 10 до 10- 10 средний удельный объем — около 0,75 см г. Размеры и форму (асимметрию) частиц белка определяют, кроме того, методами светорассеяния, двойного лучепреломления в потоке, измерениями вязкости, коэффициента вращательной диффузии, но, по-видимому, наиболее точно — прямым наблюдением в электронном микроскопе в тех случаях, когда молекулы белка достаточно велики и когда удается преодолеть технические затруднения. Молекулярные веса, кроме названных выше способов, определяют методами осмометрии, гель-фильтрации, исследованием монослоев белков на поверхности жидкой фазы, светорассеяния и др. [c.30]

    Разработаны химические методы определения величины полинептидных цепей белковой молекулы. Эти методы основаны на использовании особого реагента (динитрофторбензола), который соединяется со свободной а-амино-грунной аминокислотного остатка, стоящего на конце нолипептидной цепи, с образованием окрашенного комплекса этот комплекс можно выделить и идентифицировать после того, как белок подвергнется гидролизу на составляющие его аминокислоты (в том числе и на конечную аминокислоту с присоединенной к ней окрашенной группой). Так, лизоцим, белок, содержащийся в слезах и яичном белке и обладающий свойством уничтожать бактерии, имеет, как было установлено ири помощи ультрацентрифуги, молекулярный вес около 14 ООО и состоит примерно из 125 аминокислотных остатков. Применение описанного метода позволило показать, что имеется лишь одна свободная а-аминогруппа, и на этом основании был сделан вывод, что данная молекула состоит из одной нолипептидной цепи. Если эта полипептид-ная цепь была бы растянута, то ее длина составляла бы около 450 А. Однако, как установлено при помощи ультрацентрифуги, дифракцией рентгеновских лучей и другими методами исследования, молекула лизоцима по форме близка к шару с диаметром около 25 А. Отсюда следует, что нолипептидная цепь не может быть вытянутой, а должна быть скрученной, ибо только тогда молекула приобретет сферическую форму. [c.487]

    При помощи ультрацентрифуги возможно определение молекулярного веса и степени полидисперсности различных высокомолекулярных соединений. До сих пор при помощи ультрацентрифуги широко изучались протеины. При этом было найдено, что многие природные белки в основном являются полп-дисперсными, а величина частиц, выраженная в единицах молекулярного веса, составляет число, кратное 17 600. При исследовании. полистиролов было обнаружено, что молекулярные веса, найденные с помощью ульграцентрифуги, вполне совпадают с молекулярными весами, найденными осмотическим методом для тех же препаратов. [c.59]

    Высокомолекулярная фракция была сконцентрирована в нативном состоянии с помощью сефадекса приблизительно в 30 раз, и при исследовании ее в ультрацентрифуге ФИВЕ на диаграмме седиментации был обнаружен один пик с константой седиментации ( 20,ж), равной 5,94 5. Таким образом, из секрета печеночных митохондрий выделено два усиливающих фактора, из которых один оказался адениннуклеотидом, а другой — белком. По-видимому, в первую очередь, когда гиалоплазма еще лишена коэнзимов гликолиза, действует аденнннуклеотид. Это действие дает гликолизу первый импульс. Затем, после насыщения ферментов коэнзимами, наступает действие белкового фактора это действие вызывает дальнейший подъем гликолиза. [c.115]


    Более четверти века тому назад в самой первой статье замечательной серии — Успехи энзимологии — Булл назвал ультрацентрифугу наиболее важным из всех известных к тому времени инструментов, используемых для физических исследований белков . С тех пор появилось много новых ценных приборов, однако среди методов исследования биологических макромолекул уль трацентрифугированию по-прежнему принадлежит главная роль. Как хорошо известно сейчас почти каждому образованному человеку, даже если он и не ученый, рентгеноструктурные исследования ДНК, выполненные Уилкинсом, и их интерпретация Уотсоном и Криком в 1953 г. вывзали в биологии революцию. Огромный объем современных знаний об этих макромолекулах— носителях наследственности, а также о процессах биосинтеза белка в клетках получен в значительной мере благодаря многочисленным тонким исследованиям, проведенным с помощью ультрацентрифугирования. [c.7]

    Наилучшим примером применения ультрацентрифуги для изучения химического изменения белка может служить исследование влияния этерйфикации на молекулярную агрегацию инсулина. Моммертс и- Нейрат [152] получали метиловый эфир инсулина, обрабатывая инсулин метанольным раствором кислоты при 0 или 25° в течение различных промежутков времени. Процесс этерйфикации изучался при помощи ультрацентрифугирования в растворах с рН 3,7 и ионной силой 0,1 и 0,2. В отличие [c.342]

Смотреть страницы где упоминается термин Белки, исследование с помощью ультрацентрифуги: [c.411]    [c.84]    [c.451]    [c.27]    [c.341]    [c.397]    [c.218]    [c.397]   
Физические методы органической химии Том 2 (1952) -- [ c.538 , c.546 ]

Физические методы органической химии Том 2 (1952) -- [ c.538 , c.546 ]



ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Белки исследование в ультрацентрифуге

Ультрацентрифуга

Ультрацентрифуга, исследование белко



© 2025 chem21.info Реклама на сайте